Metode savremene dijagnostike helmintioza. Metode za određivanje održivosti jaja i larvi helminta

Uzorkovanje i konzervacija

Za istraživanje se uzima fekalija različitim mjestima porcije u količini od 50 g iu čistoj staklenoj ili plastičnoj posudi sa čvrstim poklopcem šalju se u laboratorij. Svježi izmet se ispituje (ne više od jednog dana), au nekim slučajevima (u studiji na strongiloidijazu) odmah nakon defekacije. Predloženi su brojni konzervansi za feces koji sadrži jaja helminta: 4-10% rastvor formalina, koji se mora zagrijati na t° 50-60° kako bi se spriječio razvoj jaja ankilostoma; mješavina 0,2% vodenog rastvora natrijum nitrata (1900 ml), Lugolove otopine (5 g joda, 10 g kalijum jodid, 250 ml vode), formalin (300 ml) i glicerin (25 ml), u kojima se jaja helminta čuvaju 6-8 mjeseci; mješavina glicerina (5 ml), formalina (5 ml) i vode (100 ml); otopine 1-1,5% deterdženata "Lotus", "Extra", "Barf", "Tide" itd. (u težinskom omjeru izmeta i otopine deterdženta 1: 5); mješavina mertiolata 1:1000 (200 ml), formalina (25 ml), glicerina (5 ml), destilovane vode (250 ml) uz dodatak 0,6 ml Lugolove otopine (na osnovu 1 g fecesa na 10 ml smjesa).

Za dijagnozu helmintioza koriste se makro- i mikrohelmintoskopske metode za ispitivanje fecesa.

Studije makrohelmintoskopije

Metoda poravnanja

Dnevna porcija fekalija se temeljito pomiješa sa 5-10 puta većom količinom vode, sipa se u visoke staklene cilindre (tegle, kante) i ostavi dok se suspendirane čestice potpuno ne slegnu. Gornji zamućeni sloj se pažljivo ocijedi i na vrh se dodaje čista voda (ponavljati nekoliko puta dok voda iznad taloga ne postane prozirna). Drain gornji sloj, prenesite talog u kivetu ili Petrijevu posudu i pogledajte ga (na tamnoj pozadini) pod lupom ili golim okom.

Metoda skrininga

Fekalije pomiješane sa vodom postavljaju se na gornje sito uređaja, koje se sastoji od sistema sita sa otvorima sve manjeg prečnika, uređaj se povezuje na vodovodnu mrežu i otvarajući slavina za vodu, oprati, a nastala tečnost se ispušta u kanalizaciju. Veliki helminti ostaju na gornjem situ, dok se manji zadržavaju na donjem. Sita se okreću i, nakon što se ispere sadržaj u tamne kivete, gledaju golim okom ili pod lupom.

Studije mikrohelmintoskopije

Provodi se u cilju otkrivanja jaja (helminto-ovoskopske metode - boja. sl. 1) ili larvi helminta (helminto-larvoskopske metode).

Helmintoovoskopske metode

Kvalitativne metode bez obogaćivanja

nativni razmaz. Ne veliki broj izmet se triturira na stakalcu u kapi 50% rastvora glicerina ili prokuvane vode. Velike čestice se pažljivo odstranjuju, smjesa se prekrije pokrovnim staklom i pregleda se pod mikroskopom (gledaju se dva razmaza). Pogodnije je i lakše pripremiti dugačke razmaze između dva stakalca. Nativni razmaz se koristi samo kao dodatak metodama obogaćivanja, jer nije dovoljno efikasan, posebno kod slabih invazija.

Debeli premaz celofanom po Katu(K. Kato, 1954) je veoma efikasan metod istraživanja. Komadi hidrofilnog celofana (veličine 4x2 cm) natopljeni su 24 sata u mješavini glicerola (50 ml), 6% rastvora fenola (500 ml) i 3% vodenog rastvora (6 ml) zelenog malahita (potonji je po izboru ). UREDU. 100 mg fekalija se razmaže na stakalcu i, prekriven komadom mokrog celofana, pritisne gumenim čepom br. 5. Preparat se ispituje nakon 30-60 minuta, kada se malo osuši i razbistri, kao rezultat čega se jaja helminta lako otkrivaju pod malim povećanjem mikroskopa.

Kvalitativne metode sa obogaćivanjem (metode plutanja i taloženja)

Prvi se zasnivaju na upotrebi zasićenih rastvora različitih hemikalija. tvari u kojima jaja plutaju zbog razlike u specifičnoj težini.

Kofoid-Barber metoda(Ch.A. Kofoid, M. A. Barber) modificirao Fulleborn (F. Fulleborn, 1920). UREDU. 5 g izmeta u visokoj i uskoj tegli (zapremina 100 ml) se promeša drveni štap u 100 ml zasićene otopine kuhinjske soli, tukli. težina to-rogo 1,18 (400 g soli se rastvori pri ključanju u 1 l vode). Isplivao na površinu velike čestice brzo ukloniti štapom ili komadom papira. Nakon taloženja smjese 45-90 min. žičana petlja (0,8-1 cm u promjeru) uklanja cijeli površinski film, prenosi ga na staklo. Prilikom testiranja na jaja ankilostome, smjesa se ostavi da odstoji 10-15 minuta. Film možete ukloniti direktno staklenim predmetom koji prekriva teglu tako da dođe u kontakt sa tečnošću (na ivice tegle se dodaje zasićen rastvor soli). Nakon taloženja, stakalce se uklanja, brzo okreće i pod mikroskopom (bez pokrovnog stakla) pregledava film na kojem su prianjala jaja helminta. Ova metoda dobro otkriva jaja svih nematoda i pantljičara. Teška jaja trematoda; većina cestoda i neoplođenih okruglih crva slabo pluta, pa se ispituje i sediment. Da biste to učinili, nakon uklanjanja filma, tečnost iz staklenke se brzo ocijedi i petljom ili pipetom iz taloga uzima nekoliko kapi, prebacuje se na staklo, dodaje se kap glicerina radi bistrenja i ispituje se pod mikroskop.

Metoda E. V. Kalantaryan(1938) Je efikasnija modifikacija Füllebornove metode. U njemu je rastvor natrijum hlorida zamenjen zasićenim rastvorom natrijum nitrata, sp. težina to-rogo 1,39 (jedna zapremina natrijum nitrata se rastvori u jednakoj zapremini vode tokom ključanja), film se uklanja nakon 20-30 minuta.

Primjenjuju se i Faustove metode (E. S. Faust, 1939), Brudastov et al. (1970) i ​​drugi.

Za odlaganje jajašca helminta koristi se kemikalija. supstance koje rastvaraju masti i proteine ​​u izmetu.

Telemanova metoda (W. Telemann, 1908) koju je modificirao Miyagawa (Y. Miyagawa, 1913). UREDU. 5 g izmeta se melje u malter ili teglu, dodajući po 5 ml etil etar i 50% rastvor hlorovodonične kiseline; smjesa se filtrira kroz žicu ili sito za kosu u epruvetu i centrifugira. U epruveti se formiraju tri sloja: na vrhu - eter sa otopljenom masnoćom, ispod - hlorovodonična kiselina sa rastvorenim proteinskim supstancama, u sedimentu - nerastvorljivi delovi izmeta i jaja helminta. Gornji slojevi se dreniraju, a sedimentu se dodaje voda i centrifugira. Nekoliko kapi precipitata se prenese na predmetno staklo i pregleda pod mikroskopom. Ova metoda može otkriti jajašca svih vrsta helminta, ali su ponekad deformirana.

Ritchiejeva metoda (L. S. Kitchie, 1948). Za rastvaranje masti i proteina koriste se formalin i eter.

Za odlaganje jajašca helminta mogu se koristiti različiti deterdženti. U inozemstvu je široko rasprostranjena metoda filtracije u posebnim Bell uređajima, koja se koristi za proučavanje ne samo izmeta, već i urina, krvi itd.

Postoji niz metoda koje kombinuju principe flotacije i taloženja jaja. Među njima su metode Lane (C. A. Lane), Rivas (D. Rivas), Gorkina, Darling (S. T. Darling). Jednu od ovih metoda flotacije-sedimentacije, kao i metodu sukcesivnog pražnjenja, predložio je N.V. Demidov (1963, 1965) za istraživanje fasciolijaze i dikrocelioze.

Kvantitativne metode

Stoll metoda(N. R. Stoll, 1926). U graduiranu široku epruvetu ili tikvicu (sa dvije oznake: 56 i 60 ml) sipa se decinormalni rastvor natrijum hidroksida do prve oznake, dodaje se fekalija dok nivo tečnosti ne dostigne drugu oznaku, dobro promeša staklenom šipkom i stavite 10 staklenih perli ili sitnih kamenčića, začepite i protresite 1 min. Brzo, da se suspenzija ne slegne, 0,075 ml smjese (0,005 g izmeta) sakupi se graduiranom pipetom, prenese na staklenu stakalcu na kojoj je postavljena rešetka, prekrije se pokrivnim staklom i ubaci jaja helminta. preparat se broji pod mikroskopom; množenjem dobijenog broja sa 200, dobijete broj jaja u 1 g izmeta. Za precizniji rezultat, jaja se broje u dva ili više preparata i uzimaju prosjek. Stoll metoda je neosjetljiva na slabe invazije. Stoga se preporučuje prebrojavanje jaja u pripremljenim preparatima razne metode flotacije ili sedimentacije, uz stalnu upotrebu jednakog uzorka izmeta i posuda iste zapremine. Koristi se i gusti Kato bris.

Beaver Method(R. C. Beaver, 1950). Priprema se standardni razmaz čija se gustoća određuje pomoću elektrofotometra, a zatim se u njemu broje sva jaja helminta.

Helmintolarvoskopske metode

Bermannova metoda(G. Baermann, 1917). 5-10 g svježe izlučenog izmeta stavlja se na metalnu mrežicu u stakleni lijevak, na čiji se uski kraj stavlja gumena cijev sa stezaljkom. Kako bi se izbjegla kontaminacija sedimenta fekalnim česticama, preporučuje se postavljanje (na mrežicu) papira ili dodavanje životinjskog uglja ili kukuruznog brašna u izmet. Lijevak se puni toplom vodom (t° 45-50°) sve dok ne dođe u kontakt sa fecesom. Zbog termotropije, larve se aktivno kreću u toplu vodu i postepeno se akumuliraju u donjem dijelu lijevka, iznad stezaljke. Nakon 3-4 sata, stezaljka se otvara, tečnost se spušta u 1-2 epruvete, centrifugira 2-3 minuta, gornji sloj se iscedi, a talog se ispituje na predmetnom predmetu pod mikroskopom.

Metoda za detekciju miracidijskih šistosoma. Izmet se ispere u mraku na t° 8-10°, sediment se drži 45 minuta. na jakom svjetlu na t ° 28 °, a zatim sipajte u tamnu tikvicu s cijevi sa strane. Miracidije su koncentrisane u providnoj bočnoj epruveti odakle se mogu izdvojiti.

Metode Fülleborna i druge također se koriste za otkrivanje ličinki ankilostoma.

Metode za proučavanje drugih izlučevina, kao i tkiva i organa

UREDU. 100 ml testa urina stoji 30 minuta. u cilindar i, nakon uklanjanja gornjeg sloja, sipajte 10-15 ml sedimenta u epruvetu, centrifugirajte na 1500 o/min 1-2 minute; sediment se ispituje. Preporučljivo je prikupiti cjelokupnu dnevnu porciju urina.

Urogenitalna šistosomijaza se dijagnostikuje identifikacijom miracidije. Dio svježeg urina centrifugira se 5 minuta, talog se sipa u tikvicu crne boje, prozirna staklena cijev se zalemi na gornji dio reza. Voda se dodaje u omjeru 1:5, 1:10 i stavlja 2 sata u termostat na t° 25-30°. Miracidije koje izlaze iz jaja su vidljive golim okom kroz prozirnu cijev u obliku brzo pokretnih tačaka. U kroni, oblik shistosomijaze kod pacijenata do kraja mokrenja izdvaja se krv, ali jaja u urinu se rijetko nalaze, stoga se preporučuje pribjegavanje biopsiji mokraćnog mjehura.

Pregled sputuma. Sputum može sadržavati jaja paragonimusa, šistozome, tominkse, larve migrirajućih nematoda, fragmente ehinokoknog mjehura. Čitav dostavljeni dio sputuma pažljivo se pregleda golim okom ili pod lupom, odaberu se i pregledaju svi vidljivi komadići tkiva, nakupine boje hrđe itd.; zatim pogledajte cijeli dio s potezima. Gnojni sputum se sipa sa jednakom količinom 0,5% rastvora kaustične alkalije, centrifugira i ispituje sediment.

Kod nekih helmintioza uočene su karakteristične promjene u sputumu. Kod paragonimije, na primjer, u sputumu se mogu naći nakupine jaja u obliku žućkastih grudica, kao i velika količina sluzi, leukocita, eritrocita, alveolarnih stanica, Kurschmannove spirale, elastičnih vlakana, Charcot-Leiden kristala. Otkrivaju se i karakteristični romboidni kristali sa šiljastim krajevima. Dostupnost veliki broj eozinofili omogućavaju razlikovanje paragonimiaze od tuberkuloze.

Pregled sadržaja apscesa i punktata. IN gnojni sekret apscesa, kao i kod tumora i cista uklonjenih tokom hirurška intervencija, možete pronaći helminte, njihove fragmente, ličinke i jaja (ehinokok, alveokok, sparganum, cisticercus, dirofilaria, okrugli crv, toksokara, paragonimus, itd.). Tehnika istraživanja je uobičajena; u nekim slučajevima se iz tumorskih tkiva pripremaju histološki rezovi. Gnojni sadržaj se može obraditi Telemannom metodom; bistra tečnost se ispituje na isti način kao i duodenalni sadržaj dodavanjem sumpornog etra. Ehinokokna tečnost se centrifugira i sediment se ispituje na prisustvo skoleksa i kukica; preparati se boje karbofuksinom prema Ziehl-Nelsenu.

Studija krvi. U krvi se nalaze mikrofilarije i larve migratornih nematoda. Kap krvi se uzima iz prsta ili iz ušne resice i pregleda se svježa ili se od nje prave preparati.

Kap krvi stavlja se na stakalce sa nanesenim kvadratom vazelina i lagano pritisne pokrivnim staklom. Pod mikroskopom se vide mikrofilarije koje se kreću između krvnih stanica. Krv se može staviti između dva sloja ljepljive celulozne trake; mikrofilarije ostaju pokretne 6 sati; u potpuno osušenom preparatu mogu se razlikovati pod mikroskopom u roku od 30 dana. Vrste mikrofilarija mogu se identificirati samo u obojenim razmazima ili debelim kapima. Pripremljeni preparati se suše, hemoliziraju i boje prema Romanovsky - Giemsa, Wright, Ziehl-Nelsen, Leishman, Papanicolaou (vidi Wrightova metoda bojenja, Romanovsky-Giemsa metoda, Ziehl-Nelsenova metoda). Nakon što su pronađene mikrofilarije u kapi krvi obojene po Romanovsky-Giemsi, preparat se dodatno boji Hansenovim hematoksilinom; nakon 15-60 min. oprano 2 min. u tekućoj vodi. Prefarbani preparat se diferencira u 0,2% rastvoru hlorovodonične kiseline; kapa mikrofilarija postaje blijedoljubičasta, a nuklearna tvar tijela tamnoljubičasta.

Za blage infestacije, 2-10 leda krvi treba ispitati sa antikoagulansom (npr. 5% rastvorom natrijum citrata) koristeći jednu od sledećih metoda.

Knottova metoda (J. Knott, 1939), modificirana od strane Markell i Foge (E. K. Markell, M. Voge, 1965). 2 ml krvi pomiješa se u epruveti za centrifugiranje sa 10 slučajeva 1% octene kiseline, centrifugira 2 minute. pri 1500 o/min; površinski sloj se drenira, talog se raspoređuje na nekoliko stakala i ispituje pod mikroskopom. Preparati se mogu bojati prema Romanovsky-Giemsi ili drugim metodama.

Bell Filtration Method (D. R. Bell, 1967). U aparatu koji se sastoji od levka od nerđajućeg čelika pravokutnog otvora i membranskih filtera istog oblika, veličine 19 x 42 mm, veličine pora od 0,8 do 5 μm, krv se filtrira u epruvete, hemolizira u mješavini 1 ml Tipol deterdženta i 9 ml fiziola, rastvora (da bi se ubrzala filtracija, aparat je povezan sa vakum pumpom). Filter se fiksira u kipućoj destilovanoj vodi i boji prema Romanovsky-Giemsa ili vrućim Ehrlich hematoksilinom. Obojeni filter se suši u eksikatoru ili u izopropil alkoholu (uzastopno u 3 šolje), bistri na staklu imerzionim uljem i pregledava pod pokrovnim staklom. Oslikani preparati se čuvaju nekoliko sedmica. Bell metoda je najefikasnija za kvantitativno brojanje mikrofilarija u krvi.

Koristi se i metoda sa Goldsmidovim polividonom.

Istraživanje kože. U koži se mogu naći mikrofilarije onho-crkve i larve helminta životinja koje uzrokuju kožni oblik larva migrans (vidi). Presjeci kože ili materijal dobiven skarifikacijom uzimaju se u butini, listovima, zadnjici ili na nivou deltoidnog mišića. Komad epiderme u obliku konusa se podiže entomološkom iglom i, odrezan britvom, ispituje se na staklu u kapi rastvora fiziola. Ako je rezultat negativan, svježi preparat se ponovo pregleda nakon 10 minuta; ličinke su obično lokalizirane uz rubove preparata. Dobijeni materijal se može čuvati u 2 ml fiziola, rastvora u roku od 1-2 sata. i ispitati sediment. Preporučuje se uzimanje 5 rezova kože od pacijenta.

Moguće je pripremati preparate od krvi i tkivne tekućine koja se oslobađa nakon jakog pritiska na rezove. Kapi se boje prema Mayeru, Romanovsky-Giemsa ili Delafieldovom hematoksilinu.

Standardna metoda za kvantifikaciju invazije. Biopsirano područje kože dia. 3-5 mm i težine najmanje 1-4 mg izvagati, iseći na male komade i prebrojati larve pod mikroskopom u fiziol. rastvor na stakalcu; 1-4 larve u vidnom polju označene su znakom +, 5-9 larvi - znakom ++, 10-19 - znakom +++, 20 ili više - znakom + + + +. Kvantitativno računovodstvo je pogodnije za provođenje na obojenim preparatima.

Test na trihinelozu, cisticerkozu i šistosomijazu

Identifikacija larvi trihinele

metoda kompresije. Komad bicepsa ili gastrocnemius mišića (blizu tetive), uzeti hirurški uz poštovanje asepse, razdvojiti iglicama za seciranje na posebna tanka vlakna, stisnuti ih između dva staklena stakalca u kapi glicerina tako da preparat bude tanak i providan. Larve trihinele su jasno vidljive pod mikroskopom sa zatamnjenim vidnim poljem. Učinkovito je istraživanje nekoliko dijelova mišića u kompresorima koji se koriste u veterini. praksa, posebno u specijalnim trihineloskopima.

Bechmanova metoda probave(G. W. Bachman, 1928). 1 i zgnječeni mišići se preliju sa 60 ml vještačkog želudačnog soka (0,5 g pepsina; 0,7 ml koncentrovane hlorovodonične kiseline; 100 ml vode) i inkubiraju se 18 sati. u termostatu na t° 37°; gornji sloj tečnosti se ocijedi, talogu se doda topla voda (t° 37-45°) i ulije u Bermannov aparat. Sat vremena kasnije, tečnost se spušta u epruvetu, centrifugira i ispituje sediment. Ako su larve zatvorene u kalcificirane kapsule, prethodno se dekalcificiraju u otopini klorovodične, dušične ili sumporne kiseline.

biotest. Komadići proučavanih mišića daju se bijelim miševima ili pacovima. Nakon 2-3 dana u duodenalnom sadržaju se mogu naći polno zrele trihinele, a nakon 2-3 sedmice larve u mišićima dijafragme i jezika.

Histološki rezovi. Komadi mišića su fiksirani u Bouinovu, Zenkerovu ili drugu tekućinu; preseci se pripremaju na uobičajen način na mikrotomu i boje se Delafieldovim hematoksilinom.

Identifikacija cisticera

Golim okom se pregleda komad ekstirpiranog mišića, vezivnog tkiva itd., pažljivo se izoluje cisticerk - bjelkasta prozirna vezikula veličine 1-2 cm, zgnječena između dva staklena stakla u kapi glicerina i pregledana pod mikroskopom. . Da bi se utvrdila vitalnost cisticerka izolovanih iz tkiva, oni se drže u 50% rastvoru žuči za fiziol. rastvor u termostatu na t° 37°; nakon 10-60 min. glava održivog cisticerka je okrenuta prema van. Kalcificirani cisticeri se prethodno dekalcificiraju 4% otopinom dušične kiseline u trajanju od sat vremena.

Detekcija šistozomskih jaja

Kod hron, oblika šistosomatoze, kada stvaranje granuloma onemogućava oslobađanje jajašca iz tkiva u lumen crijeva ili u mokraćni trakt, koristi se biopsija rektalne sluznice koja se radi posebnom kašikom uz pomoć rektoskopa, odabir mjesta s vidljivom lezijom. Biopsijski komad se zgnječi između dva predmetna stakla i pregleda se pod mikroskopom. Ako je rezultat negativan, komadići se bistre u 4% otopini kaustične lužine i od njih se priprema gistol. kriške. Oralno se radi biopsija sluznice jejunuma, a dobiveni materijal se ispituje metodom kompresije ili gistolom, iz njega se pripremaju rezovi. U nekim slučajevima urinarne genitourinarne šistosomijaze, dijagnoza se može postaviti samo na osnovu endovezikalne biopsije. Kod hepatolienalnog oblika šistosomijaze izvodi se punkciona biopsija jetre; gistol, od dobijenog materijala se pripremaju rezovi i ispituju pod fluorescentnim mikroskopom. Fluorescentni mikroskop sa tamnim poljem za upotrebu i za ispitivanje jetrenog tkiva na šistozomska jaja. Kada šistozomi zahvate ženski genitalni trakt, iscjedak se skuplja pomoću vaginalnog ogledala ili se oštrim žlicom uzimaju komadići sluznice cerviksa; primljeni materijal se ispituje pod mikroskopom na staklu u kapi fiziol, rastvor.

Istraživanje enterobiaze i teniidoze

Perianalno struganje (preporučuje se uzimanje uveče, 1 - 1,5 sat nakon što je pacijent otišao na spavanje, ili ujutro prije toaleta). Da li to pažljivo radim šibicom koja je ukoso odrezana i navlaženom u kapi tekućine (fiziol, rastvor, prokuhana voda ili 2% rastvor sode bikarbone), nanesenom na staklo? struganje sa sluzokože anusa i nabora oko njega (od centra prema van). Sluz prikupljena na kraju šibice sastruže se ivicom pokrivnog stakla u kap tečnosti na stakalcu i, prekrivena istim pokrivnim staklom, pregleda se. Prilikom masovnih pregleda, kada se strugoti uzimaju u dječjim ili drugim ustanovama, upotrijebljena šibica se stavlja u kap tečnosti na stakalcu, nakon sušenja kapi se prekrivaju drugim stakalcem i dostavljaju u laboratorij, umotane u papir i osigurane sa elastična traka. Za proučavanje rektalne sluzi koristi se poseban uređaj - cijev Shakhmatov ili Ziemann, pomoću koje se sluz uzima iz rektuma i brisevi se pregledavaju pod mikroskopom.

Metoda pamučnog štapića. Pacijentima se kod kuće daje epruveta sa vatom na staklenom ili drvenom štapiću; Ujutro pacijent briše perianalne nabore tamponom navlaženim prokuhanom vodom i stavlja ga u epruvetu s malom količinom vode. U laboratoriju se brisevi ispiru u istoj epruveti novom porcijom vode, a sediment se nakon centrifugiranja ispituje.

Holova celofanska metoda (M. C. Hall, 1937). Četvrtasti komad celofana ojačan je gumenom trakom na staklenoj šipki. Struganje se vrši suvim celofanom i stavlja u epruvetu. U laboratoriju se celofan malo pomakne sa štapića i, odrežući mu vrh škarama, ispravi ga na stakalcu; navlaženo decinormalnim rastvorom natrijum hidroksida, prekriveno pokrovnim stakalcem i pregledano pod mikroskopom.

Grahamova metoda celulozne trake (C. F. Graham, 1941). Traka celulozne trake pritisne se ljepljivom stranom na perianalne nabore ispitanika, zatim istom stranom na stakalce i pregleda se bez pokrovnog stakala; možete dodati kap toluena. VV Kaledin (1972) je predložio da se u ove svrhe koriste celuloidni diskovi izrezani iz ispranog rendgenskog filma i navlaženi glicerinom; diskovi se ispituju na predmetnom staklu u kapi silikatnog ljepila. Metoda celulozne trake može se koristiti i za pregled dječjeg donjeg rublja.

Subungualno struganje. Rubovi nokta, ležište nokta, podungualni prostori se navlaže 0,5-1% otopinom kaustične lužine i obrišu mokrim pamučnim tamponima. Brisevi se stavljaju u centrifugalne epruvete sa istim rastvorom, centrifugiraju i ispituje se sediment.

Metode istraživanja objekata okruženje na jajima i larvama helminta (sanitarne i helmintološke studije)

Istraživanja se provode u cilju utvrđivanja stepena kontaminacije objekata životne sredine jajima i larvama helminta. Primljeni podaci koriste se za procjenu dostojanstva. stanje institucija i preduzeća i efikasnost tekućih mjera za suzbijanje helmintoze.

Prilikom proučavanja stepena kontaminacije različitih objekata životne sredine jajima i ličinkama helminta i procene njihove uloge u epidemiologiji infekcija helmintima, važno je utvrditi ne samo broj pronađenih jaja, već i njihovu održivost i invazivnost, koji određuju: a ) by izgled, pod mikroskopom; b) bojenje raznim bojama, uključujući i luminiscentne; u pravilu se živa jaja i larve ne mrlje; c) uzgoj u optimalnim uslovima do invazivne faze; d) infekcija laboratorijskih životinja (biotest).

Studije vode i kanalizacije. Za jedno istraživanje koristi se 10-25 litara vode (rijeke, mora, bare, bazeni, vodovodne cijevi) i 1-2-5 litara kanalizacije.

Metoda 3. G. Vasilkova (1941). Voda ili kanalizacija se filtriraju kroz membranske ultrafiltere u Goldman aparatu, koji se sastoji od staklenog ili metalnog lijevka s filterima povezanim prstenom mlaznice na Bunsenovu tikvicu. Kako bi se ubrzao proces filtracije, na aparat je priključena vakuum pumpa. Nakon filtracije, membranski filteri se pregledavaju pod mikroskopom, nakon što su očišćeni 50% otopinom glicerola; nakupljeni sediment se čisti i posmatra odvojeno u obliku mrlja. Koriste se uređaji za filtriranje i drugi dizajni.

Metoda G. Sh. Gudzhabidzea i G. A. Yudina (1963) za proučavanje kanalizacijske tekućine. 1 litar tečnosti se taloži 2 sata u Lisenko cilindru; nastali sediment (5-9 ml) tretira se kao kod proučavanja tla (vidi dolje).

Metoda N. A. Romanenko (1967). Na 1 litar otpadne tečnosti stavljen u stakleni cilindar zapremine 1200-1500 ml, dodati 0,4-0,6 g aluminijum sulfata ili gvožđe hlorida (u svrhu koagulacije, koji ubrzava proces sedimentacije suspendovanih čestica) i posle 40 minuta. smjesa se centrifugira 3 minute. pri 1000 o/min; gornji sloj se ocedi, a da se pahuljice rastvore dodati 1-2 ml 3% rastvora hlorovodonične kiseline, zatim 150 ml zasićenog rastvora natrijum nitrata. Sediment se ispituje kao tlo.

Istraživanje tla

Kontaminacija tla jajima helminta utvrđuje se kako bi se identificirali žarišta helmintijaza i procijenila efikasnost njihove sanacije.

Metoda 3. G. Vasilkova i V. A. Gefter (1948). U epruvete (100 ml) od nerđajućeg čelika ili mesinga pomeša se 12,5 g zemlje sa 20 ml 5% rastvora kaustične alkalije, dodajući 10 staklenih perli ili sitnih kamenčića. Epruvete se zatvaraju gumenim čepovima i mućkaju 20 minuta. u šejkeru ili ručno. Nakon uklanjanja čepova, epruvete se centrifugiraju 3-5 minuta, površinska tekućina se ispusti, u talog se doda 60-80 ml zasićene otopine natrijum nitrata i, nakon dobrog miješanja, ponovo centrifugira 3-5 minuta. . U ovoj površini film s plutajućim jajima se uklanja dodirivanjem površine smjese složenom petljom (5-6 petlji povezanih na zajedničkom štapu) i prebacuje se u čašu vode; pomešano sa istim rastvorom, centrifugirano; ceo postupak se ponavlja najmanje 3 puta. Sadržaj stakla, u koji se prenosi film, razrijedi se vodom i filtrira kroz membranske filtere, koji se pod mikroskopom ispituju u kapi glicerina.

Metoda 3. G. Vasilkova i VA Gefter koju je modificirao AA Namitokov (1961) razlikuje se od glavne metode po tome što se umjesto proučavanja filmskih preparata koristi polovina sadržaja epruvete (svaki put se dodaje novi dio zasićene otopine natrijuma). nitrata), filtrira i pregleda filtere.

N. A. Romanenko (1968) preporučuje ispitivanje uzoraka tla i mulja iz kanalizacije na jaja helminta pomoću aparata koji je predložio G. Sh. Gudzhabidze. 50 g zemlje se temeljno meša 1 min. u 150 ml vode u epruvetama za centrifugiranje (kapaciteta 250 ml) sa posebnim noževima, koje pokreće elektromotor. Smjesa se centrifugira 3 minute. na 1000 o/min, voda se ocijedi i, dodajući 150 ml zasićenog rastvora natrijum nitrata, meša i ponovo centrifugira 3 minuta. Epruvete sa uzorcima stavljaju se u stativ, dodaje se rastvor natrijum nitrata dok se ne formira konveksni meniskus, pokrivaju staklenim predmetima (10 x 6 cm) i odležavaju 10-15 minuta, zatim se naočare skidaju i pregledaju; postupak se ponavlja najmanje 4 puta.

Istraživanje larvi helminta prema Bermannovoj metodi (1917). 200-400 g zemlje stavlja se u komad gaze na metalnu mrežicu (prečnika otvora 1-2 mm) koja se stavlja na široki dio staklenog lijevka pričvršćenog na tronožac. Preko uskog kraja lijevka zategnuta je gumena cijev sa stezaljkom. Lijevak se napuni toplom (t° 50°) vodom tako da donji dio mreže sa zemljom dođe u kontakt sa vodom. Zbog termotropije, ličinke aktivno puze u toplu vodu i, taložeći se, nakupljaju u donjem dijelu gumene cijevi iznad stezaljke. Nakon 3-4 sata, 50 ml sadržaja se pušta iz lijevka u epruvetu, centrifugira i ispituje sediment.

Istraživanje povrća, voća i bobičastog voća

Istražite uglavnom povrće, bobičasto voće i voće, koje se jedu bez njih termičku obradu. Metoda 3. G. Vasilkova (1948). 5-10 komada povrća ili voća (cca. 0,5 kg) ili 100-200 g zelenila (zelena salata, zeleni luk) prelije se nekoliko sati vodom u staklene tegle sa širokim grlom sa samljevenim čepovima i mućka 10-20 minuta. . u šejkeru ili ručno. Voda se odvodi, ispitivani predmeti se ispiru čistom vodom i sva voda za pranje se filtrira u Goldman aparatu; filteri se ispituju čišćenjem glicerinom. Filtere možete tonirati sa 25% Lugolove otopine u glicerinu; dok su jaja helminta obojena Smeđa boja i lako se prepoznaju među plavo obojenim zrncima škroba. Veliki sediment se tretira kao tlo.

Proučavanje briseva sa kućnih predmeta i ruku. Četkicom za ljepilo (ili pamučnim štapićem umotanim u komad najlonske tkanine) umočenom u 2% otopinu sode bikarbone više puta se provlači preko predmeta ili ruku koji se ispituje, nakon čega se ispere istom otopinom ulivenom u epruveta. U laboratoriji se četke i brisevi ispiru čistom vodom; sva voda za pranje se centrifugira i sediment se ispituje.

Metoda V. A. Gefter (1960). Efikasnije je sakupljanje prašine sa mekog inventara usisivačem spojenim na lijevak, koji se sastoji od 2 odvojiva dijela: na površinu donjeg dijela koji je pokriven metalnom ili plastičnom mrežicom postavlja se membranski filter koji je ojačan stavljanjem vrh lijevka. Sastavljeni lijevak pričvršćen je gumenom cijevi na crijevo usisivača. Prašina se skuplja sa predmeta 3 minute, nakon čega se filter uklanja i zamjenjuje novim. U laboratoriji se filteri pregledavaju pod mikroskopom, nakon što su očišćeni glicerinom. Ako je sloj prašine na filteru velik, on se sastruže i posmatra kao mrlje ili se tretira kao zemlja.

Imunološke dijagnostičke metode

Mogućnost upotrebe immunol. Metode za dijagnosticiranje helmintijaza nastaju zbog sposobnosti helminta da proizvode aktivne antigene koji utiču na imunokompetentne ćelije domaćina i stimulišu proizvodnju antitijela. Najefikasnije imunodijagnostičke metode za crijevne helmintijaze, kada tajne i izlučevine helminti sa antigenom aktivnošću ulaze direktno u krv domaćina. Immunol, reakcije se koriste za dijagnostiku askarijaze, trihineloze, filarijaze, šistosomatoze, ehinokokoze i alveokokoze, cisticerkoze, paragonimioze, kompleksa simptoma larva migrans- (toksokaroza, angiostrongiloza) itd.) i intradermalno alergijske testove. Antigeni se pripremaju od larvi i zrelih helminta pomoću fizioloških ekstrakata homogenata svježe smrznutih ili liofiliziranih tkiva, kao i raznih biološki aktivnih tekućina (tečnost iz ehinokoknih plikova, šupljina askarisa i dr.). Zbog činjenice da helminti imaju vrlo složenu antigenu strukturu i da njihov antigenski mozaik sadrži komponente i pojedinačne determinante koje unakrsno reagiraju s drugim vrstama helminta, bakterija i antigena domaćina, razvijaju se metode za njihovo pročišćavanje od nespecifičnih komponenti. Frakcionisanje se vrši raznim metodama: gel filtracijom u kolonama sa Sephadexom, hromatografijom sa jonoizmenjivačkom na DEAE-Sephadexu, tretmanom kiselinama itd. Frakcioni antigeni obično imaju veću specifičnost od celih ekstrakata, dok im je aktivnost približno ista. Imunodijagnostičke metode se sve više koriste. Reakcije se koriste ne samo za najpotpunije i rano otkrivanje bolesnika, ali i za proučavanje žarišta i proučavanje epidemiologije helmintioza.

Serološke reakcije. Reakcija mikroprecipitacije na živim larvama koristi se za dijagnosticiranje nematoda - preimaginalna faza askariaze, ankilostomidoze, trihineloze. Reakcija postaje pozitivna 5-10 dana nakon infekcije (askariaza, ankilostomidoza) i traje 90-100 dana. Antigen su žive larve nematoda izolirane iz tkiva eksperimentalno zaraženih laboratorijskih životinja. Odabrane larve se temeljito isperu od proteina domaćina sterilnim fiziolom, rastvorom i destilovanom vodom i po 10-15 kopija. stavlja se Pasteurovom pipetom na sterilno staklo sa otvorom. Nanesite 2-3 kapi test seruma, pokrijte sterilnim pokrovnim staklom, stavite u vlažnu komoru (Petrijeva posuda obložena navlaženim filter papirom) i inkubirajte 24-48 sati. u termostatu na t° 37°. Uz pozitivnu reakciju pod malim povećanjem mikroskopa, oko usta i anusa larvi vidljive su sivkasto-bijele, blago opalescentne mase precipitata sfernog ili cik-cak oblika. Efikasnost reakcije dostiže 85-95%.

Prstenastu reakciju precipitacije razvio je V. P. Pashuk (1957) za dijagnozu trihineloze. Reakcija postaje pozitivna u 2-3. sedmici bolesti. Njegova efikasnost dostiže 80-90%. Antigen je ekstrakt praha iz larvi osušenih na t° 35° izolovan iz mišića zaraženih životinja. U epruvetama prem. 0,5 cm sipati po 0,1 ml svakog razblaženja antigena i pažljivo nanijeti (ili spustiti na dno) jednaku količinu test seruma kako se tečnosti ne bi mešale. Epruvete se drže 30 minuta. u termostatu na t°37°, a zatim 30-60 min. na sobnoj temperaturi. Uz pozitivnu reakciju, na granici kontakta između antigena i seruma pojavljuje se bjelkasti nježni prsten, koji se lako raspada kada se protrese.

Reakciju precipitacije u gelu prema Ouchterlonyju (O. Ouchterlony, 1949) u mikromodifikaciji A. I. Guseva i V. S. Tsvetkova predložili su I. A. Ginovker, E. A. Zabozlaeva, A. V. Doronin (1970) za dijagnozu rane faze opisa. Prema preliminarnim podacima, njegova efikasnost je 87%. Antigen je ekstrakt homogenata svježe smrznutog spolno zrelog opisthorchisa izoliranog iz jetre mačaka.

Razvila se reakcija indirektne hemaglutinacije (vidi) sa dijagnostikom - suspenzijom formaliziranih i taniziranih ovnujskih eritrocita senzibiliziranih ehinokoknom tekućinom.

LN Stepankovskaya (1972) za dijagnozu ehinokokoze i alveokokoze.

RNHA sa dijagnostikom formaliniziranih ovčjih eritrocita senzibiliziranih ekstraktom homogenata svježe smrznutih cisticera svinjske trakavice predložila je L. M. Konovalova (1973) za dijagnozu cisticerkoze mozga; efikasan je u 85% slučajeva.

RNHA sa ascaris diagnosticumom se predlaže za dijagnozu preimaginalne faze ascariasis.

Reakcija fiksacije komplementa (vidi) postavlja se prema uobičajenoj metodi i koristi se za dijagnosticiranje trihineloze i cisticerkoze.

Metoda luminiscentnih antitijela (indirektna metoda). Ovu metodu sa odmašćenim suvim homogenatom cysticerci svinjske trakavice kao antigenom, fiksiranim na stakalcu, razvio je JI. M. Konovalova (1973) za dijagnozu cisticerkoze kod ljudi. Ista reakcija sa gistolom, dijelovima larvi trihinele kao antigenom, razvijena je za dijagnozu trihineloze.

E. S. Leykina, V. A. Gefter.

Tri grupe helminti su od medicinskog značaja - nematode(okrugli crvi) cestodes(trakavice) i trematode(flukes).

Za identifikaciju vrste jaja helminta koriste se sljedeće karakteristike.

1. Dimenzije. Izmjerite dužinu i širinu jaja, koja obično imaju određenu veličinu za svaku vrstu.

2. Forma. Svaka vrsta ima svoj specifičan oblik jaja.

3. Faza razvoja kada se dodjeljuje spoljašnje okruženje . Kod nekih vrsta jaja se sastoje od jedne ćelije; drugi mogu imati nekoliko ćelija u jajetu; kod trećih, jaja su obično embrionalna (tj. sadrže ličinke) kada se izlučuju fecesom u vanjsko okruženje. Povremeno, ako se uzorci fekalija pregledaju nekoliko sati ili 1-2 dana nakon defekacije, jaja helminta se razvijaju do više odraslih faza. U idealnom slučaju, samo svježi uzorci fekalija bi trebali biti prihvaćeni za analizu.

4. Debljina ljuske jajeta. Jaja nekih vrsta, kao što je Ascaris, imaju debelu ljusku; kod drugih vrsta helminta, kao što su ankilostomi, ljuska jaja je tanka.

6. Dostupnost morfološke karakteristike kao što su kape, šiljci, čepovi, kuke ili nazubljeni vanjski omotač.

Ako se pronađe jaje helminta ili predmet sličan njemu, sve gore navedene znakove treba pažljivo procijeniti kako bi se postavila specifična dijagnoza.

Da bi se utvrdio vrsni identitet jaja helminta, potrebno je utvrditi njihovu veličinu, oblik, fazu razvoja, debljinu ljuske, boju i prisustvo morfoloških karakteristika, kao što su klobuki, šiljci, čepovi, kukice i gomoljasta vanjska ljuska. .

Za postavljanje specifične dijagnoze koriste se posebne determinante i shematski prikazi jajašca helminta.

Rice. 34.2. Relativna veličina, oblik i struktura jaja helminta.

1. PREGLED FACETA.

Helmintološka istraživanja provode se u svrhu dijagnosticiranja helmintioza otkrivanjem jaja, ličinki, odraslih helminta ili njihovih fragmenata u patološkom materijalu. Budući da se većina helminta u zreloj fazi razvoja nalazi u gastrointestinalnom traktu ili u organima koji s njim komuniciraju, najčešće se koriste makro- i mikrohelmintoskopske metode za ispitivanje fecesa (ne starije od jednog dana).

Da bi se povećala pouzdanost pregleda, analize treba ponavljati nekoliko puta dnevno u razmaku od 1-3 dana.

1.1. MAKRO HELMINTOSKOPSKA ISTRAŽIVANJA IZMETA

Metoda poravnanja. Dnevni dio fekalija se temeljito ispere vodom dok voda iznad sedimenta ne postane bistra. Nakon ispuštanja gornjeg sloja, sediment se prenosi u Petrijevu posudu i gleda na tamnoj pozadini pod lupom ili golim okom.

Metoda skrininga. Izmet pomiješan sa vodom stavlja se na sistem sita posebnog uređaja. Nakon ispiranja vodom iz slavine, sita se okreću i, nakon što se ispere sadržaj u Petrijeve posude, gledaju se golim okom ili pod lupom.

1.2. MICRO HELMINTOSKOPSKA STUDIJA

Za otkrivanje jajašca helminta i njihovih ličinki koriste se helmintoovoskopske i helmintolarvoskopske metode.

1.2.1. HELMINTOVSKOPSKE METODE

Kada se koriste helminto-ovoskopske metode za otkrivanje helminta, prvo se pripremaju dvije vrste razmaza - native I debeo .

Þ Nativni razmaz. Mala količina izmeta se triturira na staklenom predmetu u kapi 50% otopine glicerola ili prokuhane vode. Velike čestice se pažljivo odstranjuju, smjesa se prekrije pokrovnim staklom i pregleda se pod mikroskopom (gledaju se dva razmaza).

Kada pravite nativni bris, morate biti svjesni da se kod slabih invazija u njemu rijetko nalaze jaja helminta.

Þ Debeli premaz celofanom po Katu. Metoda se temelji na otkrivanju jajašca helminta u debelom razmazu izmeta, pročišćenom glicerinom i obojenom malahit zelenom bojom. Pripremljeni gusti razmaz izmeta prekriva se komadom celofana navlaženim mješavinom glicerin-fenola i vlažnog celofana. Lijek se ispituje nakon 30-60 minuta, kada se lagano osuši i razbistri, zbog čega se jaja helminta mogu lako otkriti pod malim povećanjem mikroskopa.

U velikom razmazu jasno su vidljiva obojena velika jaja helminta, a nešto lošija prozirna jaja pantljičara. Ova metoda nije prikladna za otkrivanje malih jaja.

Þ Metode obogaćivanja

Među metodama obogaćivanja koriste se metode flotacija (plutajući) i sedimentacija (padavine).

ALI). Metode flotacije baziran na upotrebi zasićenih rastvora raznih hemikalija u kojima jaja plutaju zbog razlike u specifičnoj težini.

Füllebornova plutajuća metoda baziran na plutanju jajašca helminta u zasićenom rastvoru natrijum hlorida(specifična težina 1,18), što omogućava otkrivanje jaja s malim brojem njih. Metoda je efikasnija od proučavanja nativnog brisa. Prednosti su dostupnost i niska cijena. Ova metoda dobro otkriva jaja nematoda i pantljičara.

Međutim, jaja trematoda, taeniida, neoplođenih askarisa ne plutaju u ovo rješenje. Stoga je potrebno istražiti ne samo površinski film, već i naslage, što komplikuje metodu. Nedostaci uključuju odloženo nicanje jaja: jaja pantljičara izlaze nakon 15-20 minuta, ascaris - nakon 1,5-2 sata, bičeve - nakon 2-3 sata.

Metoda E.V.Kalantaryan takođe metoda obogaćivanja, ali efikasnija i jednostavnija. Koristi se zasićeni rastvor natrijum nitrata relativne gustine 1,38. Stoga jaja većine helminta isplivaju na površinu i nalaze se u površinskom filmu; ispitivanje sedimenta nije potrebno.

Nedostatak metode je nedostatak natrijum nitrata, kao i činjenica da jaja trematoda, taeniid onkosfere ne plutaju i ostaju u sedimentu.

B). Metoda taloženja (sedimentacija) Jaja helminta su zasnovana na upotrebi hemikalija koje otapaju masti i proteine ​​u izmetu.

Metoda P.P. Goryacheva zasnovan na principu taloženja jaja. Razmaz je u ovom slučaju lagan, što olakšava otkrivanje malih jajašca trematoda.

Predložena je Gorjačevljeva metoda za otkrivanje jaja opisthorchia i pokazalo se efikasnijim od proučavanja nativnog razmaza i Füllebornove metode. Trenutno se za dijagnozu opisthorhijaze (klonorhijaze) preporučuju metode Kato i Kalantaryan, jer su prilično učinkovite i tehnički jednostavnije.

1.2.2. HELMINTOLARVOSKOPSKE METODE (detekcija larvi)

Metoda uvijanja prema E.S. Shulmanu. Metoda je predložena za detekciju larvi helminta u izmetu, prvenstveno strongyloids. Ispituje se samo svježe izlučeni izmet koji se štapićem miješa u 5 puta većoj količini vode. Nakon 20-30 sekundi nakon početka miješanja, štapić se brzo uklanja, kapljica tekućine koja se formira na njegovom kraju se prenosi na predmetno staklo i mikroskopira.

Bermannova metoda zasniva se na sposobnosti larvi helminta da migriraju prema toplini i služi za njihovo otkrivanje u fecesu, prvenstveno u slučaju sumnje na strongiloidijazu.

2. METODE ZA PROUČAVANJE DRUGIH IZLUKA I TAJNI

U duodenalnom sadržaju mikroskopski se ispituju ljuspice i guste inkluzije u njemu, a zatim se, sipanjem u epruvete, dodaje jednaka zapremina sumpornog etera, centrifugira i ispituje sediment.

U povraćanju se povremeno nalaze helminti ili njihovi fragmenti (na primjer, kod gnojenja ehinokokna cista lagana vodenasta ili gnojna tečnost se ispušta iz pluća u bronhije uz povraćanje). Dijagnoza se postavlja na osnovu detekcije fragmenata kutikularne membrane, skoleksa i kukica ehinokoka.

Studija urina.

Urogenitalna šistosomijaza se dijagnosticira identifikacijom jajašca i miracidija. Jajaca uzročnika urogenitalne šistosomijaze (Schistosoma haemotobium) su velika i dostižu dužinu od 120-150 mikrona, na jednom kraju imaju završni šiljak. Unutar jajeta možete vidjeti embrion (miracidijum). Ponekad je potrebno utvrditi da li su pronađena jaja održiva. To se može utvrditi da li je preparat svjež i da mu nisu dodani konzervansi. At hronični oblikšistosomijaza kod pacijenata do kraja mokrenja, oslobađa se krv, ali se jaja rijetko nalaze u urinu, zbog čega se preporučuje pribjegavanje biopsiji mokraćnog mjehura.

Jaja paragonimusa, koja živi uglavnom u plućima, u slučaju lokalizacije u bubrezima, ureterima, zidovima mjehura, ulaze u urin. Mikrofilarije se nalaze u hiloznom urinu.

Pregled sputuma.

Sputum može sadržavati jaja paragonimusa, šistozome, larve migrirajućih nematoda, fragmente ehinokoknog mjehura. Kod nekih helmintioza uočene su karakteristične promjene u sputumu. At paragonimijaza, na primjer, u sputumu se mogu naći nakupine jaja u obliku žućkastih grudica.

Kada se jaja helminta nađu na različitim objektima životne sredine (zemljište, voda, povrće i sl.), uvijek je potrebno utvrditi njihovu održivost izgledom, bojenjem vitalnim bojama, uzgojem u optimalnim uslovima i postavljanjem biološkog uzorka, tj.

Hranjenje laboratorijskih životinja.

Određivanje vitalnosti jaja ili larvi helminta po izgledu. Jaja helminta se prvo mikroskopiraju pri malom, a zatim pri velikom povećanju. U deformiranim i mrtvim jajima helminta, ljuska je razderana ili savijena prema unutra, plazma je zamućena, olabavljena. Segmentirana jaja imaju loptice (blastomere) nejednake veličine, nepravilnog oblika, često se pomjeraju na jedan pol. Ponekad postoje abnormalna jajašca, koja se, s vanjskim deformitetima, normalno razvijaju. Kod živih ličinki askarida fina granularnost je prisutna samo u srednjem dijelu tijela, kako umiru, granularnost se širi po cijelom tijelu, pojavljuju se velike sjajne hijalinske vakuole - takozvane niti bisera.

Da bi se utvrdila održivost zrelih jaja askarida, bičevaca, pinworma, aktivna kretanja ličinki treba izazvati blagim zagrijavanjem preparata (na temperaturu koja ne prelazi 37 ° C). Pogodnije je promatrati održivost larvi askarisa i biča nakon što se izoluju iz ljuske jajeta pritiskom na pokrivno staklo preparata iglom za seciranje ili pincetom.

Kod invazivnih ličinki askarida često se uočava klobuk koji se ljuštio na glavi, a kod larvi bičevaca koje su završile razvoj u jajetu, na ovom mjestu se pri velikom povećanju nalazi stajlet. U mrtvim larvama helminta, bez obzira na njihovu lokaciju (u jajetu ili izvan njega), primjećuje se propadanje tijela. U tom slučaju, unutrašnja struktura larve postaje kvrgava ili zrnasta, a tijelo postaje mutno i neprozirno. Vakuole se nalaze u tijelu, a pukotine se nalaze na kutikuli.

Održivost teniidnih onkosfera (goveđa, svinjska trakavica, itd.) određena je kretanjem embriona kada su izloženi probavnim enzimima. Jaja se stavljaju na sat sa psećim želučanim sokom ili umjetnim duodenalnim sokom. Sastav potonjeg: pankreatin 0,5 g, natrijum bikarbonat 0,09 g, destilovana voda 5 ml. Satne čaše sa jajima stavljaju se u termostat na 36-38°C na 4 sata.U tom slučaju živi embrioni se oslobađaju iz ljuske. Školjke živih onkosfera također se otapaju u zakiseljenom pepsinu i u alkalni rastvor tripsin nakon 6-8 sati u termostatu na 38 °C.

Ako se jajašca teniida stave u 1% rastvor natrijum sulfida, ili 20% rastvor natrijum hipohlorida, ili u 1% rastvor hlorne vode na 36-38°C, zreli i živi embrioni se oslobađaju iz membrana i rade ne mijenjati 1 dan. Nezrele i mrtve onkosfere se skupljaju ili nabubre i naglo povećavaju, a zatim se „otapaju“ u roku od 10 minuta - 2 sata Živi embrioni teniida se takođe aktivno kreću u mešavini 1% rastvora natrijum hlorida, 0,5% rastvora natrijum bikarbonata i žuči na 36- 38 °C.

Vijabilnost skoleksnih ehinokoka određuje se uz malo zagrijavanje. Da bi se to učinilo, skoleksi ili plodne kapsule oprane u vodi stavljaju se u kap vode na staklo s rupom, prekrivaju pokrovnim stakalcem i pregledavaju pod mikroskopom sa stepenom zagrijavanja na temperaturi od 38-39 °C. Ako nema grijaćeg stola, pripravak se zagrijava pomoću bilo kojeg izvora topline. U isto vrijeme, održivi skoleksi se aktivno pomiču, smanjujući ili opuštajući sisaljke, produžujući i skraćujući proboscis. Ako se skoleksi stave u 0,5-1% vodenu otopinu filicilena na sobnoj temperaturi, tada će svi održivi skoleksi brzo ispasti i umrijeti. Neodrživi skoleksi se ne ispadaju.

Održivost fasciolia adolescaria prikupljenih iz biljaka i drugih objekata vodenih tijela provjerava se ispitivanjem na staklenom predmetu u fiziološkom rastvoru pod mikroskopom sa stepenom zagrijavanja. Kada se zagriju, larve trematoda u cisti počinju da se kreću.

Održivost jaja patuljaste trakavice određena je lokacijom udica na embriju.

U živim jajima patuljaste trakavice odvijaju se tromi klatni pokreti protoplazme i gotovo neprimjetni produžeci i pomaci šiljastih krajeva bočnog para udica od srednjeg para.

Kontrakcije protoplazme embrija i zametnih kukica pomažu embriju da se prvo oslobodi ljuske onkosfere, a zatim i od spoljna ljuska jaja.

U živom jajetu srednji par i bočni parovi udica su raspoređeni paralelno; u nekim jajima, oštrice bočnih parova su spojene i smještene pod kutom manjim od 45° u odnosu na srednji par udica.

Umirući embrion se grčevito skuplja i tromo gura udice. Kod mrtvog embriona kretanje udica prestaje i one su poređane u neredu, ponekad se udice bočno od susjednog para razmiču pod pravim, tupim ili oštrim uglom.

Ponekad se uočava naboranost embrija, formiranje granularnosti. Preciznija metoda temelji se na pojavljivanju pokreta onkosfere tijekom nagle promjene temperature: od 5-10 do 38-40 °C.

Određivanje vitalnosti nezrelih nematoda treba proučavati u vlažnoj komori (Petrijeve zdjelice), stavljajući jaja askarisa u 3% otopinu formalina pripremljenu u izotoničnom rastvoru natrijum hlorida na temperaturi od 24-30°C, jaja biča u 3% rastvoru hlorovodonične kiseline na temperaturi od 30-35 ° C, jaja pinworma u izotoničnoj otopini natrijum hlorida na temperaturi od 37 "C. Petrijeve posude treba otvarati 1-3 puta sedmično radi bolje aeracije i ponovo navlažiti filter papir čistom vodom.

Promatranja razvoja jajašca helminta provode se najmanje 2 puta tjedno. Odsustvo znakova razvoja u roku od 2-3 mjeseca ukazuje na njihovu neodrživost. Znakovi razvoja jaja helminta su prvo faze drobljenja, podjela sadržaja jajeta u zasebne blastomere. Tokom prvog dana razvija se do 16 blastomera, koji prelaze u drugi stadijum - morula itd.

Jaja ankilostoma se uzgajaju u staklenom cilindru (50 cm visine i 7 cm u prečniku) zatvorenom čepom. Mješavina jednakih količina sterilnog pijeska, drvenog uglja i izmeta s jajima ankilostome, razrijeđena vodom do polutečne konzistencije, pažljivo se sipa na dno cilindra pomoću staklene cijevi. Tokom 1-2 dana stajanja u mraku na temperaturi od 25-30°C, iz jaja se izlegu rabditoidne larve, a nakon 5-7 dana postaju već filariformne: larve puze uz zidove cilindra, gdje se vidljivi su čak i golim okom. Jaja trematoda koja se prirodno razvijaju u vodi, kao što su opisthorchis, diphyllobotriid, fasciol itd., stavljaju se na staklo za sat, Petrijevu zdjelu ili u drugu posudu, ulije se manji sloj obične vode. Prilikom uzgoja jaja fasciole treba voditi računa da se ona brže razvijaju u mraku, dok se miracidijum stvara u živim jajima na temperaturi od 22-24°C za 9-12 dana. Prilikom mikroskopije razvoj jaja trematodes miracidium pokreti su jasno vidljivi. Fasciola miracidium izlazi iz ljuske jajeta samo na svjetlu. Prilikom uzgoja voda se mijenja nakon 2-3 dana.

Ličinke ankilostoma i strongiloid uzgajaju se na agaru u Petrijevoj posudi sa životinjskim ugljenom. Nakon što su 5-6 dana bile u termostatu na temperaturi od 26-30°C, larve su se širile po agaru, ostavljajući za sobom put bakterija (Fülleborn metoda).

Metoda Harada i Mori (1955). 7 ml destilovane vode se dodaje u epruvete postavljene u stalak. Drvenim štapićem uzmite 0,5 g izmeta i napravite razmaz na filter papiru (15X150 mm) 5 cm od lijeve ivice (ova operacija se izvodi na listu papira radi zaštite površine laboratorijskog stola). Zatim se traka sa razmazom ubacuje u epruvetu tako da lijevi kraj slobodni od mrlje dođe do dna epruvete. Gornji kraj je prekriven komadom celofana i čvrsto omotan elastičnom trakom. Na epruvetu upišite broj i prezime ispitanika. U tom stanju epruvete se čuvaju 8-10 dana na temperaturi od 28 °C. Za proučavanje kulture, skinite i skinite celofanski poklopac i uklonite traku filter papira pincetom. Pri tome se mora voditi računa, kao mala količina invazivne larve se mogu pomaknuti do gornjeg kraja filter papira ili do zida epruvete i prodrijeti ispod površine celofana.

Cijevi se stavljaju na vruće vodeno kupatilo na temperaturi od 50 °C 15 minuta, nakon čega se sadržaj mućka i brzo sipa u epruvetu od 15 ml za taloženje larvi. Nakon centrifugiranja, supernatant se uklanja, a talog se prenosi na stakalce, prekriva pokrovnim staklom i mikroskopira pod malim povećanjem.

Za diferencijalna dijagnoza filariformnih larvi, potrebno je koristiti podatke prikazane u tabeli. 13.

Metode bojenja jaja i larvi helminta. Mrtva tkiva u većini slučajeva percipiraju boje brže od živih. Ove karakteristike se koriste u helmintologiji za određivanje održivosti jaja i larvi helminta. Međutim, u nekim slučajevima neke boje bolje percipiraju živa tkiva nego mrtva.

Tabela 13 Diferencijalna dijagnoza filamentne larve A.duodenale, N.americanus, Strongyloides stercoralis, Trichostrongylus spp.

Za diferencijalno prepoznavanje živih i mrtvih jaja i ličinki koriste se sljedeće boje i metode.

Metilen plava leukobaza se koristi za bojenje živih i mrtvih tkiva. Živa ćelija ili tkivo redukuje metilensko plavo u bezbojnu leukobazu; mrtvo tkivo nema tu sposobnost i stoga dobija boju.

Za bojenje jaja Ascaris možete koristiti metilen plavo u otopini mliječne kiseline s kaustičnom alkalijom (metilensko plavo 0,05 g, kaustična soda 0,5 g, mliječna kiselina 15 ml). Živa jaja ne percipiraju boju, embrioni mrtvih jaja postaju plavi.

Metoda bojenja nije primjenjiva na nezrela jaja okruglih glista i biča; pigmentirana ljuska se mrlja, pa se stoga ne vidi da li je zametna ćelija unutar jajeta obojena.

Larve askarisa se boje baznim rastvorom briljantno-krezil plave boje u koncentraciji 1:10 000 na sledeći način: kap tečnosti sa jajima askarisa i kap rastvora osnovne boje se nanose na predmetno staklo. Preparat se prekriva pokrovnim stakalcem, koji se laganim tapkanjem iglom za seciranje čvrsto pritisne na predmet. Pod mikroskopom se posmatra broj izleglih larvi i stepen njihove bojenosti, nakon čega se isti preparat ponovo ispituje nakon 2-3 sata.Žive se smatraju samo nedeformisane larve koje nisu obojene 2 sata.Mrtve larve se boje kada se ljuska se lomi (djelimično ili potpuno).

Ukazuje se na mogućnost bojenja preparata rastvorom joda u određivanju vitalnosti jaja ptica askaridije. U ovom slučaju, 5% se koristi kao boja. alkoholni rastvor jod. Kada se nanese na lijek, embrioni mrtvih jajašca askarida postaju narandžasti u roku od 1-3 sekunde. Mrtva jaja opisthorchisa i onkosfera bikovska trakavica obojene rastvorom toluidin plavog (1:1000), a mrtve onkosfere goveđe trakavice - rastvorom briljantno-krezil plavog (1:10 000). Istovremeno, embrioni i ljuske mrtvih i živih jaja dobijaju boju. Stoga se nakon bojenja jaja i onkosfere ispiru u čistoj vodi i dodatno boje safraninom (razrijeđen 1:10.000 sa 10% otopinom alkohola). Alkohol uklanja boju sa školjki, a safranin im daje crvenu boju. Kao rezultat toga, živa jaja su obojena crvenom bojom, embrion mrtvih jaja je plave boje, a ljuska ostaje crvena. Mrtvi embrioni onkosfera goveđe trakavice brzo su, u roku od nekoliko minuta, obojeni jarkocrveno ili ružičasto safraninom ili plavo sa briljantno-krezil plavom u razrjeđenju 1:4000 ili indigo karminom u razrjeđenju 1:1000-1: 2000.

Živi embrioni se pod uticajem ovih boja ne menjaju ni nakon 2-7 sati.

Za određivanje održivosti jaja patuljaste trakavice preporučuje se korištenje sljedećih boja: 1) briljantna kresil plava (1: 8000) - nakon 1 sata, onkosfera mrtvih jaja je posebno svijetlo obojena, koja se oštro ističe na bledi ili bezbojna pozadina ostatka jajeta; 2) safranin: u razblaženju od 1:8000 kada je izložen 2 sata i 1:5000 tokom 3-5 sati; 3) 50% rastvor pirogalne kiseline u razblaženju 1:2 - kada se izloži 1 sat na temperaturi od 29-30°C (što je temperatura niža, proces bojenja je duži).

Živi plerocerkoidi široke trakavice su vrlo dobro obojeni vodenim rastvorom (1:1000) neutralnog usta 5-20 minuta. Za postizanje postojane ružičaste boje koja ne nestaje u roku od 5 dana i ne utiče na pokretljivost plerocerkoida obično je dovoljno 10 minuta. Stepen boje se kontroliše posmatranjem larvi u čistom stanju izotonični rastvor natrijum hlorid, za koji se plerocerkoidi povremeno uklanjaju iz boje. Preporučljivo je koristiti metilensko plavo za bojenje mrtvih plerocerkoida.

R.E. Chobanov i saradnici (1986) su predložili metodu za određivanje vitalnosti jaja i larvi helminta koristeći rubrin pigment dobijen kultivacijom gljive Peniciliium rubrum kao boje. Da biste to učinili, koristite 3% vodenu otopinu boje.

Proces bojenja jaja i larvi završava se nakon 1,5 sata.Neživa jaja pinworms, goveđe i patuljaste trakavice, ankilostomida, trichostrongylida dobijaju intenzivnu ružičastu boju, larve ankilostomida i trihostrongilida postaju crvene. Manje svijetla boja se uočava u jajima askarisa i biča, jer, izdvajajući se iz crijeva, već imaju tamno braon boje: Održiva jaja i larve se ne mrlje.

Fizičko-hemijske metode za stimulaciju oslobađanja mirakdije iz jaja trematoda. Metode su razvili S.M. German i S.A. Beer (1984) kako bi se odredila održivost jaja opisthorhije i dikrocelija izlaganjem jaja reakcijskom mediju. Ako su živi, ​​izlazi miracidijum. Metode se zasnivaju na fizičko-hemijskoj aktivaciji miracidijumske žlijezde i stimulaciji motoričke aktivnosti larve. Stimulacija se postiže izlaganjem jaja trematoda posebnom reakcionom mediju u kombinaciji sa uzastopnim metodama - stvaranjem temperaturne razlike, sušenjem suspenzije jaja, izlaganjem slaboj tečnoj struji u test kapi, što doprinosi masovnom oslobađanju miracidija iz jaja.

Određivanje održivosti jaja opistorch metodom Herman, Beer. Suspenzija jaja u vodi (česme, taložena) prethodno se ohladi na 10-12°C. Sve naredne operacije izvode se na sobnoj temperaturi (18-22 °C). Jedna kap (oko 0,05 ml) suspenzije koja sadrži 100-400 jaja dodaje se u epruvetu za centrifugu. Epruvete se stavljaju u stalak na 5-10 minuta da se istaloži jaja. Zatim se uskom trakom filter papira pažljivo odsisava višak vode dok se potpuno ne ukloni. 2 kapi medijuma se dodaju u epruvetu, promućkaju, sadržaj se prebacuje pipetom na stakalce i ostavi 5-10 minuta, lagano protresajući (ili stavljajući pod fen) kako bi se stvorile slabe struje tečnosti u pad suspenzije se proučava. Ova operacija, koja imitira crijevnu peristaltiku mekušaca, omogućava vam da aktivirate oslobađanje miracidije. Nakon toga se suspenziji dodaju još 2 kapi podloge, a zatim se preparat mikroskopski ispituje pomoću konvencionalnog svjetlosnog mikroskopa (X200). Za to vrijeme jaja sa održivim miracidijama trebaju otvoriti poklopac, dok larva aktivno izlazi u okolinu. Zbog prisustva etanola u njemu, miracidijum se imobiliše za 3-5 minuta, a zatim se boji bojom u medijumu. Kao rezultat toga, miracidije se lako otkrivaju i broje.

Priprema reakcionog medija. Medijum je pripremljen u 0,05 M Tris-HCi puferu pod optimalnim pH uslovima od 8,0-9,5. Etanol se dodaje u pufer do 10-13% i boju (safranin, metilensko plavo i druge koje rade u pH opsegu) sve dok se tekućina malo ne zamrlja (na primjer, za safranin njegova konačna koncentracija će biti 1:50.000). Možete koristiti drugi pufer koji radi u alkalnom pH opsegu, kao što je 0,05 M fosfat (pH 8,5). Dakle, medij sadrži 96% etanola - 12 dijelova; boja (matični rastvor) - 1-10 delova; 0,05 M tris-HC! pufer (pH 8,5-9,5) - do 100 dijelova. Primer srednje veličine: 12 delova 96% etanola, 1 deo zasićenog rastvora safranina, ostatak do 100 delova - 0,05 M Tris-HCl pufer, pH 9,5.

Određivanje vitalnosti dikrocelijumskih jaja metodom Herman, Beer, Stratan. Kap suspenzije koja sadrži 100-150 jaja trematoda stavlja se u epruvetu za centrifugiranje na 1-2 minute da se jaja slegnu. Tečnost se zatim pažljivo osuši trakom filter papira. Dodajte 1-2 kapi reakcionog medija pomoću Pasteurove pipete i inkubirajte u vodenom kupatilu na 28-30 °C 2-3 minuta. Sastav medijuma: 6 delova butanola, 94 dela 0,4% rastvora natrijum hlorida ili 0,3% rastvora kalijum hlorida u destilovanoj vodi. Jaja u medijumu se pipetom prebacuju na stakalce i ostavljaju 1,5-2 sata na sobnoj temperaturi (18-22°C), dok se svakih 25-30 minuta (kako se suši) dodaju 1-2 kapi (0,05). ml) rastvor butanola u destilovanoj vodi. Nakon toga se preparat mikroskopira na 100-200-strukom uvećanju. Viabilnost je određena brojem otvorenih jajašca sa oslobođenim miracidijama. Butanol prodire kroz pore ljuske jajeta, dolazi do miracidija i aktivira ih. Inkubacija na izrazitoj temperaturi pojačava ovaj proces. Butanol u koncentraciji od 3-7% je štetan za miracidij koji je izašao iz jajeta. Prenos suspenzije jaja iz epruvete na staklenu pločicu omogućava da se do trenutka izlaska miracidijuma (nakon 30-40 minuta) smanji koncentracija butanola usled isparavanja na siguran nivo (1,5-0,5%). Prisustvo natrijum hlorida u medijumu u koncentraciji od 0,1-0,5% (ili kalijum hlorida u koncentraciji od 0,05-0,4%) određuje aktivnost oslobođenog miracidijuma. Za razliku od malih prozirnih jaja opisthorcha, jaja dikrocelija imaju tamnu ljusku, imaju jasno vidljiv poklopac koji je otvoren nakon oslobađanja miracidijuma. Stoga se održivost jaja dikrocelija pogodnije procjenjuje prebrojavanjem jaja koja su se otvorila, a ne bojenjem i brojanjem miracidija.

Luminescentna metoda za proučavanje jaja i larvi helminta.

Prvi put u helmintološkoj praksi metode luminiscentne mikroskopije su primijenjene 1955. godine. Izvještava se da luminiscentna mikroskopija omogućava razlikovanje živih i mrtvih objekata bez oštećenja jajeta. Za fluorescenciju nisu korišteni UV zraci, već plavo-ljubičasti dio vidljive svjetlosti, sa konvencionalni mikroskop i stakleni tobogani; Za osvetljivač OI-18 korišten je poseban set filtera u boji.

Utvrđeno je da živa i mrtva jajašca askarisa, pinworms, pantljičare, goveđe trakavice, široka traka i drugi helminti drugačije luminesciraju. Ovaj fenomen se uočava kako tokom primarne luminiscencije bez upotrebe boja, tako i kod bojenja fluorohromima (akridin narandžasta, korifosfin, primulin, aurolin, berlerin sulfat, tripaflavin, rivanol, kinakrin, itd.).

Neofarbana živa nesegmentirana jaja okruglih crva svijetle svijetlo zeleno sa žućkastim nijansama; u mrtvim jajima ljuska emituje zeleno svjetlo mnogo svjetlije od tamnozelene embrionalne; u jajima okruglih crva sa larvom pojavljuje se samo ljuska, dok su u mrtvih i ljuska i ličinka svijetlo žute boje.

Nepigmentirana i nesegmentirana živa jaja pinworms i pantljičara emituju zelenkasto-žuto svjetlo; u mrtvim jajima, ljuska intenzivno luminescira na pozadini tamnozelene embrionalne mase. Sa sekundarnom luminiscencijom (kada je obojena akridin narandžastom u razrjeđenju 1:10 OOO i 1:50 OOO od 30 minuta do 2 sata), ljuska živih i mrtvih nematoda, trematoda i cestoda različito luminescira.

Ljuska živih i mrtvih Ascaris lumbricoides, Toxocara leonina, Enterobius vermicularis, Hymenolepis nana, H.fraterna, H. diminuta, T.saginatus, D.latum postaje narandžastocrvena. Embrioni živih Asc. lumbricoides, T.leonina, H.diminuta, D.latum i onkosfere goveđe trakavice luminesciraju u zagasito tamnozelenoj ili sivo-zelenoj boji. Mrtvi embrioni ovih jajašaca helminta emituju "goruću" narandžasto-crvenu svjetlost. Žive larve pinworma i toksokari (ljuske jajeta) emituju zagasito sivo-zeleno svjetlo, kada uginu, boja se mijenja od vrha glave do "goruće" svijetlozelene, zatim žute, narandžaste i na kraju svijetlo narančaste.

Kada se boje fluorohromima - coryphosphyllum, primulin - u mrtvim jajima askarida i bičeva, uočava se sjaj od lila-žute do bakreno-crvene boje. Održiva jaja ne luminesciraju, već postaju tamnozelena. Živa jaja trematoda Paragonimus westermani i Clonorchis sinensis ne luminesciraju nakon bojenja akridin narandžastom bojom, dok mrtva jaja emituju žućkasto zeleno svjetlo.

Metoda luminiscencije se također može koristiti za određivanje održivosti larvi helminta. Dakle, fluorohromizirane otopinom akridin narandže (1: 2000) larve strongilata, rabdita svijetle: žive - zelene (sa nijansom), mrtve - jarko narančaste svjetlosti. Žive larve trihinele ne sijaju ili daju slab sjaj kada se tretiraju 10 minuta rastvorima fluorescein izotiocijanata, auramina itd. Fluorohromizovane mrtve larve (u koncentraciji 1:5000) daju sjajan sjaj.

Žive miracidije koje izlaze iz ljuske emituju prigušeno plavkasto svjetlo s jedva primjetnim svijetložutim vjenčićem cilija, ali 10-15 minuta nakon smrti pojavljuju se kao svijetlo "goruće" svijetlo zeleno, a zatim narandžasto-crveno svjetlo.

Postoji nekoliko tehnika koje pomažu u prepoznavanju prisutnosti crva velika voda. Jedan od njih se koristi za analizu tečnosti u rezervoarima sa stajaćom vodom. Sastoji se od korištenja planktonskog filtera, koji se ugrađuje u Goldmannov lijevak i spaja na vakuum pumpu. Nakon ispumpavanja tečnosti iz filtera, talog se uklanja, zatim se razmazuje na staklo i ispituje pod mikroskopom.

Proučavanje vode na prisustvo crva u tekućim rezervoarima vrši se pomoću platnenog filtera. Umeće se u planktonsku mrežu koja izgleda kao veliki konus. Metalna cijev je pričvršćena na najuži kraj konusa. Sličan uređaj je pričvršćen za uže, uže za čamac. Uzorkovanje se vrši promjenom dužine užeta. Tako je moguće uhvatiti i provjeriti različite slojeve jezera ili ribnjaka. Sadržaj filtera se obično ispituje pod mikroskopom kada je mokar. Takve metode vam omogućavaju da identificirate sve vrste helminta. Kada se pronađu crvi, identificira se uzročnik infekcije, a također se provodi čišćenje.

Jaja helminta u kanalizaciji

Ako se sekundarni odvodi koriste za navodnjavanje zemljišta, oni se moraju tretirati. U te svrhe mogu se koristiti procesi koji omogućavaju uništavanje jajašca helminta. Po pravilu, najveću efikasnost pokazuje sedimentacija ili filtracija otpada nakon njegove stabilizacije u močvarnim ekosistemima. Ljuska jaja helminta je vrlo izdržljiva. Da biste ga uništili i ubili crve u pupoljku, potrebno je stvoriti određene uslove. Kloriranje tekućina, njihovo tretiranje UV svjetlom ili ozonom, kako pokazuje praksa, je neučinkovito. Najbolji način ubiti crve pije vodu- zagrijte ga na temperaturu iznad +40 stepeni Celzijusa i održavajte ovaj nivo dugo vremena. Naravno, prilično je problematično stvoriti takve uslove za inaktivaciju šljiva, za to je potrebno izgraditi posebne sisteme za prečišćavanje. Ali trud i materijalni izdaci su u potpunosti naplaćeni smirenošću i zdravljem ljudi. Na nivou domaćinstva, uobičajeno ključanje tečnosti pomaže u uklanjanju crva.

Važno je zapamtiti da se crvi u vodi za piće mogu pojaviti ako se ne poštuju sanitarni standardi od strane kompanija koje osiguravaju nesmetanu opskrbu tekućim nosačem. U kanalizacijskim odvodima mogu biti prisutna jaja helminta, a mogu biti i u toaletnoj vodi ako se tehnički resursi koriste za potrebe kanalizacije.

Poglavlje III. Dijagnoza helmintioza i metode helmintološkog istraživanja

Potrebno je pregledati na helmintiaze sve pacijente koji traže medicinsku pomoć, a posebno pacijente koji se obraćaju pedijatru, terapeutu i neuropatologu sa pritužbama na pojave sa strane. gastrointestinalnog trakta, nervnog sistema i sa anemijom. Ako liječnik ne može uvijek primijeniti laboratorijske metode istraživanja, tada je svaki medicinski radnik koji pruža pomoć u ambulanti ili bolnici dužan ispitati pacijenta o oslobađanju helminta iz njega.

Ako postoje kliničke indikacije navedene u relevantnim poglavljima, dijagnozu treba pojasniti korištenjem laboratorijske metode istraživanje helmintoze.

U vezi s dominacijom crijevnih helmintioza, proučavanje fecesa je od najveće praktične važnosti.

Metode za proučavanje fecesa na helmintiaze

Izmet se dostavlja u laboratoriju u čistom staklenom posuđu (otprilike četvrtina šolje izmeta uzetog sa različitih mesta u jednoj porciji); tokom rutinskog pregleda dozvoljena je dostava fekalija u laboratoriju u kutijama šibica ili popularnim otiscima.

Za kontrolu dehelmintizacije isporučuje se cjelokupni dio fecesa prikupljen nakon uzimanja antihelmintika i laksativa (u velikim zatvorenim staklenim posudama, kantama) (prema ljekaru).

Mikroskopski pregled fecesa je glavni u dijagnostici crijevnih helmintioza; uvijek treba prethoditi općim makroskopskim pregledom fecesa kako bi se otkrili segmenti velikih cestoda, pinworms, okruglih crva itd.

Stolice treba da budu svježe ili konzervirane (u 5% otopini formalina), jer sušenje dramatično mijenja strukturu jaja. Osim toga, kada se javlja stajanje izmeta brz razvoj jaja nekih helminta (na primjer, ankilostoma), što otežava dijagnozu.

Prema uputama Ministarstva zdravlja SSSR-a, potrebno je istovremeno pregledati izmet Füllebornovom metodom i nativnim brisom.

nativni razmaz

Nativni razmaz: mali komad fecesa (veličine zrna graška), uzet šibicom, staklenim ili drvenim štapićem sa različitih mesta isporučene porcije, pažljivo se razmuti na stakalcu u kapi 50% rastvora glicerola ili u fiziološkom rastvoru ili u vodi. Pokrijte pokrovnim stakalcem, lagano pritiskajući ovo drugo (iglom za seciranje). Razmaz treba da bude tanak, providan i ujednačen. Koristi se samo kao dodatak drugim metodama koje daju obogaćivanje lijeka. Treba pogledati najmanje dvije pripreme.

Da bi se otkrile larve helminta (kao i njihova jaja), radi se nativni bris na sljedeći način (prema Shulmanu): čista voda ili fiziološki rastvor. Prilikom miješanja, larve se nakupljaju na staklenom štapiću, pa se odmah po završetku miješanja kap emulzije brzo prenosi staklenim štapićem na stakalce, pokriva pokrovnim stakalcem i pregledava. S. D. Lyubchenko (1936) je dokazao da je metoda uvrtanja efikasnija od metode razmaza, posebno u pogledu jaja ascaris. Na osnovu rada S. D. Lyubchenka, smatramo prikladnim zamijeniti metodu razmaza metodom uvrtanja.

Fülleborn metoda

Fülleborn metoda: 5-10 g izmeta uzetog sa različitih mjesta stavlja se u teglu kapaciteta 50-100 ml i dobro izmrlja staklenim ili drvenim štapićem u zasićenom rastvoru natrijum hlorida (400 g ove soli se rastvori u 1 litru vode, zagrijati do ključanja i filtrirati kroz sloj vate ili gaze; otopina se koristi hladna: specifična težina 1,2). Otopina se sipa postepeno dok se ne dobije jednolična suspenzija, i ukupan iznos infundirana otopina bi trebala biti približno 20 puta veća od količine fecesa. Fülleborn je preporučio korištenje čajnih čaša za miješanje fekalija, ali je pogodnije pripremiti suspenziju u posudama za mast od 50-100 ml, koristeći dvije tegle za svaku analizu (ili u šoljicama od 100 ml).

Odmah nakon pripreme suspenzije, lopaticom, metalnom mericom ili komadom čistog papira s površine se uklanjaju krupne čestice koje su isplivale na površinu (biljne formacije, nesvareni ostaci hrane i sl.), nakon čega smesa se ostavi da odstoji 1-1,5 sat. Nakon tog vremena, cijeli film se uklanja s površine smjese dodirivanjem žice ili platinaste petlje (ravne) promjera ne većeg od 1 cm, savijene pod pravim kutom; Film se otrese na stakalcu i prekrije pokrovnim stakalcem. Ispod svakog pokrovnog stakla (18x18 mm) stavite 3-4 kapi. Ukupno treba pripremiti najmanje 4 preparata (po jedan pokrov za svaki preparat). Petlja se kalcinira na vatri i ispere vodom nakon svake analize.

Prema Fülleborn metodi, jaja svih nematoda (s izuzetkom neoplođenih jaja okruglih glista) i patuljaste trakavice se brzo i lako otkrivaju.

Bermanova metoda se koristi za proučavanje fecesa na larve helminta (sa strongiloidijazom). Ova metoda je sljedeća: 5 g fekalija na metalnu rešetku (za ovu namjenu je pogodna cjedila za mlijeko) stavlja se na stakleni lijevak pričvršćen na tronožac. Na donji kraj lijevka stavlja se gumena cijev sa stezaljkom.

Mrežica sa fekalijama se podiže i u lijevak se ulijeva voda zagrijana na približno 50° tako da se donji dio mreže sa izmetom uroni u vodu. Ličinke se aktivno kreću u vodu i nakupljaju se u donjem dijelu gumene cijevi. Nakon 2-4 sata, stezaljka se otvara i tečnost se spušta u jednu ili dvije epruvete za centrifugiranje.

Nakon centrifugiranja u trajanju od 1-2 minute, gornji dio tečnosti se brzo ocijedi, a talog se nanosi u kapima na stakalce i ispituje pod pokrovnim stakalcima ili se raspoređuje u tankom sloju na 2-3 velika stakalca, a zatim se ispituje bez poklopca. slipovi.

Bermanova metoda se također koristi za ispitivanje tla na prisustvo ličinki ankilostome.

Stoll metoda

Stoll metoda se koristi za određivanje intenziteta invazije. Decinormalni rastvor natrijum hidroksida se sipa u posebnu staklenu tikvicu do oznake od 56 cm 3, a zatim se dodaje izmet dok nivo tečnosti ne dostigne 60 cm 3, odnosno 4 cm 3. Nakon protresanja staklenim perlama, uzima se 0,075 ml smjese za pregled i ispituje pod jednim ili dva obična pokrovna stakla. Dobivena količina se množi sa 200 kako bi se dobio broj jaja sadržanih u 1 cm 3 izmeta.

Proučavanje duodenalnog sadržaja

Duodenalni sok i cistična žuč, dobijeni na uobičajen način sondiranjem (i cistična žuč i nakon refleksa iz žučne kese), temeljito se pomiješaju sa jednakom količinom etil etera; smjesa se centrifugira, nakon čega se precipitat ispituje pod mikroskopom. Osim sedimenta, mikroskopskim pregledom moraju se podvrgnuti i pahuljice koje plutaju u tekućini, a koje mogu sadržavati jajašca helminta. Prilikom pregleda jajašca helminta želučanog soka i povraćanja možete koristiti istu tehniku.

Ispitivanje duodenalnog soka i sadržaja želuca potrebno je izvršiti ako se sumnja na helmintičke bolesti jetre, žučne kese (opistorhijaza, fasciolijaza, dikrocelijaza) i duodenuma (strongiloidijaza).

Pregled sputuma

Sputum se utrlja na staklenu ploču, čvrsto prekriven drugom staklenom pločom i pregleda se golim okom na svijetloj i crnoj pozadini, kao i pod lupom u prolaznom svjetlu. Odvojeni komadići sputuma („zarđale“ nakupine, ostaci tkiva itd.) nanose se u tankom sloju na staklo, dobro prekriveno pokrovnim staklom i pregledavaju se pri malom i velikom povećanju mikroskopa.

a) Za dijagnozu cisticerkoze kože, potkožnog tkiva ili mišića, prvo se golim okom pregleda aseptički odrezan komad odgovarajućeg tkiva. Dijelovi tkiva se rastavljaju iglama za seciranje kako bi se otkrili vidljivi jednostavnim okom vezikula - cisticerk (fotografija A); dužina mu je 6-20 mm, širina 5-10 mm. Kada se pronađe mehur koji je sumnjiv na cisticerk, on se zgnječi između dva staklena stakla i pregleda se pod mikroskopom. Cisticerkus (Cistycercus cellulosae) je određen prisustvom skoleksa sa četiri sisa i oreolom udica (slika B).

Fotografija. A - cisticerci sa skoleksima okrenutim prema van; B - Glava svinjske trakavice.

b) Za dijagnozu trihineloze, aseptički odrezani komad mišića (biceps ili gastrocnemius) pažljivo se usitnjava u 50% otopini glicerola u najtanja vlakna pomoću igala za seciranje. Zgnječeni mišići se stisnu između dva staklena stakalca i pregledaju pri malom povećanju mikroskopa u zatamnjenom vidnom polju. Pregled mišića na trihinelozu preporučuje se obaviti najkasnije 8. dana bolesti. Larve trihinele su u mišićima u smotanom položaju: zatvorene su u kapsule u obliku limuna.

Fotografija. A - Larve trihinele u mišićima; B - Kalcificirane kapsule trihinele.

Fluoroskopija

Najčešće se fluoroskopija koristi za dijagnosticiranje ehinokokoze i, rjeđe, cisticerkoze. Cisticerci se nalaze na fluoroskopiji tek nakon kalcifikacije (u slučajevima produžene bolesti). Posljednjih godina, fluoroskopija se također koristi za dijagnosticiranje askarijaze, kako u ranoj fazi larve, tako i dijelom u crijevnoj fazi.

U periodu migracije larvi ascaris (i ankilostoma) u plućima otkrivaju se nestabilna, ponekad višestruka žarišta upale; istovremeno se u krvi pojavljuje značajna eozinofilija.

Polno zreli okrugli crvi jasno su vidljivi na fluoroskopiji crijeva oboljelih osoba. Ovu metodu, unatoč svojoj složenosti i glomaznosti, treba koristiti kao dodatnu metodu za dijagnosticiranje askariaze u slučajevima s negativnom skatološkom analizom. Prema E. S. Geselevichu, od 180 pacijenata s ascariasisom identificiranih fluoroskopijom, 54 jaja ascarisa nisu pronađena u izmetu (vidi).