Tässä luvussa käsitellään kliiniseen käyttöön tarkoitettujen monoklonaalisten vasta-ainevalmisteiden (jäljempänä MAb:t) ei-toivotun immunogeenisyyden ilmenemismuotoja. Näitä ovat monoklonaalisten vasta-aineiden immunogeenisuuteen vaikuttavat tekijät, immunogeenisyyden kliiniset vaikutukset, analyyttiset kysymykset, monoklonaalisia vasta-aineita neutraloivien vasta-aineiden arviointi ja riskiin perustuva lähestymistapa mAb-immunogeenisyyden analysointiin.

1. Esittely

Ei-toivotun immunogeenisyyden ilmentyminen voi olla merkittävä ongelma hoidettaessa potilaita biologisilla lääkkeillä. Bioteknologialla saatuihin proteiineihin perustuvien lääkkeiden immunogeenisyyden arviointia koskevat suositukset on esitetty näiden sääntöjen luvussa 11, joka koskee myös Mab-lääkkeitä. Vaikka monet monoklonaalisten vasta-aineiden immunogeenisyyden aspektit eivät eroa muiden terapeuttisten proteiinien vastaavista, jotkin niistä vaativat lähempää tarkastelua. Monoklonaalisten vasta-aineiden aiheuttamaa vasta-aineita, jotka ristireagoivat ja neutraloivat endogeenisiä vasta-aineita (kuten esimerkiksi erytropoietiinin tapauksessa), ei odoteta indusoituvan, koska niitä ei käytetä korvaushoitona.

Useimmiten mAb-lääkkeitä käytetään terapeuttisina tai diagnostisina aineina, kun on olemassa terapeuttinen tai diagnostinen vaihtoehto. Tietyt immunogeenisyyden spesifiset näkökohdat ovat kuitenkin yksinomaan tai vallitsevia tässä luvussa käsitellyille mAb-valmisteille tai uusille mAb-modifioiduille valmisteille (esim. Fab-fragmentit, scFv-yksiketjuiset Fv-fragmentit, nano-aineet, minivasta-aineet). Mab-valmisteet edustavat merkittävää ja erittäin tärkeää biologisten lääkkeiden alaryhmää.

Indikaatioiden kirjo mAb:n käyttöön sairauksien hoidossa on hyvin laaja. Monien mAb-valmisteiden käyttöön liittyy ei-toivotun immunogeenisyyden ilmenemismuotoja, mikä johtaa joissakin tapauksissa riittämättömään kliiniseen vasteeseen tai harvinaisten vakavien haittavaikutusten kehittymiseen, jotka vaativat kliinistä puuttumista. Monenaalisten vasta-aineiden käyttöaiheisiin kehitetty ja rekisteröity laaja valikoima lääkkeitä estää kaikissa tilanteissa sovellettavien yksityisten suositusten laatimisen.

2. Laajuus

Yleiset periaatteet liittyvät ei-toivotun immuunivasteen systemaattisen arvioinnin kehittämiseen ja suorittamiseen vastaanottajilla terapeuttisen tai in vitro diagnostisen mAb:n käyttöönoton jälkeen. Vaatimukset koskevat MAb-valmisteita, niiden johdannaisia ​​(esim. Fab-fragmentit, ScFv, nanovasta-aineet, minivasta-aineet) ja MAb-komponentteja sisältäviä tuotteita (esim. konjugaatteja, Fc-kytkettyjä fuusioproteiineja).

Tässä luvussa käsitellään tärkeimpiä laatunäkökohtia ja kliinisiä ilmenemismuotoja, jotka ovat tärkeitä, jotta voidaan asianmukaisesti käsitellä ongelmia, jotka liittyvät ei-toivotun immuunivasteen kehittymisen riskin tunnistamiseen ja arvioimiseen tietyn mAb-lääkkeen käytölle potilailla, joilla on tietty ilmoitettu käyttöaihe. Tämän luvun säännökset koskevat loppukehitysvaiheessa olevia tuotteita, erityisesti rekisteröintihakemusvaiheessa, mutta monet säännökset koskevat mAb-tuotteiden aikaisempia kehitysvaiheita.

3. Yleiset määräykset

Tätä lukua on tarkasteltava yhdessä näiden sääntöjen muiden lukujen ja muiden unionin lainsäädäntöön sisältyvien asiaankuuluvien säädösten kanssa.

4. Monoklonaalisten vasta-ainevalmisteiden immunogeenisyyden arvioinnissa käytettyjen seulonta- ja varmistustutkimusten ongelmat

4.1. Analyyttiset menetelmät vasta-aineiden havaitsemiseksi

Mab-valmisteen vasta-ainepitoisuuden määrittämiseksi voidaan käyttää mitä tahansa immunologisten määritysmenetelmien muotoa. Kuitenkin määritysmenetelmät, joissa käytetään yksinkertaisia ​​menetelmiä, kuten ELISA tai radioimmunosaostus, eivät sovellu mAb:ille, ellei niitä ole mukautettu tämän vaikeuden voittamiseksi. Tässä suhteessa on tarpeen kehittää muita lähestymistapoja mAb:n määrittelyyn.

Yleinen lähestymistapa on käyttää "siltausmuotoa", kuten ELISA- tai elektrokemiluminesenssi (ECL), jotka eivät vaadi anti-immunoglobuliinireagensseja ja joita voidaan siksi käyttää suoraan mAb-tutkimuksissa. Joissakin tapauksissa tämä menetelmä voi olla vähemmän herkkä kuin muut immunologiset menetelmät ja vaatia merkittäviä kehitysponnisteluja sopivan määritysmenetelmän luomiseksi. Se ei myöskään havaitse tehokkaasti joissakin tapauksissa muodostuvia IgG4-vasta-aineita.

Toinen lähestymistapa on käyttää pintaplasmoniresonanssimenetelmää (jäljempänä SPR). Se ei vaadi anti-immunoglobuliinireagenssien käyttöä anti-MAb-vasta-aineiden havaitsemiseen. Tämä menetelmä on reaaliaikainen, joten se on nopea ja mahdollistaa nopeasti dissosioituvien vasta-aineiden havaitsemisen, joita muut menetelmät voivat jättää huomiotta.

Koska PPR yksinkertaisesti havaitsee proteiinin sitoutumisen päällystettyyn siruun, on varmistettava, että signaali tulee vasta-aineista. Se voi olla vähemmän herkkä kuin muut menetelmät korkean affiniteetin vasta-aineiden havaitsemiseksi, ja automaattisen näytteenvalmistusjärjestelmän puuttuessa sillä voi olla huono suorituskyky (alhainen saanto). Näytteet (yleensä seerumi tai plasma) voivat sisältää aineita, jotka voivat vääristää analyysin tuloksia, eli aiheuttaa matriisivaikutuksen, joka koostuu väärien positiivisten tai väärien negatiivisten tulosten saamisesta ja/tai vasta-ainetasojen virheellisestä arvioinnista.

4.2. Monoklonaalisen vasta-ainevalmisteen läsnäolo analysoitavissa olevissa näytteissä

Koskemattomilla mAb-valmisteilla on suhteellisen pitkät puoliintumisajat ja ne säilyvät verenkierrossa pitkään. Jopa niiden palaset voivat pysyä veressä useita päiviä. Tämä voi merkittävästi monimutkaistaa immuunivasteen havaitsemista johtuen mAb-valmisteen läsnäolosta näytteissä, jotka on kerätty vasta-aineiden havaitsemista varten. Tämä johtaa tyypillisesti artefaktaalisesti alhaiseen arvioon asiaankuuluvien (vaurioituneiden) näytteiden vasta-ainetasoista ja voi olla niin selvä, että se johtaa vääriin negatiivisiin tuloksiin. Näiden vaikeuksien voittamiseksi on ehdotettu useita lähestymistapoja.

Ensimmäinen lähestymistapa on viivyttää näytteenottoa, kunnes mAb-valmistetta on vähennetty tasoille, jotka eivät ole ongelmallisia. Tämä lähestymistapa ratkaisee joidenkin mAb-valmisteiden ongelman, mutta vaatii huolellista tutkimusta, koska se voi johtaa siihen, että immunogeenisyyttä ei havaita, koska indusoitujen vasta-aineiden taso laskee havaitsemattomiin määriin näytteenottohetkellä.

Toinen lähestymistapa on käyttää menetelmää, johon määritetty ongelma vaikuttaa vähiten. Näytteissä olevat lääkejäämät vaikuttavat paljon vähemmän ECL-pohjaisiin menetelmiin kuin muihin menetelmiin, mukaan lukien tavalliset ELISA-sideaineet. Laajalti kuvattu tekniikka ongelman ratkaisemiseksi on sisällyttää Asiakirja, jossa kuvataan kokeen tarkoitus ja metodologia tutkimuksen suorittamiseksi sekä siihen tehdyt muutokset. opintosuunnitelma antigeeni-vasta-ainekompleksin dissosiaatiovaiheen alustava vaihe kaikkien kompleksien tuhoamiseksi ennen vasta-aineiden havaitsemista.

Menetelmistä on kuvattu erilaisia ​​versioita, mukaan lukien happoinkubaatio, joissain tapauksissa yhdessä lääkkeen affiniteettierotuksen kanssa, mutta niiden tuloksia tulee analysoida varoen, koska lisävaiheet voivat johtaa menetelmän pätemättömyyteen. Kolmannessa lähestymistavassa näytteet voidaan laimentaa sellaisen jäännöslääkepitoisuuden saavuttamiseksi, joka ei vaikuta menetelmään. Tämä lähestymistapa vaatii suurta huolellisuutta, koska se voi johtaa väärään negatiiviseen johtopäätökseen immunogeenisuudesta, koska tätä tekniikkaa käyttämällä ei ole herkkyyttä havaita vasta-aineita laimennetuista näytteistä. Joissakin tapauksissa näytteissä oleva Mab-jäännöspitoisuus on määritettävä kvantitatiivisesti. Monissa tapauksissa kaikkien kolmen lähestymistavan yhdistelmää käytetään antimonoklonaalisten vasta-aineiden havaitsemisessa, validoinnissa ja testauksessa lääkkeiden sekoittamisen vähentämiseksi.

4.3. Vahvistavat testit

Vahvistaviin määrityksiin liittyy samoja ongelmia kuin seulontamäärityksiin. Oikea vahvistava kvantitointimenetelmä on valittava ottaen huomioon käytetty seulontamenetelmä. Proteiini A:ta ja proteiini G:tä voidaan käyttää varmistusmenetelmissä sen varmistamiseksi, että positiivinen tulos todellakin johtuu immunoglobuliinista, mutta tähän tarkoitukseen voidaan käyttää muitakin lähestymistapoja.

4.4 Kontrollinäytteet

Keskeinen ongelma Mab-immunogeenisuustutkimuksissa on positiivisena kontrollina toimivien seerumien tuottaminen. Valittua positiivista kontrolliseerumia tai puhdistettua vasta-ainetta tarvitaan määrityksen herkkyyden ja spesifisyyden seuraamiseksi. Jos ihmisseerumia ei saada (esimerkiksi lääkekehityksen alkuvaiheessa), ainoa keino on käyttää eläinseerumia.

Eläinlajin valinnalla näihin tarkoituksiin on tärkeitä vaikutuksia. Ei-ihmiskädelliset kehittävät selvän anti-CDR- ja anti-scaffold-vasteen ihmisen ja humanisoiduille mAb:ille, jotka voivat jäljitellä ihmisen vastetta hyvin tarkasti ja toimia sopivana positiivisena kontrollina. Vaikka muut kuin kädelliset tuottavat vasta-aineita pääasiassa mAb:n vakioalueille, mikä ei ole tyypillistä ihmisen immuunivasteelle. Joissakin tapauksissa anti-idiotyyppisten antiseerumien tai mAb:n käyttö voi toimia positiivisena kontrollina. Oikeat negatiiviset kontrollit on valittava. Epäolennaisia ​​mAb:itä sisältäviä näytteitä voidaan käyttää vahvistavien määritysten spesifisyyden vahvistamiseen.

5. Monoklonaalisten vasta-aineiden lääkkeen indusoimien vasta-aineiden neutralointikyvyn arviointi

MAb:t vaikuttavat useiden eri mekanismien kautta aina yksinkertaisesta antigeenisitoutumisesta, joka itse välittää kliinistä vaikutusta, antigeenin sitoutumiseen ja yhden tai useamman immunobiologisen mekanismin välittämiseen, jotka yhdessä määräävät kokonaiskliinisen vasteen. Siksi, vaikka saattaakin vaikuttaa siltä, ​​että yksinkertainen sitoutuminen on ainoa mekanismi, joka määrittää kliinisen tehon, muut vaikutukset voivat myös vaikuttaa. Joissakin tapauksissa mAb:n useat toiminnot toimivat additiivisesti tai synergistisesti, mikä johtaa yhdistettyyn yhdistettyyn kliiniseen vaikutukseen, mikä joissakin tapauksissa soveltuu vaikeaan kokeelliseen erottamiseen sen selvittämiseksi, kuinka mAb saa aikaan kliinisen vaikutuksensa.

Tässä suhteessa ehjiä mAb:ita käytettäessä on huolehdittava siitä, että lääkkeen Fc-välitteiset immunobiologiset vaikutukset eivät vaikuta kliiniseen tehokkuuteen, vaikka yksinkertaista antigeenin sitoutumista pidettäisiin pääasiallisena vaikutusmekanismina. Tässä suhteessa solupohjainen kvantitointi on edullinen neutralisaation määrittämisessä. Tällaisissa tapauksissa käyttämällä biologisia ja immunologisia kvantitointimenetelmiä on välttämätöntä suorittaa mAb:iden biologisen karakterisoinnin perusteellinen karakterisointi. Sen jälkeen mAb:n ominaisuudet on arvioitava sopivan neutraloinnin kvantifiointistrategian valitsemiseksi. Vasta-aineet, jotka neutraloivat biologisten lääkkeiden biologista aktiivisuutta, voivat heikentää niiden kliinistä tehokkuutta. On tarpeen määrittää kaikkien tuotettujen vasta-aineiden neutralointikyky. Tällaisten tietojen puuttuminen edellyttää perusteluja.

Useimmille biologisille tuotteille sopivin menetelmä vasta-aineiden neutraloivan kyvyn kvantifiointiin on kvantitatiivinen biologinen menetelmä, joka määrittää lääkkeen biologisen aktiivisuuden vasta-aineiden neutraloitumisen. Samanaikaisesti mAb:n kliinisen vaikutustavan luonne viittaa siihen, että selkeimmin kliinisen tehon heikkeneminen tuotetaan vasta-aineilla, jotka estävät mAb:n sitoutumisen kohteeseen.

Siten valitut menetelmät mAb:iden neutraloivan kyvyn määrittämiseksi ovat kompetitiivisia ligandinsitoutumismenetelmiä klassisten kvantitatiivisten biologisten menetelmien sijaan. Tämä erottaa Mab:n immunogeenisyyden arvioinnin kannalta muista biologisten aineiden luokista.

6. Monoklonaalisten vasta-ainevalmisteiden immunogeenisyyden riskinhallinta

6.1. Riskin tunnistaminen Immunogeenisuus

mAb on monimutkainen ilmiö: on useita tekijöitä, joita on vaikea ymmärtää ja jotka tekevät kliinisesti merkittävän immuunivasteen tarkka ennustamisen vaikeaksi terapeuttiselle tai diagnostiselle monoklonaaliselle vasta-aineelle. Koulutettujen T-soluepitooppien havaitsemiseen tähtääviä in vitro prekliinisiä lähestymistapoja on kehitetty, mutta niillä on rajallinen kyky ennustaa lääkkeen immunogeenisyyttä ihmisillä. Samaan aikaan tällaiset tekniikat voivat olla hyödyllisiä valittaessa kandidaattimolekyylejä jatkokehitystä varten. Kuten näiden määräysten luvussa 11 todetaan, on tarpeen tutkia jokaisen uuden lääketieteelliseen käyttöön tarkoitetun monoklonaalisen vasta-aineen immunogeenisyyden standardinäkökohdat ottaen huomioon sen ominaisuudet, ehdotetun käytön luonne ja käyttöaihe. Tulevien tutkimusten suunnittelu perustuu alustaviin tietoihin immunogeenisuudesta varhaisista kliinisistä tutkimuksista, kuten bioanalyyttisten tekniikoiden suorituskykytutkimuksista, olemassa olevien vasta-aineiden havaitsemisesta tai muista tekijöistä, jotka voivat sekoittaa sen käytön aiheuttamien anti-MAB-vasta-aineiden havaitsemisen.

Alla kuvatun riskintunnistus- ja arviointistrategian perusteella immunogeenisuuden standarditutkimusohjelmaa voidaan vähentää (yksityiskohtaisilla perusteilla) tunnistettujen riskien tasosta riippuen tai sitä voidaan joutua vahvistamaan. Hakijan on kaikissa tapauksissa suoritettava perusteellinen riskien tunnistaminen ottaen huomioon tuotteen ominaisuudet ja sen käyttötarkoitus. Alustavat tiedot Tietojen olemassaolo tai puuttuminen muista samankaltaisista monoklonaalisista vasta-aineista (esim. sitoutuminen samaan kohdeluokkaan, samoilla ilmentämisjärjestelmillä) tulee ottaa huomioon. Jos menetelmä mAb-vasta-aineiden havaitsemiseksi tai kliinisten seurausten havaitsemiseksi (esim. mAb-jäännöspitoisuus, PD-parametrit ja mAb-hoidon vaikutus) ei ole riittävän herkkä, riskin havaitseminen voidaan yliarvioida.

Tällaisissa tapauksissa on suositeltavaa seurata tarkemmin anti-MAB-vasteen dynamiikkaa ja korreloida sitä terapeuttisten tulosten kanssa. MAb-rakenne Vasta-aineita voidaan tuottaa erilaisia ​​epitooppeja vastaan, jotka ovat MAb-molekyylin eri osia, esimerkiksi vaihtelevia tai vakioalueita.

Heterologisten (esim. jyrsijäsekvenssien tai kimeeristen mAb:iden) vasta-aineiden tunnistaminen vieraiksi on vasta-ainevälitteisen immuniteetin pääasiallinen syy, ja itse vasta-aineita voidaan tuottaa mitä tahansa niiden osaa vastaan. Kun kyseessä ovat humanisoidut tai täysin ihmisen mAb-sekvenssit, joissa on vain ihmisen immunoglobuliinin aminohapposekvenssejä, immuunivaste ilmenee pääasiassa anti-idiotyyppisten vasta-aineiden muodostumisena, jotka ovat spesifisiä alueiden hypervariaabelille sekvenssille ja määrittämällä antigeeniin sitoutumisen komplementaarisuuden. , joka suurella todennäköisyydellä voi johtaa kliinisen tehon ja vasteen heikkenemiseen mAb-hoitoon. Joissakin tapauksissa voidaan kuitenkin tuottaa vasta-aineita ihmisen ja humanisoitujen mAb:iden vakioaluetta vastaan, mikä voi vaikuttaa niiden efektoritoimintoihin ja mAb:iden kliiniseen tehokkuuteen.

Kliininen kokemus uusista Mab-pohjaisista rakenteista on rajallinen, mikä voi myös lisätä riskin havaitsemista. Erityistä huomiota tulee kiinnittää seuraavan sukupolven lääkkeisiin, kuten bispesifisiin mAb- ja mAb-fragmentteihin, sekä niiden kykyyn paljastaa piilotettuja antigeenideterminantteja. Muuttuneet glykosylaatioprofiilit voivat heikentää tai lisätä molekyylin immunogeenisiä ominaisuuksia (esim. proteiinin rungon suojauksen muutos). Epätyypilliset glykosylaatioprofiilit, kuten uusien ilmentämisjärjestelmien käytön varhaisessa vaiheessa kohdatut, voivat aiheuttaa lisääntyneen immunogeenisyyden riskin verrattuna yleisesti käytettyihin ekspressiojärjestelmiin.

Muita immunogeenisuuteen vaikuttavia tekijöitä ovat valmistusepäpuhtaudet ja muut laatutekijät. Siksi näiden mahdollisten riskien arvioimiseksi, karakterisoimiseksi ja mahdollisesti vähentämiseksi voidaan tarvita perusteellisempia analyyttisiä ja kliinisiä lähestymistapoja, ja laatuun perustuvat riskit on tunnistettava asianmukaisesti. Esimerkiksi mAb:llä kohteeseen, jolla on huomattavaa kokemusta, mutta joka on tuotettu uudella ilmentämisjärjestelmällä, voi olla pienempi havaittu riski sen vaikutusmekanismin suhteen, mutta lisääntynyt riski epäpuhtauksien mahdollisen vaikutuksen suhteen. riittämätön tieto turvallisuudestaan.

Toimintamekanismi. mAb:n toimintamekanismi (esim. sytolyyttinen, apoptoottinen) ja erityisesti kohdemolekyylin ominaisuudet (esim. immunosuppressio tai stimulaatio) on karakterisoitava kunnolla ja tutkittava kattavasti. Anti-MAB-vasta-aineet, jotka kohdistuvat MAb-idioottityyppiin, pyrkivät vähentämään tehoa. Samoin allotyyppisiä tai muita kohtia tunnistavien mAb-vasta-aineiden vaikutusta tulisi tutkia huolellisesti, koska immuunikompleksien muodostuminen voi johtaa ei-toivottuihin reaktioihin vastaanottajassa. Vasta-aineiden epäsuorat vaikutukset, jotka muodostuvat vasteena mAb:ille, voivat myös olla tärkeitä, esimerkiksi mAb:t, jotka kohdistuvat signalointikaskadeihin osallistuviin molekyyleihin, voivat indusoida vasta-aineita, jotka ristisitoutuvat kohdemolekyylien kanssa toimien agonistina, mikä voi johtaa lisääntyneeseen immuunijärjestelmän aktivaatioon. järjestelmässä ja mahdollisesti johtaa sytokiinien vapautumisoireyhtymiin. Yksittäisen potilaan tasolla tätä on melko vaikea ennustaa. Sellaisten mAb-agonistien ja mAb-molekyylien osalta, joiden ristisitoutuminen voi johtaa immuuniaktivaatioon, hakijoiden tulee harkita potilaiden tarkkaa seurantaa tällaisten tapahtumien varhaisten kliinisten tutkimusten aikana.

kliiniset tekijät. Kliinisillä tekijöillä on merkittävä vaikutus immunogeenisuuteen. Immunogeenisuus monoklonaalisille vasta-aineille voi olla iästä riippuvaista, esim. proteiinien aineenvaihdunta vaihtelee lasten ja aikuisten välillä, mikä voi johtaa eroihin immunogeenisyydessä, esim. nuorten niveltulehduksessa käytettävät vasta-aineet verrattuna nivelreumaan vastaavilla annoksilla. Samankaltaisten (samankaltaisten) tai samankaltaisten vasta-aineiden tuominen historiaan voi myös vaikuttaa immunogeenisuuteen. MAb-lääkkeet, joita käytetään jaksoittaisella (jaksottaisella) annosteluohjelmalla (esim. erilaiset annosvälit lääkeannostelun välillä), voivat olla todennäköisemmin immunogeenisiä kuin ne, joita käytetään säännöllisissä annostelu- tai syklisissä hoito-ohjelmissa. Kliinisesti merkittävien vaikutusten läsnäolo mAb-vasta-aineissa määräytyy vasta-aineen sitoutumiskohdan, sen affiniteetin mAb:iin ja sen tiitterin perusteella.

Vasta-aineet monoklonaalisille vasta-aineille voivat olla ohimeneviä ja kadota hoidon aikana, tai päinvastoin, säilyä koko hoidon ajan ja jopa pidempään. Vasta-aineiden tuottaminen joillekin mAb:ille ei johda merkittäviin kliinisiin seurauksiin, kun taas niiden tuotanto muille voi ilmetä tehon heikkenemisenä tai hoitoon liittyvinä haittatapahtumina.

6.2. Riskin arviointi

Monet tekijät vaikuttavat immuunivasteen muodostumiseen Mab:lle, mikä on otettava huomioon riskinarvioinnissa. MAb:n immuunivasteen esiintymistiheyteen ja vakavuuteen vaikuttavia tekijöitä (riskitekijät lääkkeestä, valmistusprosessista ja sairauden ja (tai) potilaan erityispiirteistä riippuen) voidaan käyttää perustana lähestymistavalle, jonka mukaan nämä riskitekijät on luonnehdittu niiden saatavuuden ja toteutettavuuden näkökulmasta riskinarvioinnin (tai tunnistamisen) minimointi.

Riskien tunnistaminen edellä käsiteltyjen tekijöiden perusteella johtaa arviointiin, joka yhdistää yksittäiset kliiniset riskit ja hyvin suunnitellun immunogeenisyystutkimusohjelman, joka on osa kliinistä kehitystä. Riskien arviointi edellyttää monialaista lähestymistapaa, jossa otetaan huomioon kaikki tunnistetut riskit, jotka johtuvat esimerkiksi tuotteen laadunvalvontastrategiasta, mukaan lukien tuotteen koostumus, hyväksyttävyysrajojen perustelut vastaaville muunnelmille ja niihin liittyville epäpuhtauksille. Se tarkoittaa myös sitä, että jos mAb:ssa tapahtuu muutos tuotekehityksen eri vaiheissa, jokaiselle kehityksen aikana tehdylle vertailukelpoisuustutkimukselle tulisi tehdä yleinen riskinarviointi.

Näin ollen riskinarvioinnin pääpuoli on ei-toivotun immuunivasteen esiintymistiheyden ja kliinisten seurausten analysointi sekä tällaisten seurausten ehkäisyn mahdollisuus, niiden oikea määrittäminen ja (tai) lääketieteellinen korjaus. Riippuen tunnistetuista riskeistä ja käytettävissä olevista toimenpiteistä tällaisten riskien seuraamiseksi ja vähentämiseksi, immunogeenisyystutkimusohjelma voi olla pienempi tai suurempi kuin näiden määräysten luvussa 11 kuvattu. Hakijoiden tulee perustella ja analysoida valitsemansa lähestymistapa. Riippuen monoklonaalisten vasta-aineiden luokasta ja alaluokista (vaikuttavat immunobiologisiin toimintoihin, kuten sitoutumiseen Fc-reseptoreihin) tai vaikutusmekanismista, yksittäisten Mab-valmisteiden ei-toivottuun immuunivasteeseen liittyvät kliiniset seuraukset voivat vaihdella. Esimerkiksi vasta-aineet voivat neutraloida mAb:t, mikä johtaa tehon heikkenemiseen tai aiheuttaa haittatapahtumia, kuten infuusioreaktioita ja/tai immuunikompleksin muodostumista. Nämä infuusioreaktiot voivat olla vakavia, mutta (ei-allergisia yliherkkyysreaktioita) voidaan vähentää asianmukaisilla kliinisillä toimenpiteillä, kuten esilääkitys. Kun teho heikkenee, muiden mAb:iden tai vastaavien terapeuttisten proteiinien läsnäolo vaihtoehtoisena hoitona voi myös olla tärkeä tekijä riskinvähentämisstrategiassa.

Yleisenä periaatteena on, että rekisteröintiä haettaessa on toimitettava riittävät tiedot, jotta voidaan arvioida vakavuus, esiintymistiheys ja tunnistettavissa olevat riskit. Sitten (tarvittaessa) tällaisia ​​riskejä voidaan tutkia perusteellisemmin markkinoille tulon jälkeisten tutkimusten ja seurannan avulla.

Lähtökohtana riskien arvioinnissa ja vähentämisessä seuraavat tekijät voivat olla arvokkaita:

• riskikerrostuminen, joka perustuu edellisessä osiossa kuvattuihin havaitsemisperiaatteisiin yhdistettynä tuotekohtaisiin tekijöihin, kuten sisäisten immunogeenisten sekvenssien tunnistamiseen, fysikaalis-kemialliseen profiiliin, mukaan lukien aggregaatit ja muut liittyvät ja valmistusvaihtoehdot, formulaatiokehityksen yksityiskohdat, esim. liukoisuus fysiologisessa pH:ssa, kohdeantigeenin sijainti jne.;
• tiedot tässä luvussa kuvatun määritysmenetelmän toimivuudesta, erityisesti siitä, missä määrin valitun mAb-määritysformaatin selektiivisyys vähenee lääkkeen jäännöskierron vuoksi;
• kvantitatiivisen määritysmenetelmän väistämättömällä epätäydellisyydellä: toimenpiteiden saatavuus täydentämään vasta-aineiden valvontaa Mab:tä vastaan, esimerkiksi PD- tai PK-parametrien määrittäminen; kvantifiointimenetelmien saatavuus varhaisen immuunivasteen havaitsemiseksi (esimerkiksi sitoutuvan Mab:n varhainen havaitseminen, IgM:n havaitseminen varhaisen immuunivasteen havaitsemiseksi);
• potilaspopulaation herkkyys, terapeuttinen indeksi, autoimmuunitila, immunosuppressanttien samanaikainen käyttö jne.;
• Muihin kliinisiin alueisiin verrattuna onkologian vähentämisvaikutuksia on vaikeampi havaita, koska kasvaimen etenemistä on vaikea korreloida vasta-ainetuotannon kanssa.

Sairauden etenemistä ja siitä johtuvaa hoitovasteen heikkenemistä jonkin ajan kuluttua havaitaan yleensä lähes kaikilla potilailla, mikä voi vaikeuttaa erottamista immunogeenisyyden välittämistä vaikutuksista. Tämän seurauksena kliiniset tutkimukset voivat vaatia intensiivisempää tutkimusta sen määrittämiseksi, mitä on odotettavissa markkinoille tulon jälkeen, erityisesti kun vaihtoehtoisia hoitomuotoja on saatavilla; mAb:n anto kotona ja sairaalassa: mAb:n käyttöönoton edut sairaalassa ovat välitön infuusioreaktioiden ja anafylaksia (jos sellaisia ​​on), mutta mAb:n ihonalainen anto kotona on potilaalle helpompaa.

Siten hakijan on tasapainotettava ei-toivotun immuunivasteen riski ja sen seuraukset ehdotetun kliinisen sovelluksen kanssa. Esimerkiksi mAb:t, joilla on lisääntynyt reaktionopeus ihonalaisen annon jälkeen, ovat vähemmän sopivia kotiannostukseen; vaihtoehtoisten hoitomuotojen tai diagnostisten menetelmien saatavuus tehon heikkenemisen tai infuusioreaktioiden tai anafylaksiatapauksissa.

6.3. Valvonta ja riskien vähentäminen

Tätä riskien tunnistamis- ja arviointitapaa noudattaen hakijoiden tulee suunnitella tämä konsepti huolellisesti varhaisessa tuotekehityksessä, minkä jälkeen, kun uutta tietoa tulee saataville, tarkistettava ja päivitettävä se säännöllisesti kehitysprosessin aikana ja tuotteen koko elinkaaren ajan. Kliinisen kehityksen alussa hakijat voivat, jos muut tekijät niin vaativat, esimerkiksi määrittää lisääntyneen riskin mAb:lle, vaikka vaikutusmekanismi sinänsä ei välttämättä tarkoita lisääntynyttä riskiä. Laajojen kliinisten tutkimusten tulosten perusteella saattaa olla tarpeen harkita uudelleen riskin suuruutta. Rekisteröinnin aikana hakijoiden tulee perustella ja arvioida huolellisesti kehitysohjelman aikana tehtyjen immunogeenisuustutkimusten suunnittelun ja laajuuden kokonaiskonsepti. Jos lääkkeillä osoitetaan olevan suotuisa immunogeeninen potentiaali (esimerkiksi käyttöaihe lääkkeen yleisissä ominaisuuksissa), on annettava lisätietoa tällaisen käyttöaiheen perustelemiseksi.

Riskinarvioinnin tuloksista riippuen kliinisen kehityksen aikana voidaan joissakin tapauksissa vaatia perusteellisempia ja syvällisempiä tutkimuksia. Esimerkiksi jos mAb sisältää ei-ihmishiilihydraattirakenteita, kuten galaktoosi-a-1,3-galaktoosia, vaikean anafylaksia estämiseksi, potilaiden IgE on joissakin tapauksissa testattava ennen lääkkeen antamista. Toinen esimerkki IgE-testauksen tarpeesta on allergisten reaktioiden suuri esiintyvyys ensimmäisestä lääkeinjektiosta varhaisen kliinisen lääkekehityksen aikana. Vaikka IgG-alaluokkien tai muiden Ig-luokkien, kuten IgA:n, määrittäminen ei yleensä ole standardivaatimus mAb-immunogeenisuustutkimuksissa, tällaisia ​​tutkimuksia voidaan tarvita, jos havaitaan tiettyjä riskejä (esim. anto nenän kautta). Samanaikaisesti monoklonaalisten vasta-aineiden neutralointikyvyn ja ohimenevän (pysyvän) luonteen toteamiseksi tarvitaan yleensä useita näytteitä.

Näytteenoton ja analyysin tiheys ja ajoitus voivat vaihdella tunnistetun suhteellisen riskin asteesta riippuen. Kehityksen myöhemmissä vaiheissa on hyväksyttävää vähentää mAb-näytteenottotiheyttä pienemmällä riskillä edellyttäen, että haittatapahtumia tai tehon heikkenemistä ei ole havaittu. Koko kehitysohjelman ajan on kuitenkin tarpeen huolehtia mallipankin ylläpidosta vakioperiaatteella.

Niistä mAb-valmisteista, joiden käyttöriski on suurempi, näytteenotto voi olla useampaa koko kliinisten tutkimusten ajan. Tässä tapauksessa on suositeltavaa analysoida näytteet reaaliajassa. Kliinisen kehityksen aikana voi olla tarpeen määrittää samanaikaisesti sekä säännöllisen annon aikana vasta-ainepitoisuus, FC-, PD-markkerit, teho, turvallisuus. Näin voidaan arvioida vasta-ainetuotannon kliinistä merkitystä sekä niiden vaikutuksen muutosta ajan myötä, mikä voi johtua niiden tiitterin noususta ja (tai) muutoksesta vasta-aineiden affiniteetin isotyypissä/kypsymisessä. . Anti-monoklonaaliset vasta-aineet, joilla ei ole neutraloivaa kykyä, voivat epäsuorasti vaikuttaa tehokkuuteen sitoutumalla mAb-valmisteeseen tai muuttamalla sen farmakokineettisiä ominaisuuksia. Siksi PK-parametrien määritys voi myötävaikuttaa antimonoklonaalisten vasta-aineiden määritysmenetelmien suunnitteluun.

Kvantifioinnin tuloksia voidaan käyttää riskienhallintatarkoituksiin. Jos esimerkiksi tunnistamisessa ja riskinarvioinnissa päätellään, että immuunivasteen varhainen havaitseminen on tarpeen ja mahdollisuus mAb-hoidon keskeyttämiseen sallitaan, alhaisen affiniteetin IgM:n tuotanto voi toimia varhaisen immuunivasteen indikaattorina, ja IgM:n määrittäminen voi myötävaikuttaa sellaisten potilaiden varhaiseen tunnistamiseen, joille kehittyy immuunivaste. Samoin sellaisten sitoutuvien vasta-aineiden havaitseminen, joilla ei ole neutraloivaa kykyä, voi toimia varhaisena ennustajana neutraloivien vasta-aineiden myöhemmälle muodostumiselle.

Riskinhallintastrategioihin voi kuulua esimerkiksi sellaisten potilaiden hoidon tutkiminen, joilla on immuunivaste, kuten mahdollisuus lisätä lääkkeiden antotiheyttä vaarantamatta sen turvallisuutta jne. Tällaisten toimien toteutettavuus on kuitenkin harkittava. Rekisteröintiaineistoa toimitettaessa hakijoita rohkaistaan ​​toimittamaan yhdistetty, yleinen strategia riskien tunnistamiseksi, kuvaamiseksi, seuraamiseksi, minimoimiseksi ja vähentämiseksi. Tällaisessa riskiperusteisessa lähestymistavassa tulee ottaa huomioon myös riskienhallintasuunnitelma, jossa analysoidaan, miten riskit tunnistetaan kehitysohjelman tiedoista, ja mahdolliset riskit sekä puuttuvat tiedot, jotka on hankittava markkinoille saattamisen jälkeisessä vaiheessa.

Patogeneesi.

a. Immuunikompleksien muodostuminen.Lääkkeestä ja vasta-aineesta koostuvat immuunikompleksit sitoutuvat epäspesifisesti erytrosyyttikalvoihin, minkä jälkeen tapahtuu komplementin aktivaatio. Suora Coombs-testi komplementtivasta-aineilla on yleensä positiivinen, mutta anti-IgG-vasta-aineilla se on negatiivinen. Lääkkeen vasta-aineet voidaan havaita inkuboimalla potilaan seerumia normaaleiden punasolujen kanssa komplementin ja lääkkeen läsnä ollessa. Useimmat lääkkeiden aiheuttamat immuunihemolyyttiset anemiatapaukset johtuvat tästä mekanismista. Lääkkeen toistuva anto, jopa pieninä annoksina, aiheuttaa akuutin intravaskulaarisen hemolyysin, joka ilmenee hemoglobinemiana, hemoglobinuriana ja akuuttina munuaisten vajaatoimintana.

b. Sytotoksisten vasta-aineiden muodostuminen.Punasoluihin sitoutuessaan lääke muuttuu immunogeeniseksi ja stimuloi vasta-aineiden, yleensä IgG:n, tuotantoa. Vain suora Coombsin testi immunoglobuliinivasta-aineilla on positiivinen. Lääkkeen vasta-aineet määritetään seuraavasti. Kun normaaleja punasoluja on inkuboitu tällä lääkkeellä, ne sekoitetaan potilaan seerumiin. Lääkkeen vasta-aineiden läsnä ollessa kehittyy hemolyysi. Klassinen esimerkki sytotoksisten vasta-aineiden aiheuttamasta immuunihemolyyttisestä anemiasta on bentsyylipenisilliinin aiheuttama anemia. Sitä esiintyy harvoin ja vain määrättäessä lääkettä suurina annoksina (yli 10 miljoonaa yksikköä / päivä / päivä): suora Coombs-testi immunoglobuliinien vasta-aineilla on positiivinen noin 3%:lla potilaista, hemolyysi kehittyy vielä harvemmin. Bentsyylipenisilliini aiheuttaa ekstravaskulaarista hemolyysiä. IgG:n esiintyminen bentsyylipenisilliinille ei liity IgE:n aiheuttamaan penisilliiniallergiaan.

sisään. Jotkut lääkkeet, kuten kefalosporiinit, aiheuttavat epäspesifistä IgG- ja komplementtiaggregaatiota, vaikka tähän liittyy harvoin hemolyyttinen anemia. Suora Coombs-testi voi olla positiivinen, epäsuora Coombs-testi on aina negatiivinen.

G. Autovasta-aineiden muodostuminen.Lääkkeet voivat stimuloida autovasta-aineiden muodostumista Rh-järjestelmän antigeeneille. Tämä johtuu luultavasti T-suppressorien toiminnan estymisestä ja vastaavia vasta-aineita tuottavien B-lymfosyyttien kloonien lisääntymisestä. Suora Coombs-testi immunoglobuliinivasta-aineilla on positiivinen. Potilaan seerumin inkubointi normaaleiden punasolujen kanssa ilman lääkettä johtaa IgG:n imeytymiseen erytrosyyteissä. Punasolujen autovasta-aineiden synteesiä aiheuttavat metyylidopa, levodopa ja mefenaamihappo. Suora Coombsin testi on positiivinen noin 15 %:lla metyylidopaa käyttävistä potilaista, mutta alle 1 %:lle potilaista kehittyy hemolyyttinen anemia. Metyylidopan vaikutus erytrosyyttien autovasta-aineiden muodostumiseen näyttää olevan annosriippuvainen. Anemia kehittyy vähitellen useiden kuukausien aikana huumeiden käytön aikana ja johtuu ekstravaskulaarisesta hemolyysistä.

2. Hoito.Ensimmäinen ja tärkein vaihe lääkkeiden aiheuttaman immuunihemolyyttisen anemian hoidossa on sen aiheuttaneen lääkkeen poistaminen. Immuunikompleksien aiheuttaman hemolyysin yhteydessä toipuminen tapahtuu nopeasti. Vaikeissa tapauksissa havaitaan akuuttia munuaisten vajaatoimintaa. Autovasta-aineiden aiheuttamassa hemolyysissä toipuminen on hitaampaa (yleensä useita viikkoja). Coombsin testi voi pysyä positiivisena 1-2 vuotta.

Immunobiologiset valmisteet

diagnosointiin, ennaltaehkäisyyn ja

tartuntatautien hoitoon

Yurova V.A., Butakova L.Yu., Kraft L.A., Kuklina N.V., Sazanskaya A.A., Karabasova E.B., Vinnikova Yu.V., Ilinskaya B.V., Prokopiev V.AT.

Signeerattu offset-paperin painamista varten. Levikki: 500 kpl.

Painettu kirjapainossa::;

GOU VPO:n liittovaltion terveys- ja sosiaalisen kehityksen viraston Altain osavaltion lääketieteellinen yliopisto.

Immunobiologiset valmisteet

diagnosointiin, ennaltaehkäisyyn ja

tartuntatautien hoitoon

Oppikirja opiskelijoiden itsevalmistukseen mikrobiologian käytännön tunneille

Barnaul, 2011

Arvostelijat:

Oppikirjassa hahmotellaan teoreettisia kysymyksiä, jotka liittyvät immunobiologisten valmisteiden luonteeseen ja käyttöön - diagnostiset ja hoito-ja profylaktiset: rokotteet, seerumit, bakteriofagit jne.

Lääketieteellisten tiedekuntien (lääketieteellinen, lastenlääketieteen, hammaslääketieteen) opiskelijat tarvitsevat syvempää tutkimusta bakteriologisten valmisteiden vaikutusmekanismeista, elimistön vasteesta rokote- ja seerumivalmisteiden antamiseen sekä tiettyjen lääkkeiden käytöstä aiheutuviin komplikaatioihin.

Immunobiologiset valmisteet tartuntatautien diagnosointiin, ehkäisyyn ja hoitoon: Yurova V.A., Butakova L.Yu., Kraft L. .MUTTA., Kuklina N.V., Sazanskaya A.A., Karabasova E.B., Vinnikova Yu.V., Ilinskaya B.V. - Barnaul, 2002. - 46 s.

c) Altain osavaltion lääketieteellinen yliopisto, 2002

© Yurova V.A., Butakova L.Yu., KraftL.A., Kuklina N.V., Sazanskaya

A.A., Karabasova E.B., Vinnikova Yu.V., Ilinskaya B.V., 2002

Tartuntatautien ehkäisyssä, diagnosoinnissa ja hoidossa käytetään laajalti immunobiologisia valmisteita, jotka on valmistettu elävistä ja tapetuista mikro-organismeista (bakteerit, riketsiat, virukset), niiden aineenvaihduntatuotteista (toksiinit) sekä eri menetelmillä uutetuista yksittäisistä mikrobisoluantigeeneistä. . Seerumia ja spesifisiä gammaglobuliineja ja immunoglobuliineja käytetään myös terapeuttisiin ja diagnostisiin tarkoituksiin. Lisäksi bakteriofagivalmisteita käytetään laajalti diagnostisiin ja terapeuttisiin tarkoituksiin.

Tiedot immunobiologisten valmisteiden koostumuksesta, valmistuksesta ja vaikutusmekanismista ovat tarpeen lääkärille hänen käytännössä. Samaan aikaan lääkäreillä ei aina ole mahdollisuutta tutustua uusiin rokote- ja seerumivalmisteisiin, niiden käytön erityispiirteisiin. Lisäksi nykyaikaiset oppikirjat eivät täysin heijasta immunobiologisten valmisteiden valmistukseen, vaikutusmekanismiin ja käyttöön liittyviä kysymyksiä.

Kaikki edellä mainittu johti tarpeeseen luoda oppikirja, joka sisältää tietoa immunobiologisista valmisteista. Tämä käsikirja sisältää tietoa immunobiologisten valmisteiden valmistuksesta, vaikuttavasta aineesta, käytöstä ja joidenkin niistä aiheutuvista komplikaatioista. Käsikirja on tarkoitettu valmistelemaan lääketieteen, lastenlääketieteen, hammaslääketieteen ja lääketieteellisten profylaktisten tiedekuntien kolmannen vuoden opiskelijoita yksityisen mikrobiologian käytännön tunneille.

Immunobiologisten valmisteiden luokitus

I. Diagnostiset valmisteet.

Antigeenejä sisältävät valmisteet - diagnostiset aineet, allergeenit, toksiinit.

Vasta-aineita sisältävät valmisteet - diagnostiset seerumit.

Diagnostiset bakteriofagit.

• II Terapeuttiset ja profylaktiset lääkkeet.

Antigeenejä sisältävät valmisteet - rokotteet.

Vasta-aineita sisältävät valmisteet - terapeuttiset seerumit ja gammaglobuliinit ja immunoglobuliinit.

Bakteriofagit.

mikrobiantagonistit.

Interferonit ja muut sytokiinit.

Osa I

Diagnostiset lääkkeet

Diagnostisia lääkkeitä käytetään useiden sairauksien laboratoriodiagnoosissa, joiden tarkka diagnoosi voidaan tehdä vain bakteriologisten ja virologisten tutkimusten avulla. Lisäksi diagnostiset valmisteet ovat välttämättömiä, kun laboratoriomenetelmin vahvistetaan taudin diagnoosi, jolla on epätyypillinen kulku tai sairaus, jolle on ominaista oireiden monimuotoisuus. Lisäksi sellaisten sairauksien diagnoosi, joita ei löydy tietyltä alueelta ja tiettynä aikana, on vahvistettava laboratoriomenetelmin.

Tartuntatautien diagnosoinnissa käytetään laajalti mikrobiologisia diagnostisia menetelmiä. Tässä tapauksessa käytetään bakteriologisia, virologisia, serologisia, allergisia, immunologisia diagnostisia menetelmiä sekä molekyylihybridisaatio- ja PCR-menetelmiä. Jokainen näistä menetelmistä vaatii tiettyjä diagnostisia immunobiologisia valmisteita: diagnostiset seerumit, diagnostiset seerumit (lajit, tyypilliset, kompleksiset, adsorboidut jne.), komplementit, allergeenit, bakteriofagit, RIF- ja ELISA-järjestelmät, nukleiinihappokoettimet.

Diagnostisten valmisteiden luokittelu

1. Vasta-aineita sisältävät valmisteet - diagnostiset seerumit:

agglutinoiva;

saostus;

antitoksinen;

hemolyyttinen;

antiviraalinen;

luminesoiva;

antiglobuliini.

2. Antigeenejä sisältävät valmisteet:

2.1) diagnostiikka:

2.1.1 bakteeri;

2.1.2 punasolut;

2.1.3 virus;

2.2.) toksiinit;

2.3.) allergeenit.

3. Diagnostiset bakteriofagit.

1. Diagnostiset seerumit

Tartuntatautien diagnosoinnissa immuunireaktioita käytetään laajalti mikro-organismien (bakteerit ja virukset) tai toksiinien tunnistamiseen. Tällaisten reaktioiden formulointiin tarvitaan erityisiä diagnostisia seerumeita.

1.1. Agglutinoituvat seerumit.

Agglutinoituvia seerumeita saadaan immunisoimalla kaneja tapettujen mikro-organismien tai niiden antigeenien suspensiolla, minkä jälkeen otetaan verinäyte ja valmistetaan seerumi. Agglutinoituvia seerumeita käytetään mikro-organismien tunnistamiseen agglutinaatioreaktiossa. Tällaisten seerumien haittana on, että ne pystyvät tuottamaan ryhmäagglutinaatioreaktioita, tk. ne sisältävät vasta-aineita bakteereille, joilla on yhteisiä antigeenejä. Siksi suurin osa seerumeista on tällä hetkellä käytössä adsorboitunut Adsorboidut seerumit sisältävät vain tyypin tai lajin vasta-aineita, jotka vastaavat tiettyä antigeenityyppiä tai -tyyppiä. Tällaisten seerumien saamiseksi käytetään Castellani-menetelmää - adsorptiomenetelmää. Tämä menetelmä koostuu seerumin tyhjentämisestä ryhmän agglutiniinien suhteen kyllästämällä se sukulaisilla heterogeenisillä bakteereilla. Tässä tapauksessa ryhmävasta-aineiden adsorptio tapahtuu ja spesifiset vasta-aineet jäävät seerumiin. Tällä tavalla voidaan saada monoreseptoriseerumeja - seerumeita, jotka sisältävät vasta-aineita vain yhdelle antigeenille, ja moniarvoisia seerumeita, jotka saavat aikaan agglutinaatioreaktioita kahden tai kolmen sukulaisen bakteerin kanssa, joilla on yhteinen antigeeni. Agglutinoivan seerumin tiitteri on suurin laimennus, jolla agglutinaatioreaktio tapahtuu.

Agglutinoituvia seerumeita käytetään laajalti esimerkiksi Escherichian, Salmonellan ja muiden Enterobacteriaceae-heimon jäsenten aiheuttamien sairauksien diagnosoinnissa.

1.2. saostavat seerumit.

Saostuvat seerumit saadaan immunisoimalla kaneja bakteeriantigeeneillä, niiden uutteilla ja toksiineilla. Saostuvan seerumin tiitteri on antigeenin maksimilaimennus, jolla saostumisreaktio tapahtuu. Saostuvat seerumit tuotetaan korkealla tiitterillä - vähintään 1:100 000. Tämä johtuu siitä, että saostusreaktiossa määritetyllä antigeenillä on hienojakoinen rakenne ja se voi sisältää enemmän vasta-aineita tilavuusyksikköä kohti kuin samassa seerumitilavuudessa - vasta-aineita.

Spesifisiä saostuvia seerumeita käytetään tartuntatautien diagnosoinnissa (pernarutto, rutto, tularemia, kurkkumätä jne.), oikeuslääketieteellisessä tutkimuksessa proteiinityypin määrittämiseksi, hygieniakäytännössä tuotteissa olevien proteiiniaineiden vaatimustenmukaisuuden havaitsemiseksi (jos väärennös). epäillään).

Saostusreaktio voidaan toimittaa rengassaostus- tai geelisaostusreaktiona.

1.3 Hemolyyttiset seerumit.

Hemolyyttiset seerumit saadaan immunisoimalla kaneja pässin erytrosyyttien suspensiolla. Seerumin tiitteri on sen maksimilaimennus, joka komplementin läsnä ollessa aiheuttaa 3 %:n erytrosyyttisuspension hemolyysin. Hemolyyttisiä seerumeita käytetään komplementtititraukseen ja komplementin kiinnitysreaktion asettamiseksi indikaattorijärjestelmään.

1.4 Antiviraaliset seerumit.

Immuuniviruksenvastaiset seerumit saadaan immunisoimalla erilaisia ​​eläimiä viruksen tyypistä riippuen. Esimerkiksi seerumia adenoviruksia vastaan ​​saadaan immunisoimalla kaneja, seerumia influenssavirusta vastaan ​​immunisoimalla valkoisia frettejä jne.

Diagnostisia antiviraalisia seerumeita käytetään viruksen tyypin tai tyypin määrittämiseen RTGA:ssa, RSK:ssa, RN:ssä.

1.5 Luminesoivat seerumit. Luminesoivat seerumit ovat immuuniseerumit, jotka sisältävät spesifisiä vasta-aineita, jotka on leimattu fluoresoivilla väriaineilla. Luminesoivien seerumien valmistuksessa immuuniseerumin globuliinifraktioon kiinnittyy erilaisia ​​fluorokromeja vahvalla kemiallisella sidoksella. Luminesoivia seerumeja käytetään RIF:n valmistuksessa.

1.6. Antiglobuliiniseerumit.

Antiglobuliiniseerumit (AGS) sisältävät vasta-aineita ihmisen tai kanin seerumin immunoglobuliineille riippuen siitä, mitä immuuniseerumia reaktiossa käytetään. AGS saadaan immunisoimalla eläimiä ihmisen tai kanin immunoglobuliineilla. Tällaisia ​​seerumeita käytetään epäsuoran RIF:n, ELISA-reaktion ja Coombsin reaktion asettamiseen.

Lääkkeiden aiheuttama immuunihemolyyttinen anemia muodostaa noin 20 % kaikista hankituista immuunihemolyyttisistä anemioista.Useimmissa muissa lääkeaine-indusoiduissa immuunihemolyyttisissa anemioissa vasta-aineet kohdistuvat lääke-kalvon glykoproteiinikompleksia vastaan. Hemolyysi havaitaan vain lääkkeen annon aikana ja yleensä pysähtyy nopeasti sen poistamisen jälkeen.

Immuunikompleksien muodostuminen. Lääkkeestä ja vasta-aineesta koostuvat immuunikompleksit sitoutuvat epäspesifisesti erytrosyyttikalvoihin, minkä jälkeen tapahtuu komplementin aktivaatio. Suora Coombs-testi komplementtivasta-aineilla on yleensä positiivinen ja IgG-vasta-aineilla negatiivinen. Lääkkeen vasta-aineet voidaan havaita inkuboimalla potilaan seerumia normaaleiden punasolujen kanssa komplementin ja lääkkeen läsnä ollessa. Suurin osa lääkkeiden aiheuttamasta immuunihemolyyttisesta anemiasta johtuu tästä mekanismista (taulukko 16.3). Lääkkeen toistuva antaminen, jopa pieninä annoksina, aiheuttaa akuutin intravaskulaarisen hemolyysin, joka ilmenee hemoglobinemiana, hemoglobinuriana ja akuuttina munuaisten vajaatoimintana.

Autovasta-aineiden aiheuttamassa hemolyysissä toipuminen on hitaampaa (yleensä useita viikkoja). Coombsin testi voi pysyä positiivisena 1-2 vuotta.

Immuuni hemolyyttistä anemiaa aiheuttavat lääkkeet jaetaan vaikutusmekanismista riippuen kahteen ryhmään.

Ensimmäinen sisältää