लगभग सभी संक्रामक रोगों का प्रयोगशाला निदान रोगी के रक्त में एंटीबॉडी का पता लगाने पर आधारित होता है, जो रोगज़नक़ के प्रतिजनों के खिलाफ, सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं के तरीकों से उत्पन्न होते हैं। उन्होंने उन्नीसवीं सदी के अंत से बीसवीं शताब्दी की शुरुआत तक चिकित्सा पद्धति में प्रवेश किया।

विज्ञान के विकास ने रोगाणुओं की एंटीजेनिक संरचना और उनके विषाक्त पदार्थों के रासायनिक सूत्रों को निर्धारित करने में मदद की है। इससे न केवल चिकित्सीय, बल्कि नैदानिक ​​सीरा भी बनाना संभव हो गया। वे प्रयोगशाला पशुओं को क्षीण रोगजनकों को प्रशासित करके प्राप्त किए जाते हैं। कई दिनों के एक्सपोजर के बाद, खरगोशों या चूहों के खून से तैयारी तैयार की जाती है, जिसका उपयोग सीरोलॉजिकल परीक्षणों का उपयोग करके रोगाणुओं या उनके विषाक्त पदार्थों की पहचान के लिए किया जाता है।

इस तरह की प्रतिक्रिया की बाहरी अभिव्यक्ति इसकी सेटिंग की स्थितियों और रोगी के रक्त में एंटीजन की स्थिति पर निर्भर करती है। यदि माइक्रोबियल कण अघुलनशील होते हैं, तो वे सीरम में अवक्षेपित, लाइसे, बाँध या स्थिर हो जाते हैं। यदि प्रतिजन घुलनशील हैं, तो उदासीनीकरण या वर्षा की घटना प्रकट होती है।

एग्लूटिनेशन रिएक्शन (आरए)

सीरोलॉजिकल एग्लूटिनेशन रिएक्शन अत्यधिक विशिष्ट है। रोगी के रक्त सीरम में एंटीजन की उपस्थिति को शीघ्रता से निर्धारित करने के लिए यह प्रदर्शन करना आसान है और पर्याप्त दृश्य है। इसका उपयोग विडाल प्रतिक्रिया (टाइफाइड और पैराटाइफाइड बुखार का निदान) और वीगल (टाइफाइड बुखार) को चरणबद्ध करने के लिए किया जाता है।

यह मानव एंटीबॉडी (या एग्लूटीनिन) और माइक्रोबियल कोशिकाओं (एग्लूटेनोजेन्स) के बीच एक विशिष्ट बातचीत पर आधारित है। उनकी बातचीत के बाद, कण बनते हैं जो अवक्षेपित होते हैं। यह एक सकारात्मक संकेत है। प्रतिक्रिया को स्थापित करने के लिए जीवित या मारे गए माइक्रोबियल एजेंट, कवक, प्रोटोजोआ और दैहिक कोशिकाओं का उपयोग किया जा सकता है।

रासायनिक रूप से, प्रतिक्रिया को दो चरणों में विभाजित किया जाता है:

1. एंटीजन (एजी) के साथ एंटीबॉडी (एटी) का विशिष्ट संबंध।
2. गैर-विशिष्ट - एजी-एटी समूह की वर्षा, यानी एग्लूटीनेट का गठन।

अप्रत्यक्ष समूहन प्रतिक्रिया (IPHA)

इसकी सेटिंग के लिए, शुद्ध भेड़ एरिथ्रोसाइट्स और मानव लाल रक्त कोशिकाओं का उपयोग किया जाता है, एंटीबॉडी या एंटीजन के साथ पूर्व-उपचार किया जाता है (यह इस बात पर निर्भर करता है कि प्रयोगशाला सहायक वास्तव में क्या खोजना चाहता है)। कुछ मामलों में, मानव लाल रक्त कोशिकाओं का इलाज इम्युनोग्लोबुलिन के साथ किया जाता है। माना जाता है कि एरिथ्रोसाइट्स की सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं तब होती हैं जब वे ट्यूब के नीचे बस जाती हैं। हम सकारात्मक प्रतिक्रिया के बारे में बात कर सकते हैं जब कोशिकाओं को एक उल्टे छतरी के रूप में व्यवस्थित किया जाता है, जो पूरे तल पर कब्जा कर लेता है। एक नकारात्मक प्रतिक्रिया की गणना की जाती है यदि एरिथ्रोसाइट्स एक स्तंभ में या नीचे के केंद्र में एक बटन के रूप में बसे।

वर्षा प्रतिक्रिया (आरपी)

इस प्रकार के सीरोलॉजिकल परीक्षणों का उपयोग एंटीजन के अत्यंत छोटे कणों का पता लगाने के लिए किया जाता है। ये हो सकते हैं, उदाहरण के लिए, प्रोटीन (या उसके हिस्से), लिपिड या कार्बोहाइड्रेट के साथ प्रोटीन के यौगिक, बैक्टीरिया के हिस्से, उनके विषाक्त पदार्थ।

प्रतिक्रिया के लिए सेरा जानवरों, आमतौर पर खरगोशों के कृत्रिम संक्रमण द्वारा प्राप्त किया जाता है। इस विधि से, आप बिल्कुल कोई भी अवक्षेपण सीरम प्राप्त कर सकते हैं। सीरोलॉजिकल वर्षा प्रतिक्रियाओं की सेटिंग एग्लूटीनेशन प्रतिक्रियाओं की क्रिया के तंत्र के समान है। सीरम में निहित एंटीबॉडी एंटीजन के साथ मिलकर बड़े प्रोटीन अणु बनाते हैं जो ट्यूब के नीचे या सब्सट्रेट (जेल) पर जमा होते हैं। यह विधि अत्यधिक विशिष्ट मानी जाती है और किसी पदार्थ की नगण्य मात्रा का भी पता लगा सकती है।

प्लेग, टुलारेमिया, एंथ्रेक्स, मेनिन्जाइटिस और अन्य बीमारियों का निदान करने के लिए उपयोग किया जाता है। इसके अलावा, वह फोरेंसिक चिकित्सा परीक्षा में शामिल है।

जेल में

सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं न केवल एक तरल माध्यम में, बल्कि अगर जेल में भी की जा सकती हैं। इसे विसरित अवक्षेपण विधि कहते हैं। इसकी मदद से जटिल एंटीजेनिक मिश्रणों की संरचना का अध्ययन किया जाता है। यह विधि प्रतिजनों से प्रतिपिंडों के कीमोटैक्सिस पर आधारित है और इसके विपरीत। जेल में, वे अलग-अलग गति से एक-दूसरे की ओर बढ़ते हैं और मिलते हुए, वर्षा रेखाएँ बनाते हैं। प्रत्येक पंक्ति एजी-एटी का एक सेट है।

एंटीटॉक्सिन (आरएन) के साथ एक्सोटॉक्सिन की तटस्थता प्रतिक्रिया

एंटीटॉक्सिक सीरम एक्सोटॉक्सिन की क्रिया को बेअसर करने में सक्षम हैं, जो सूक्ष्मजीवों द्वारा निर्मित होता है। ये सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं इसी पर आधारित हैं। माइक्रोबायोलॉजी इस पद्धति का उपयोग सीरा, विषाक्त पदार्थों और टॉक्सोइड्स का अनुमापन करने और उनकी चिकित्सीय गतिविधि को निर्धारित करने के लिए करती है। टॉक्सिन न्यूट्रलाइजेशन की शक्ति पारंपरिक इकाइयों - एई द्वारा निर्धारित की जाती है।

इसके अलावा, इस प्रतिक्रिया के लिए धन्यवाद, प्रजातियों या प्रकार के एक्सोटॉक्सिन को निर्धारित करना संभव है। इसका उपयोग डिप्थीरिया, बोटुलिज़्म के लिए किया जाता है। अध्ययन "कांच पर" और जेल दोनों में किया जा सकता है।

Lysis प्रतिक्रिया (RL)

रोगी के शरीर में प्रवेश करने वाले प्रतिरक्षा सीरम में निष्क्रिय प्रतिरक्षा के अपने मुख्य कार्य के अलावा, लाइसिंग गुण भी होते हैं। यह रोगी के शरीर में प्रवेश करने वाले माइक्रोबियल एजेंटों, सेलुलर विदेशी तत्वों और वायरस को भंग करने में सक्षम है। सीरम में शामिल एंटीबॉडी की विशिष्टता के आधार पर, बैक्टीरियोलिसिन, साइटोलिसिन, स्पिरोचेटोलिज़िन, हेमोलिसिन और अन्य को अलग किया जाता है।

इन विशिष्ट एंटीबॉडी को "पूरक" कहा जाता है। यह लगभग सभी मानव शरीर के तरल पदार्थों में पाया जाता है, इसमें एक जटिल प्रोटीन संरचना होती है और यह तापमान वृद्धि, झटकों, एसिड और सीधी धूप के प्रति बेहद संवेदनशील होती है। लेकिन सूखे अवस्था में, यह छह महीने तक अपने लाइसिंग गुणों को बनाए रखने में सक्षम है।

इस प्रकार की सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं होती हैं:

बैक्टीरियोलिसिस;

हेमोलिसिस।

जीवित रोगाणुओं के साथ रोगी के रक्त सीरम और विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरम का उपयोग करके बैक्टीरियोलिसिस किया जाता है। यदि रक्त में पर्याप्त पूरक मौजूद है, तो शोधकर्ता बैक्टीरिया लाइसे को देखेगा, और प्रतिक्रिया को सकारात्मक माना जाएगा।

रक्त की दूसरी सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया यह है कि रोगी के एरिथ्रोसाइट्स के निलंबन को हेमोलिसिन युक्त सीरम के साथ इलाज किया जाता है, जो केवल एक निश्चित प्रशंसा की उपस्थिति में सक्रिय होते हैं। यदि कोई है, तो प्रयोगशाला सहायक लाल रक्त कोशिकाओं के विघटन का निरीक्षण करता है। यह प्रतिक्रिया आधुनिक चिकित्सा में व्यापक रूप से रक्त सीरम में पूरक अनुमापांक (अर्थात इसकी सबसे छोटी मात्रा जो एरिथ्रोसाइट लसीका को उत्तेजित करती है) को निर्धारित करने और पूरक निर्धारण के लिए विश्लेषण करने के लिए उपयोग की जाती है। यह इस प्रकार है कि उपदंश के लिए एक सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया की जाती है -

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर)

इस प्रतिक्रिया का उपयोग रोगी के रक्त सीरम में एक संक्रामक एजेंट के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाने के साथ-साथ इसकी एंटीजेनिक संरचना द्वारा रोगज़नक़ की पहचान करने के लिए किया जाता है।

इस बिंदु तक, हमने सरल सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं का वर्णन किया है। आरएसके को एक जटिल प्रतिक्रिया माना जाता है, क्योंकि इसमें दो नहीं, बल्कि तीन तत्व परस्पर क्रिया करते हैं: एंटीबॉडी, एंटीजन और पूरक। इसका सार इस तथ्य में निहित है कि एंटीबॉडी और एंटीजन के बीच बातचीत केवल पूरक प्रोटीन की उपस्थिति में होती है, जो गठित एजी-एटी कॉम्प्लेक्स की सतह पर adsorbed होते हैं।

प्रतिजन स्वयं, पूरक जोड़ के बाद, महत्वपूर्ण परिवर्तनों से गुजरते हैं, जो प्रतिक्रिया की गुणवत्ता दिखाते हैं। यह लसीका, हेमोलिसिस, स्थिरीकरण, जीवाणुनाशक या बैक्टीरियोस्टेटिक क्रिया हो सकती है।

प्रतिक्रिया स्वयं दो चरणों में होती है:

1. एक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का निर्माण जो परीक्षक को दिखाई नहीं देता है।
2. पूरक की क्रिया द्वारा प्रतिजन में परिवर्तन। इस चरण का अक्सर नग्न आंखों से पता लगाया जा सकता है। यदि प्रतिक्रिया नेत्रहीन दिखाई नहीं दे रही है, तो परिवर्तनों की पहचान करने के लिए एक अतिरिक्त संकेतक प्रणाली का उपयोग किया जाता है।

संकेतक प्रणाली

यह प्रतिक्रिया पूरक निर्धारण पर आधारित है। शुद्ध राम एरिथ्रोसाइट्स और पूरक-मुक्त हेमोलिटिक सीरम को आरएससी सेट होने के एक घंटे बाद टेस्ट ट्यूब में जोड़ा जाता है। यदि टेस्ट ट्यूब में एक अनबाउंड पूरक रहता है, तो यह भेड़ रक्त कोशिकाओं और हेमोलिसिन के बीच बने एजी-एटी कॉम्प्लेक्स में शामिल हो जाएगा, और उन्हें भंग कर देगा। इसका मतलब यह होगा कि आरएसके नकारात्मक है। यदि एरिथ्रोसाइट्स बरकरार रहे, तो, तदनुसार, प्रतिक्रिया सकारात्मक है।

रक्तगुल्म प्रतिक्रिया (RHA)

दो मौलिक रूप से अलग-अलग रक्तगुल्म प्रतिक्रियाएं हैं। उनमें से एक सीरोलॉजिकल है, इसका उपयोग रक्त समूहों को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। इस मामले में, एरिथ्रोसाइट्स एंटीबॉडी के साथ बातचीत करते हैं।

और दूसरी प्रतिक्रिया सीरोलॉजिकल पर लागू नहीं होती है, क्योंकि लाल रक्त कोशिकाएं वायरस द्वारा उत्पादित हेमाग्लगुटिनिन के साथ प्रतिक्रिया करती हैं। चूंकि प्रत्येक रोगज़नक़ केवल विशिष्ट एरिथ्रोसाइट्स (चिकन, भेड़, बंदर) पर कार्य करता है, इसलिए इस प्रतिक्रिया को अत्यधिक विशिष्ट माना जा सकता है।

ट्यूब के नीचे रक्त कोशिकाओं के स्थान से आप बता सकते हैं कि प्रतिक्रिया सकारात्मक है या नकारात्मक। अगर इनका पैटर्न उल्टे छाते जैसा दिखता है, तो मरीज के खून में वांछित वायरस मौजूद होता है। और अगर सभी एरिथ्रोसाइट्स एक सिक्के के स्तंभ की तरह बन गए हैं, तो कोई वांछित रोगजनक नहीं हैं।

रक्तगुल्म निषेध प्रतिक्रिया (HITA)

यह एक अत्यधिक विशिष्ट प्रतिक्रिया है जो आपको रोगी के रक्त सीरम में प्रकार, प्रकार के वायरस या विशिष्ट एंटीबॉडी की उपस्थिति स्थापित करने की अनुमति देती है।

इसका सार इस तथ्य में निहित है कि परीक्षण सामग्री के साथ एक टेस्ट ट्यूब में जोड़े गए एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट्स पर एंटीजन के जमाव को रोकते हैं, जिससे रक्तगुल्म रुक जाता है। यह विशिष्ट एंटीजन के रक्त में रुचि के विशिष्ट वायरस की उपस्थिति का गुणात्मक संकेत है।

इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया (आरआईएफ)

प्रतिक्रिया फ्लोरोक्रोम रंगों के साथ उपचार के बाद एजी-एटी परिसरों का पता लगाने की क्षमता पर आधारित है। इस विधि को संभालना आसान है, शुद्ध संस्कृति के अलगाव की आवश्यकता नहीं है और इसमें थोड़ा समय लगता है। संक्रामक रोगों के शीघ्र निदान के लिए यह अपरिहार्य है।

व्यवहार में, इन सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं को दो प्रकारों में विभाजित किया जाता है: प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष।

डायरेक्ट आरआईएफ एक एंटीजन के साथ बनाया गया है जिसे फ्लोरोसेंट सीरम के साथ पूर्व-उपचार किया गया है। और परोक्ष रूप से, दवा को पहले एक पारंपरिक डायग्नोस्टिकम के साथ इलाज किया जाता है जिसमें ब्याज के एंटीबॉडी के लिए एंटीजन होते हैं, और फिर ल्यूमिनसेंट सीरम, जो एजी-एटी कॉम्प्लेक्स के प्रोटीन के लिए विशिष्ट होता है, को फिर से लगाया जाता है, और माइक्रोस्कोपी के तहत माइक्रोबियल कोशिकाएं दिखाई देती हैं।

पाठ 14

विषय: अप्रत्यक्ष सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं। अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म (आरएनएचए), पूरक निर्धारण (आरएसके) की प्रतिक्रियाएं।

एंटीबॉडी

एंटीबॉडी प्रोटीन अणु होते हैं जो एंटीजन के लिए विशिष्ट बंधन में सक्षम होते हैं। एंटीबॉडी गामा ग्लोब्युलिन हैं। एंटीबॉडी का दूसरा नाम इम्युनोग्लोबुलिन है। स्तनधारियों में, इम्युनोग्लोबुलिन के 5 वर्ग होते हैं जो उनकी संरचना और कुछ गुणों में भिन्न होते हैं: IgG, IgM, IgA, IgE, IgD।

इम्युनोग्लोबुलिन की संरचना. IgG में सबसे "विशिष्ट" संरचना होती है। अणु में 4 प्रोटीन श्रृंखलाएँ होती हैं: दो प्रकाश (L) और दो भारी (H), जो डाइसल्फ़ाइड बंधों द्वारा परस्पर जुड़ी होती हैं। प्रतिरक्षी का वह स्थान जो प्रतिजन से बंधता है, प्रतिरक्षी का सक्रिय स्थल कहलाता है। IgG अणु में 2 सक्रिय केंद्र होते हैं। यह भारी और हल्की श्रृंखलाओं के एन-टर्मिनल भागों से बनता है। डाइसल्फ़ाइड बंधों के पास स्थित भारी जंजीरों के क्षेत्र को हिंज क्षेत्र कहा जाता है। पपैन एंजाइम की मदद से, काज क्षेत्र के ऊपर IgG अणु को 3 टुकड़ों में विभाजित किया जाता है: उनमें से 2 में हल्की श्रृंखला और भारी श्रृंखला (फैब टुकड़े) का हिस्सा होता है; और तीसरे टुकड़े में केवल भारी जंजीरों (Fc टुकड़ा) का हिस्सा होता है। जंगम काज क्षेत्र के लिए धन्यवाद, फैब टुकड़े अंतरिक्ष में अपनी सापेक्ष स्थिति बदल सकते हैं।

प्रकाश और भारी श्रृंखलाओं के अमीनो एसिड अनुक्रम स्थिर (स्थिर) और परिवर्तनशील क्षेत्रों में विभाजित हैं। चर क्षेत्र प्रकाश और भारी श्रृंखलाओं (वीएल और वीएच) के एन-टर्मिनस पर पाए जाते हैं। स्थिर क्षेत्र श्रृंखलाओं के सी-टर्मिनस (सीएल और सीएच) पर स्थित हैं। हल्की और भारी श्रृंखलाओं में, अमीनो एसिड अनुक्रम कई गोलाकार संरचनाएं बनाते हैं जिन्हें डोमेन कहा जाता है।

एक एंटीबॉडी का सक्रिय स्थल प्रकाश और भारी श्रृंखलाओं के परिवर्तनशील डोमेन द्वारा बनता है और एक गुहा है ( पैराटोप), जिसकी सतह पर विद्युत आवेशों का एक निश्चित विन्यास और वितरण होता है। सक्रिय साइट में आवेशों का आकार, आकार और वितरण इसकी विशिष्टता को निर्धारित करता है, अर्थात, एक विशिष्ट प्रतिजनी निर्धारक के लिए बाध्य करने की क्षमता ( एपीटोप), जिसकी एक पूरक संरचना है।

एंटीजेनिक निर्धारक एंटीजन अणुओं की सतह पर उभरे हुए क्षेत्र हैं। इसलिए, एपिटोप-पैराटोप इंटरेक्शन "की-लॉक" सिद्धांत के अनुसार होता है।

एंटीबॉडी के सक्रिय केंद्र और एंटीजेनिक निर्धारक के बीच संबंध की ताकत आत्मीयता की अवधारणा की विशेषता है। आत्मीयतासक्रिय साइट और एंटीजेनिक निर्धारक के संबंध का एक उपाय है।

आईजीजी वर्ग इम्युनोग्लोबुलिन सीरम इम्युनोग्लोबुलिन की कुल मात्रा का 75% हिस्सा है। आईजीजी की एक महत्वपूर्ण संपत्ति प्लेसेंटा को पार करने की उनकी क्षमता है। इस प्रकार, मातृ एंटीबॉडी बच्चे के शरीर में प्रवेश करती हैं और उसे जीवन के पहले महीनों (प्राकृतिक निष्क्रिय प्रतिरक्षा) में संक्रमण से बचाती हैं।

इम्युनोग्लोबुलिन के कुल पूल का लगभग 10% IgM वर्ग से संबंधित है। IgM अणु एक पंचक है, अर्थात इसमें 5 समान अणु होते हैं, IgG अणु की संरचना के समान, 10 सक्रिय केंद्र होते हैं। सबयूनिट एक साथ डाइसल्फ़ाइड बांड द्वारा जुड़े हुए हैं। IgM अणु में एक अतिरिक्त J-श्रृंखला होती है जो सबयूनिट्स को बांधती है। आईजीएम वर्ग के एंटीबॉडी प्लेसेंटल बाधा से नहीं गुजरते हैं।

IgA वर्ग के एंटीबॉडी इम्युनोग्लोबुलिन की कुल सामग्री का 15-20% बनाते हैं। IgA अणु में 2 प्रकाश और 2 भारी श्रृंखलाएँ होती हैं, जिनमें 2 सक्रिय केंद्र होते हैं। रक्त सीरम में, IgA एक मोनोमेरिक रूप में मौजूद होते हैं, जबकि श्लेष्मा झिल्ली के स्राव में, IgA को डिमर के रूप में प्रस्तुत किया जाता है और उन्हें स्रावी या sIgA कहा जाता है, उनके 4 सक्रिय केंद्र होते हैं। SIgA अणु में भारी श्रृंखलाओं के C-टर्मिनल एक J-श्रृंखला और एक प्रोटीन अणु द्वारा परस्पर जुड़े होते हैं जिसे स्रावी घटक कहा जाता है। स्रावी घटक एसआईजीए को प्रोटीयोलाइटिक एंजाइमों द्वारा दरार से बचाता है, जो श्लेष्म झिल्ली के स्राव में बड़ी मात्रा में पाए जाते हैं। SIgA का मुख्य कार्य श्लेष्मा झिल्ली को संक्रमण से बचाना है। IgA अपरा बाधा को पार नहीं करता है। महिलाओं के स्तन के दूध में sIgA की उच्च सांद्रता पाई जाती है, खासकर स्तनपान के पहले दिनों में। वे नवजात शिशु के जठरांत्र संबंधी मार्ग को संक्रमण से बचाते हैं।

आईजीडी मुख्य रूप से बी-लिम्फोसाइटों की झिल्ली पर पाए जाते हैं। उनके पास आईजीजी, 2 सक्रिय केंद्रों के समान संरचना है। जैविक भूमिका पूरी तरह से ज्ञात नहीं है।

IgE - रक्त सीरम में इम्युनोग्लोबुलिन के इस वर्ग की एकाग्रता बेहद कम है। IgE अणु मुख्य रूप से मस्तूल कोशिकाओं और बेसोफिल की सतह पर तय होते हैं। इसकी संरचना में, IgE IgG के समान है, इसके 2 सक्रिय केंद्र हैं। यह माना जाता है कि कृमिनाशक प्रतिरक्षा के विकास में IgE आवश्यक है। IgE कुछ एलर्जी रोगों (ब्रोन्कियल अस्थमा, हे फीवर) और एनाफिलेक्टिक शॉक के रोगजनन में एक प्रमुख भूमिका निभाता है।

अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म प्रतिक्रिया

अप्रत्यक्ष सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं में, एंटीबॉडी वाले एंटीजन का परिसर नग्न आंखों को दिखाई नहीं देता है। ऐसे मामलों में, एंटीजन को बड़े वाहक कणों (एरिथ्रोसाइट्स, लेटेक्स कणों) पर अधिशोषित किया जाता है, जिससे एंटीजेनिक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम प्राप्त होता है। विशिष्ट एंटीबॉडी वाले ऐसे कणों के बाद के एग्लूटीनेशन से एग्लूटीनेट (अवक्षेप) को नग्न आंखों से देखा जा सकता है। अप्रत्यक्ष (निष्क्रिय) रक्तगुल्म (आरआईएचए) की प्रतिक्रिया एक एंटीजेनिक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम का उपयोग करके रक्त सीरम एंटीबॉडी का पता लगाती है, जो कि एरिथ्रोसाइट्स है जिसमें एंटीजन उन पर adsorbed होते हैं।

उन पर अधिशोषित एंटीजन के साथ एरिथ्रोसाइट्स संबंधित रक्त सीरम एंटीबॉडी के साथ परस्पर क्रिया करते हैं, जिससे एरिथ्रोसाइट्स एक साथ चिपक जाते हैं और स्कैलप्ड तलछट के रूप में ट्यूब या सेल के नीचे गिर जाते हैं। एक नकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, एरिथ्रोसाइट्स एक बटन के रूप में बस जाते हैं।

RNHA को प्लास्टिक की गोलियों में या रक्त सीरम के कमजोर पड़ने वाले टेस्ट ट्यूब में रखा जाता है, जिसमें एक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम जोड़ा जाता है।

कभी-कभी एक एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम का उपयोग किया जाता है - एरिथ्रोसाइट्स जिस पर एंटीबॉडी का विज्ञापन किया जाता है। इस प्रतिक्रिया को रोंगा कहा जाता है - रिवर्स इनडायरेक्ट हेमग्लूटिनेशन रिएक्शन।

आरएनजीए घटक:

रोगी के रक्त का सीरम (कमजोर पड़ने 1:25);

एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम (अध्ययन किए गए रोगज़नक़ के प्रतिजन के साथ भरी हुई एरिथ्रोसाइट्स);

घोल धो लें।

आरएनजीए मंचन। प्रतिरक्षाविज्ञानी अध्ययन के लिए प्लेट के सात कुओं में फॉस्फेट बफर घोल की दो बूंदें डाली जाती हैं। रोगी के रक्त सीरम की दो बूंदों को पहले कुएं में डाला जाता है, जिसके बाद 2 बूंदों को पहले कुएं से दूसरे कुएं में, दूसरे से तीसरे कुएं में स्थानांतरित किया जाता है, आदि। छठे कुएं से 2 बूंदें निकाल दी जाती हैं। सभी सात कुओं (6 प्रायोगिक और 1 नियंत्रण) में एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम की 2 बूंदें डालें। प्रत्येक ऑपरेशन के बाद, पिपेट को धोने के घोल में कुल्ला करना आवश्यक है। प्लेटों को कमरे के तापमान पर 45 मिनट के लिए छोड़ दिया जाता है, जिसके बाद परिणामों को ध्यान में रखा जाता है।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया इस तथ्य में शामिल है कि जब एक एंटीजन को एंटीबॉडी के साथ जोड़ा जाता है, तो एक प्रतिरक्षा परिसर बनता है, जिसमें एंटीबॉडी के एफसी टुकड़े के माध्यम से पूरक जुड़ा होता है। यदि एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है, तो पूरक मुक्त रहता है। मिश्रण में एक हेमोलिटिक प्रणाली जोड़कर नि: शुल्क पूरक का पता लगाया जाता है जिसमें राम एरिथ्रोसाइट्स और उनके खिलाफ एंटीबॉडी होते हैं। एक सकारात्मक प्रतिक्रिया एंटीजन + एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के पूरक बंधन के परिणामस्वरूप हेमोलिसिस की अनुपस्थिति है। एरिथ्रोसाइट + एंटीरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के पूरक बंधन के परिणामस्वरूप हेमोलिसिस की उपस्थिति एक नकारात्मक प्रतिक्रिया है।

आरएसके घटक:

स्वस्थ रक्त सीरम;

रोगी के रक्त का सीरम (पतला 1:5);

प्रतिक्रिया का प्रतिजनी घटक एक निष्क्रिय रोगज़नक़ है;

काम करने वाली खुराक के अनुरूप एक कमजोर पड़ने में पूरक। पूरक गिनी पिग के रक्त सीरम से प्राप्त किया जाता है। पूरक अनुमापांक इसकी न्यूनतम खुराक है, जो हेमोलिटिक सीरम की उपस्थिति में एरिथ्रोसाइट्स के पूर्ण हेमोलिसिस का कारण बनता है। सीएससी की सेटिंग में प्रयुक्त पूरक की कार्यशील खुराक इसके अनुमापांक से 30% अधिक है;

हेमोलिटिक सिस्टम - राम एरिथ्रोसाइट्स का निलंबन खरगोश एंटीबॉडी के साथ राम एरिथ्रोसाइट्स के लिए इलाज किया जाता है।

धोने का घोल।

आरएसके सेटिंग। आरएसके ने दो परखनलियों में डाला - प्रायोगिक और नियंत्रण। रोगी के रक्त सीरम के 0.5 मिलीलीटर को टेस्ट ट्यूब में जोड़ा जाता है, एक स्वस्थ दाता के रक्त सीरम के 0.5 मिलीलीटर को नियंत्रण ट्यूब में जोड़ा जाता है, 0.5 मिलीलीटर रोगजनक लाइसेट और 0.5 मिलीलीटर पूरक दोनों ट्यूबों में जोड़ा जाता है। प्रत्येक ऑपरेशन के बाद, पिपेट को धोने के घोल में कुल्ला करना आवश्यक है। ट्यूबों को थर्मोस्टेट में 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 30 मिनट के लिए रखा जाता है। ऊष्मायन के बाद, हेमोलिटिक प्रणाली के 1.0 मिलीलीटर को दोनों टेस्ट ट्यूबों में जोड़ा जाता है। ट्यूबों को हिलाया जाता है और थर्मोस्टेट में 37 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए रखा जाता है। टेस्ट ट्यूब में सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, नियंत्रण ट्यूब में हेमोलिसिस (रंगहीन तरल और एरिथ्रोसाइट तलछट) में देरी होती है - एरिथ्रोसाइट्स के हेमोलिसिस।

पाठ की तैयारी के लिए साहित्य:

1. बोरिसोव माइक्रोबायोलॉजी, वायरोलॉजी, इम्यूनोलॉजी। एम।, 2002।

2. मेडिकल माइक्रोबायोलॉजी, वायरोलॉजी और इम्यूनोलॉजी। ईडी। . एम।, 2004।

3. पॉज़्देव माइक्रोबायोलॉजी। एम।, जियोटार-मीडिया, 2005।

यह एरिथ्रोसाइट्स या तटस्थ सिंथेटिक सामग्री (उदाहरण के लिए, लेटेक्स कण) का उपयोग करता है, जिसकी सतह पर एंटीजन (बैक्टीरिया, वायरल, ऊतक) या एंटीबॉडी का विज्ञापन किया जाता है। उनका एग्लूटीनेशन तब होता है जब उपयुक्त सीरा या एंटीजन जोड़े जाते हैं। एंटीजन के साथ संवेदनशील आरबीसी को एंटीजेनिक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम कहा जाता है और एंटीबॉडी का पता लगाने और उनका अनुमापन करने के लिए उपयोग किया जाता है। एरिथ्रोसाइट्स एंटीबॉडी द्वारा संवेदनशील होते हैं। इम्युनोग्लोबुलिन एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम कहा जाता है और एंटीजन का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है।

निष्क्रिय रक्तगुल्म प्रतिक्रिया का उपयोग बैक्टीरिया (टाइफाइड और पैराटाइफाइड, पेचिश, ब्रुसेलोसिस, प्लेग, हैजा, आदि), प्रोटोजोआ (मलेरिया) और वायरस (इन्फ्लूएंजा, एडेनोवायरस संक्रमण, वायरल हेपेटाइटिस बी, खसरा, टिक-जनित) के कारण होने वाले रोगों के निदान के लिए किया जाता है। एन्सेफलाइटिस, क्रीमियन रक्तस्रावी बुखार, आदि), साथ ही कुछ हार्मोन का निर्धारण करने के लिए, रोगी की दवाओं और हार्मोन, जैसे पेनिसिलिन और इंसुलिन के प्रति अतिसंवेदनशीलता की पहचान करने के लिए।

निष्क्रिय रक्तगुल्म (RPHA) की प्रतिक्रिया। निष्क्रिय रक्तगुल्म परीक्षण सीरोलॉजिकल निदान का एक संवेदनशील तरीका है और इसका उपयोग प्रारंभिक और पूर्वव्यापी निदान दोनों के लिए किया जाता है, साथ ही टीकाकरण वाले लोगों की प्रतिरक्षात्मक स्थिति का निर्धारण करने के लिए भी किया जाता है। टुलारेमिया के रोगियों में, एंटीबॉडी आमतौर पर बीमारी के पहले या दूसरे सप्ताह के अंत में पाए जाते हैं, 1-1.5 महीने के बाद टीपीएचए टाइटर्स अपने अधिकतम मूल्यों (1: 100,000-1: 20,000, कम अक्सर अधिक) तक पहुंच जाते हैं। जिसके बाद वे 1:100-1:200 के स्तर पर लंबे समय तक बने रहते हैं।

टीकाकरण में, एंटीबॉडी भी लगातार पाए जाते हैं, हालांकि, निचले टाइटर्स में, टीकाकरण के बाद 1:2000-1:5000 1-1.5 महीने से अधिक नहीं, वे 1:20-1:80 के निम्न स्तर पर कई वर्षों तक बने रहते हैं।

तुलारेमिया एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम (एंटीजेनिक) RPHA की स्थापना के लिए प्रतिजन के रूप में कार्य करता है। दवा को औपचारिक रूप से राम एरिथ्रोसाइट्स टुलारेमिया एंटीजन के साथ संवेदनशील बनाया गया है, जो तरल और सूखे रूप में उपलब्ध है। तरल तैयारी - 10% एकाग्रता के औपचारिक समाधान में एरिथ्रोसाइट्स का 10% निलंबन। सूखी lyophilized तैयारी - परिरक्षक के बिना एरिथ्रोसाइट्स के वैक्यूम-सूखे 10% निलंबन। उपयोग करने से पहले, इसे लेबल पर दिए निर्देशों के अनुसार पतला किया जाता है। पॉलीस्टाइनिन प्लेटों में प्रतिक्रिया स्थापित करने के लिए, दोनों दवाओं का उपयोग 2.5% एकाग्रता पर किया जाता है, और माइक्रोवॉल्यूम में प्रतिक्रिया की स्थापना करते समय, 0.5% एकाग्रता पर।

आरपीजीए सेटिंग तकनीक। टेस्ट सीरा को सलाइन 1:5 (1:10) से पतला किया जाता है और 30 मिनट के लिए 56 डिग्री सेल्सियस पर गर्म किया जाता है। उसके बाद, राम एरिथ्रोसाइट्स के लिए विषम एंटीबॉडी को हटाने के लिए, सीरा को औपचारिक रूप से राम एरिथ्रोसाइट्स के 50% निलंबन के साथ इलाज किया जाता है। ऐसा करने के लिए, एरिथ्रोसाइट्स को 2 बूंदों (0.05 मिली) प्रति 1 मिली सीरम की दर से मिलाया जाता है और अच्छी तरह मिलाते हुए मिलाया जाता है। सीरम को एरिथ्रोसाइट्स के पूर्ण अवसादन तक छोड़ दिया जाता है, या कमरे के तापमान पर एक घंटे के बाद सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, जिसके बाद यह शोध के लिए तैयार होता है।

एक पॉलीस्टायर्न प्लेट के कई कुओं में 0.5 मिलीलीटर की मात्रा में पतला तरल डाला जाता है। सीरा के प्रारंभिक अध्ययन में, प्लेट की एक छोटी पंक्ति (6-छेद) में प्रतिक्रिया स्थापित करके उनका परीक्षण करने की सलाह दी जाती है। सीरा की एक छोटी श्रृंखला में एंटीबॉडी का पता लगाने के मामले में, सीरा को तनुकरण (12 कुओं) की एक लंबी श्रृंखला में फिर से जांचा जाता है। पतला करने वाले तरल को फैलाने के बाद, प्रत्येक पंक्ति के पहले कुएं (छोटी या लंबी) में 1:5 तनुकरण में 0.5 मिली टेस्ट सीरा मिलाया जाता है। फिर, उसी मात्रा में, सीरम को दो गुना कमजोर पड़ने के साथ शीर्षक दिया जाता है। इस प्रकार, सीरम पतला 1:10 से 1:320 तक एक छोटी श्रृंखला में प्राप्त किया जाता है, और एक लंबे समय में - 1:10 से 1:20480 तक। सीरा के अनुमापन के बाद, प्रत्येक कुएं में संवेदीकृत एरिथ्रोसाइट्स के 2.5% निलंबन की एक बूंद (0.05 मिली) डाली जाती है। सजातीय निलंबन प्राप्त होने तक प्लेटों की सामग्री को अच्छी तरह से हिलाया जाता है। प्लेटों को कमरे के तापमान पर टेबल की एक स्थिर सतह पर छोड़ दिया जाता है। प्रतिक्रिया का प्रारंभिक पंजीकरण 2-3 घंटों के बाद किया जाता है, कुओं में एरिथ्रोसाइट्स के पूर्ण अवसादन के बाद अनुमापांक का अंतिम निर्धारण किया जाता है। प्रतिक्रिया के लिए निम्नलिखित नियंत्रण प्रदान किए जाते हैं: 1) 0.5 मिलीलीटर की मात्रा में 1:10 के कमजोर पड़ने पर परीक्षण सीरम + असुरक्षित एरिथ्रोसाइट्स के 2.5% निलंबन की 1 बूंद; 2) गैर-संवेदी एरिथ्रोसाइट्स के 2.5% निलंबन के 0.5 मिलीलीटर + 1 बूंद की मात्रा में एक पतला तरल; 3) संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स के 2.5% निलंबन के 0.5 मिलीलीटर + 1 बूंद की मात्रा में तरल को पतला करना। सभी नियंत्रणों को स्पष्ट रूप से नकारात्मक प्रतिक्रिया देनी चाहिए।

आरपीजीए का लेखांकन और मूल्यांकन। प्रतिक्रिया का मूल्यांकन निम्नलिखित योजना के अनुसार किया जाता है:

1) एक तीव्र सकारात्मक प्रतिक्रिया (++++) - एरिथ्रोसाइट्स एक "छाता" के रूप में एक समान परत में कुएं के नीचे गिरते हैं, जिसमें स्कैलप्ड किनारों को अक्सर देखा जाता है;

2) सकारात्मक प्रतिक्रिया (+++) - एरिथ्रोसाइट्स छेद के नीचे के कम से कम 2/3 को कवर करते हैं;

3) कमजोर सकारात्मक प्रतिक्रिया (++) - एग्लूटीनेट छोटा है और छेद के बहुत केंद्र में स्थित है;

4) संदिग्ध प्रतिक्रिया (+) - छेद के बहुत केंद्र में एरिथ्रोसाइट तलछट के चारों ओर एग्लूटीनेट के अलग-अलग दाने होते हैं;

5) नकारात्मक (-) - छेद के तल पर, एरिथ्रोसाइट्स एक "बटन" या चिकनी, तेज परिभाषित किनारों के साथ एक छोटी अंगूठी के रूप में बस जाते हैं।

सीरम टिटर को अंतिम सीरम कमजोर पड़ने के अनुसार ध्यान में रखा जाता है, जिसने बहुत स्पष्ट प्रतिक्रिया दी (कम से कम तीन प्लस)। 1:100 और उससे अधिक के कमजोर पड़ने को डायग्नोस्टिक टिटर माना जाता है, हालांकि, आरए के मामले में, इसकी वृद्धि की निगरानी करना आवश्यक है।

टुलारेमिया में टीपीएचए काफी विशिष्ट है और केवल ब्रुसेलोसिस सेरा के साथ कुछ क्रॉस-रिएक्शन का पता लगाता है। टीपीएचए में टाइटर्स की ऊंचाई से विभेदक निदान संभव है, जो एक समरूप प्रतिजन के साथ बहुत अधिक हैं।

माइक्रोवॉल्यूम में RPHA स्थापित करने की तकनीक। RPHA को ताकाची-प्रकार के माइक्रोटाइटर (या माइक्रोपिपेट्स के साथ गोल तल माइक्रोटाइटर प्लेट्स) का उपयोग करके माइक्रोवॉल्यूम में किया जा सकता है, जो सामग्री को 25 μl और 50 μl की मात्रा में शीर्षक देने की अनुमति देता है। प्रतिक्रियाओं को स्थापित करने की तकनीक, सभी कार्यों का क्रम वही है जो पॉलीस्टाइनिन प्लेटों में अध्ययन में होता है। हालांकि, यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि माइक्रोमेथोड की संवेदनशीलता आमतौर पर मैक्रोमेथोड की तुलना में एक कमजोर पड़ने (यानी, 2 गुना) कम होती है।

ड्रॉपर पिपेट का उपयोग करके माइक्रोटिटर में प्रतिक्रिया स्थापित करने के लिए, प्रत्येक कुएं में 50 μl की मात्रा में एक कमजोर पड़ने वाला तरल पेश किया जाता है। फिर, 50 μl सिर के साथ टाइट्रेटर्स का उपयोग करके, सिर को उसमें डुबो कर परीक्षण सीरम लिया जाता है। सुनिश्चित करें कि तरल ने अनुमापांक सिर को भर दिया है। सीरम के साथ अनुमापांक को पहले कुएं में स्थानांतरित किया जाता है और इसे एक ऊर्ध्वाधर स्थिति में रखते हुए, दोनों दिशाओं में कई घूर्णी गति करते हैं। फिर अनुमापांक को अगले कुएं में स्थानांतरित कर दिया जाता है और हेरफेर दोहराया जाता है। अनुमापन एक साथ कई पंक्तियों में किया जा सकता है। पूरी पंक्ति के अनुमापन के बाद, घूर्णी आंदोलनों के माध्यम से टिट्रेटर को आसुत जल (2 भागों के परिवर्तन के साथ) से धोया जाता है, सिर से पानी को एक स्वाब से हटा दिया जाता है और बर्नर की लौ पर जला दिया जाता है।

अनुमापन के बाद, कुओं में एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम के 25 μl जोड़े जाते हैं। माइक्रोवॉल्यूम में आरपीएचए के लिए डायग्नोस्टिकम की एकाग्रता 0.5% होनी चाहिए (यानी, एरिथ्रोसाइट्स का 2.5% निलंबन अतिरिक्त रूप से 5 बार पतला होता है)। एरिथ्रोसाइट्स को जोड़ने के बाद, एक सजातीय निलंबन प्राप्त होने तक प्लेटों को धीरे से हिलाया जाना चाहिए। परिणाम 1-1.5 घंटे के बाद पहले ही दर्ज किए जा सकते हैं, जो एक माइक्रोटिटर में RPHA का एक महत्वपूर्ण लाभ है। इसके अलावा, इस विधि में प्रतिक्रिया और परीक्षण सीरा के सभी अवयवों की एक छोटी मात्रा की आवश्यकता होती है।

प्रतिक्रिया का हिसाब इस प्रकार है:

1) "+" - पूर्ण रक्तगुल्म, जिसमें एरिथ्रोसाइट्स "छाता" के रूप में एक समान परत में कुएं के नीचे तक गिरते हैं, नीचे के कम से कम 2/3 पर कब्जा कर लेते हैं;

2) "+ -" - आंशिक रक्तगुल्म, जिसमें एरिथ्रोसाइट्स छोटे आकार की ढीली अंगूठी के रूप में नीचे की ओर गिरते हैं;

3) "-" - हेमग्लूटिनेशन की अनुपस्थिति, जब एरिथ्रोसाइट्स एक छोटे बटन या एक चिकनी किनारे के साथ रिंग के रूप में नीचे की ओर गिरते हैं।

टीपीएचए में प्राप्त सकारात्मक परिणाम की विशिष्टता को तीन-घटक प्रतिक्रिया का उपयोग करके परीक्षण किया जा सकता है - निष्क्रिय हेमाग्लगुटिनेशन (आरपीएचए) के निषेध की प्रतिक्रिया।

आरटीपीजीए सेटिंग तकनीक। यह प्रतिक्रिया RPHA के सकारात्मक परिणाम की विशिष्टता की पुष्टि करने के लिए निर्धारित है जब यह संदेह में है या विशेष रूप से महामारी विज्ञान के हित में है। प्रतिक्रिया तंत्र में रक्तगुल्म का विशिष्ट निषेध होता है जब परीक्षण सीरम में मारे गए टुलारेमिया बैक्टीरिया का निलंबन जोड़ा जाता है। प्रतिक्रिया में तीन घटक परस्पर क्रिया करते हैं: परीक्षण सीरम, विशिष्ट टुलारेमिया एंटीजन और एंटीजेनिक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम RTPGA को आमतौर पर 7-8 कुओं की एक पंक्ति में रखा जाता है। आरटीपीजीए के समानांतर दूसरा आरपीजीए स्थापित करने की सलाह दी जाती है। 0.25 मिलीलीटर पतला तरल कुओं की दो पंक्तियों में डाला जाता है, फिर 0.25 मिलीलीटर की मात्रा में परीक्षण सीरम को दोनों पंक्तियों के पहले कुओं में जोड़ा जाता है और शीर्षक दिया जाता है। सीरम कमजोर पड़ने की दो समान पंक्तियाँ प्राप्त होती हैं। दूसरी पंक्ति के सभी कुओं में 0.25 मिलीलीटर कमजोर पड़ने वाला तरल और पहली पंक्ति के कुओं में टुलारेमिया बैक्टीरिया के निलंबन के 0.25 मिलीलीटर जोड़ें। तुलारेमिया डायग्नोस्टिकम का उपयोग किया जाता है (प्रति 1 मिली में 25 बिलियन टुलारेमिया बैक्टीरिया युक्त), पहले 50 बार पतला। इस तरह के निलंबन में 1 मिली में 500 मिलियन बैक्टीरिया या 0.25 मिली की मात्रा में 125 मिलियन होते हैं। एंटीजन जोड़ने के बाद, प्लेट को कमरे के तापमान पर 1 घंटे के लिए छोड़ दिया जाता है, जिसके बाद एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम की एक बूंद (0.05 मिली) दोनों पंक्तियों के सभी कुओं में डाली जाती है, प्लेट को हिलाया जाता है और टेबल की सपाट सतह पर छोड़ दिया जाता है। लेखांकन 2-3 घंटे में किया जाता है।

आरटीपीजीए का लेखांकन और मूल्यांकन। यदि परीक्षण सीरम में विशिष्ट टुलारेमिया एंटीबॉडी होते हैं, तो वे अतिरिक्त एंटीजन द्वारा निष्प्रभावी हो जाते हैं और कुओं की पहली पंक्ति में रक्तगुल्म नहीं होगा, या, उच्च सीरम अनुमापांक के साथ, रक्तगुल्म की तुलना में कम (2-4) कुओं में देखा जाएगा। TPHA के साथ पंक्ति। इस मामले में, परिणामों की विशिष्टता की पुष्टि की जाती है। यदि रक्तगुल्म दोनों पंक्तियों में नोट किया जाता है, अर्थात। RTHA और RPHA के परिणाम मेल खाते हैं, यह परीक्षण सीरम में टुलारेमिया एंटीबॉडी की अनुपस्थिति को इंगित करता है। इस मामले में, RPHA का प्राथमिक परिणाम गैर-विशिष्ट माना जाता है।

माइक्रोवॉल्यूम में आरटीपीजीए स्थापित करने की तकनीक। RTHA, साथ ही RPHA, एक ताकाची-प्रकार के माइक्रोटिटर का उपयोग करके माइक्रोवॉल्यूम में किया जा सकता है। ऐसा करने के लिए, प्रत्येक 7-8 कुओं की दो पंक्तियों में माइक्रोप्लेट के कुओं में 0.25 μl पतला तरल जोड़ा जाता है। फिर, एक अनुमापांक की मदद से, परीक्षण सीरम का 0.25 μl स्कोर किया जाता है और दोनों पंक्तियों में शीर्षक दिया जाता है। उसके बाद, पहली पंक्ति में प्रत्येक कुएं में टुलारेमिया एंटीजन के 25 μl (1 मिलीलीटर में 500 मिलियन टुलारेमिया बैक्टीरिया की सांद्रता) और दूसरी पंक्ति में 25 μl पतला तरल जोड़ा जाता है। प्लेटों को कमरे के तापमान पर 1 घंटे के लिए छोड़ दिया जाता है, जिसके बाद दोनों पंक्तियों के सभी कुओं में 25 μl एंटीजेनिक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम (0.5% एकाग्रता) जोड़ा जाता है। परिणामों का लेखांकन और मूल्यांकन मैक्रोवॉल्यूम में प्रतिक्रिया के समान ही किया जाता है।

रक्तगुल्म निषेध प्रतिक्रिया

रक्तगुल्म प्रतिक्रिया

एग्लूटिनेशन रिएक्शन

एग्लूटीनेशन रिएक्शन (आरए) एक इलेक्ट्रोलाइट (आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान) की उपस्थिति में एंटीबॉडी की कार्रवाई के तहत रोगाणुओं या अन्य कोशिकाओं का एग्लूटीनेशन और वर्षा है। परिणामी अवक्षेपण कहलाता है जमाना।

प्रतिक्रिया के लिए आपको चाहिए:

1. एंटीबॉडी (एग्लूटीनिन) - रोगी के सीरम या प्रतिरक्षा सीरम में होते हैं।

2. एंटीजन - जीवित या मारे गए सूक्ष्मजीवों, एरिथ्रोसाइट्स या अन्य कोशिकाओं का निलंबन।

3. आइसोटोनिक समाधान।

सेरोडायग्नोसिस के लिए एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया व्यापक रूप से टाइफाइड बुखार, पैराटाइफाइड बुखार (विडाल प्रतिक्रिया), ब्रुसेलोसिस (राइट प्रतिक्रिया), आदि के लिए उपयोग की जाती है। एंटीबॉडी है रोगी का सीरम, और प्रतिजन एक ज्ञात सूक्ष्म जीव है।

जब रोगाणुओं या अन्य कोशिकाओं की पहचान की जाती है, तो उनका निलंबन प्रतिजन के रूप में कार्य करता है, और एक ज्ञात प्रतिरक्षा सीरम एक एंटीबॉडी के रूप में कार्य करता है। आंतों के संक्रमण, काली खांसी आदि के निदान में इस प्रतिक्रिया का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।

प्रयोगशाला अभ्यास में, वे दो हेमाग्लगुटिनेशन प्रतिक्रियाओं (आरएचए) का उपयोग करते हैं जो उनकी क्रिया के तंत्र में भिन्न होते हैं।

पहला आरजीएसीरोलॉजी को संदर्भित करता है। इस प्रतिक्रिया में, संबंधित एंटीबॉडी (हेमाग्लगुटिनिन) के साथ बातचीत करते समय एरिथ्रोसाइट्स को एग्लूटीन किया जाता है। रक्त समूहों को निर्धारित करने के लिए प्रतिक्रिया का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।

दूसरा आरजीएसीरोलॉजिकल नहीं है। इसमें लाल रक्त कोशिकाओं का जमाव एंटीबॉडी के कारण नहीं, बल्कि वायरस द्वारा निर्मित विशेष पदार्थों के कारण होता है। उदाहरण के लिए, इन्फ्लूएंजा वायरस मुर्गियों और गिनी सूअरों के एरिथ्रोसाइट्स को बढ़ाता है, पोलियो वायरस भेड़ के एरिथ्रोसाइट्स को बढ़ाता है। यह प्रतिक्रिया परीक्षण सामग्री में किसी विशेष वायरस की उपस्थिति का न्याय करना संभव बनाती है।

यह एक सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया है जिसमें विशिष्ट एंटीवायरल एंटीबॉडी, वायरस (एंटीजन) के साथ बातचीत करते हुए, इसे बेअसर कर देते हैं और लाल रक्त कोशिकाओं को एग्लूटीनेट करने की क्षमता से वंचित कर देते हैं, यानी रक्तगुल्म प्रतिक्रिया को रोकते हैं। हेमाग्लगुटिनेशन इनहिबिशन रिएक्शन (एचआईटीए) की उच्च विशिष्टता एचए के दौरान पाए गए प्रकार और यहां तक ​​​​कि वायरस के प्रकार को निर्धारित करने के लिए इसका उपयोग करने की अनुमति देती है।

अप्रत्यक्ष (निष्क्रिय) रक्तगुल्म (RIHA) की प्रतिक्रिया इस तथ्य पर आधारित है कि एरिथ्रोसाइट्स, यदि एक घुलनशील प्रतिजन उनकी सतह पर सोख लिया जाता है, तो अधिशोषित प्रतिजन के प्रति एंटीबॉडी के साथ अंतःक्रिया करते समय एग्लूटीनेट करने की क्षमता प्राप्त कर लेते हैं। RNGA योजना को अंजीर में दिखाया गया है। कई संक्रमणों के निदान में RNHA का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।

चावल।निष्क्रिय रक्तगुल्म (RPHA) की प्रतिक्रिया की योजना। ए - एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम प्राप्त करना; बी - आरएनजीए: 1-एरिथ्रोसाइट: 2 - अध्ययन किया गया प्रतिजन; 3 - एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम; 4 - अध्ययन किए गए एंटीजन के लिए एंटीबॉडी: 5 - एग्लूटीनेट।

RNHA की मदद से, एक अज्ञात एंटीजन का निर्धारण किया जा सकता है यदि ज्ञात एंटीबॉडी को एरिथ्रोसाइट्स पर अधिशोषित किया जाता है।

अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म की प्रतिक्रिया, RNGA
(अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म परीक्षण)

एरिथ्रोसाइट्स की क्षमता के आधार पर एंटीजन और एंटीबॉडी का पता लगाने की एक विधि, जिसकी सतह पर एंटीजन या एंटीबॉडी को पहले से अधिशोषित किया जाता है, समरूप सीरा या संबंधित एंटीजन की उपस्थिति में एग्लूटीनेट करने के लिए।

जब एंटीजन का पता लगाया जाता है, तो प्रतिक्रिया को रिवर्स पैसिव हेमग्लूटीनेशन - ROPHA (रिवर्स पैसिव हेमग्लूटीनेशन टेस्ट) द्वारा इंगित किया जाता है, और जब एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है - पैसिव हेमग्लूटीनेशन द्वारा - RPHA (निष्क्रिय हेमग्लगुटिनेशन टेस्ट)। RNHA ने हेपेटाइटिस बी वायरस, विशेष रूप से HBsAg और इसके एंटीबॉडी के साथ संक्रमण के सीरोलॉजिकल मार्करों का पता लगाने के लिए व्यापक आवेदन पाया है।

वर्तमान में, एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम के निर्माण के लिए विभिन्न तरीके विकसित किए गए हैं, जो एरिथ्रोसाइट्स (टैनिन, ग्लूटाराल्डिहाइड, क्रोमियम क्लोराइड, रिवानॉल, आदि का उपयोग करके), उनकी प्रजातियों (मानव, राम, चिकन, टर्की, आदि) के संवेदीकरण के तरीकों में भिन्न हैं। ..), प्रतिक्रिया की स्थापना के लिए विकल्प (माइक्रोटिटर प्लेट्स में, टेस्ट ट्यूब, केशिकाओं, आदि में) और रिकॉर्डिंग परिणाम (दृश्य और वाद्य)। HBsAg और एंटी-HBs का पता लगाने के लिए एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम हमारे देश और विदेश दोनों में कई उद्यमों और फर्मों द्वारा उत्पादित किए जाते हैं।

अधिक बार, RNHA को माइक्रोटिटर प्लेटों में किया जाता है, जिसमें परीक्षण सीरम और नियंत्रण नमूनों को पहले से तैयार किया जाता है। एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम और ऊष्मायन की शुरूआत के बाद, प्रतिक्रिया के परिणाम दर्ज किए जाते हैं। नमूने जिसमें एरिथ्रोसाइट एग्लूटिनेशन होता है, एक उल्टे "छाता" के रूप में, सकारात्मक माना जाता है। एक नकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, एरिथ्रोसाइट्स एक अंगूठी या डिस्क के रूप में कुएं के नीचे बस जाते हैं।

प्राप्त परिणामों की विशिष्टता की पुष्टि करने के लिए, प्रतिक्रिया एक "प्रयोगात्मक" एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम (यानी, एंटीजन या एंटीबॉडी के साथ संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स) और "नियंत्रण" डायग्नोस्टिकम (यानी, एरिथ्रोसाइट्स एंटीजन या एंटीबॉडी के साथ संवेदनशील नहीं हैं) दोनों के साथ की जाती है। . "नियंत्रण" नैदानिक ​​उत्पाद के साथ एक सकारात्मक प्रतिक्रिया की उपस्थिति एक झूठी सकारात्मक प्रतिक्रिया को इंगित करती है। गैर-विशिष्ट प्रतिक्रियाओं को खत्म करने के लिए, परीक्षण सीरम का इलाज गैर-संवेदी एरिथ्रोसाइट्स के साथ किया जाता है। RNGA आयोजित करने के लिए एक पूर्वापेक्षा एक न्यूट्रलाइजेशन रिएक्शन, यानी पुष्टिकरण परीक्षण है।

आरपीजी, वीआईईएफ और आरएसके जैसे तरीकों की तुलना में, अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म की प्रतिक्रिया में उच्च संवेदनशीलता (200-400 बार) होती है। इस प्रकार, TPHA में HBsAg का पता 6-10 एनजी/एमएल की सांद्रता पर लगाया जा सकता है। प्रतिक्रिया की सादगी और तीव्रता (20 - 30 मिनट) ने HBsAg का पता लगाने के लिए रक्त आधान सेवा में इस पद्धति के व्यापक उपयोग को निर्धारित किया।

एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम के अलावा, HBsAg और एंटी-HBs का पता लगाने के लिए और IgM वर्ग के एंटी-HBc, एंटी-HBc (सॉलिड-फ़ेज़ वेरिएंट), HBeAg, हेपेटाइटिस A वायरस एंटीजन और का पता लगाने के लिए नैदानिक ​​तैयारी विकसित की गई है। इसके प्रति एंटीबॉडी, हालांकि, उन सभी को व्यावहारिक स्वास्थ्य देखभाल में आवेदन नहीं मिला है।