Positiivinen suora Coombsin reaktio. Coombsin testi: kliiniset ja laboratorionäkökohdat

Coombsin reaktio on tehokas menetelmä erytrosyyttiantigeenien ja punasolujen vastaisten vasta-aineiden havaitsemiseksi ihmisen verestä epäsuorassa agglutinaatiotestissä. Testin perustana on G-luokan immunoglobuliineihin (IgG) perustuvien spesifisten monoklonaalisten reagenssien käyttö erytrosyyttiantigeenien tyypitykseen, jota seuraa antiglobuliini Coombsin seerumin (AGS) käyttö toisessa vaiheessa.

AGS valmistetaan sekoittamalla seerumia ihmisen G-luokan immunoglobuliineilla immunisoitujen laboratorioeläinten verestä ja monoklonaalisia vasta-aineita jollekin komponentille - ihmisen seerumin C3D-komplementille. AGS aiheuttaa spesifisten vasta-aineiden herkittämien punasolujen agglutinaation. Jos punasoluissa ei ole vasta-aineita AGS:n vaikutuksen alaisena, positiivista reaktiota ei tapahdu.

Epäsuoran Coombsin reaktion avulla voit määrittää:

• IgG-reagenssien havaitsemat punasoluantigeenit ("epätäydelliset" vasta-aineet, esimerkiksi monoklonaaliset reagenssit anti-D, anti-FYa, anti-FYb);
• IgG-luokan punasolujen vastaiset vasta-aineet.

Epäsuora antiglobuliinitesti: erytrosyyttiantigeenien havaitseminen

Esittelemme epäsuoran Coombsin reaktion menetelmän käyttämällä esimerkkinä anti-D IgG -kolikonia.

1. Merkitse puhdas putki: ilmoita testattavan henkilön nimi.
2. Annostele putkeen 2 tippaa (noin 0,1 ml) anti-D IgG tsoliklonia.
3. Lisää 2 tippaa 5 % suspensiota analysoituista punasoluista, jotka on pesty aiemmin suolaliuoksella. Sekoita testinäytteet Zoliclonen kanssa.
4. Inkuboi seosta vesihauteessa tai inkubaattorissa 37°C:ssa 30 minuuttia.
5. Lisää 5-10 ml suolaliuosta koeputkeen Pasteur-pipetillä.
6. Sentrifugoi putkea 1200 g:n keskipakokiihtyvyydellä 18–25 °C:ssa minuutin ajan.
7. Poista suolaliuos.
8. Toista punasolujen pesu sentrifugoimalla vielä 2-3 kertaa.
9. Lisää 2 tippaa antiglobuliiniseerumia verisolupellettiin ja sekoita.
10. Sentrifugoi putkea 1200 g:n keskipakokiihtyvyydellä minuutin ajan 18–25 °C:n lämpötilassa.
11. Lisää 3-5 tippaa suolaliuosta annostelijalla tai Pasteur-pipetillä.
12. Suspendoi pelletti uudelleen ja arvioi agglutinaatio silmämääräisesti. Selkeät agglutinaatit putken pohjassa kirkkaan liuoksen taustalla osoittavat erytrosyyttiantigeenin havaitsemisen. Läpinäkymätön verisolususpensio osoittaa antigeenin puuttumisen.

Coombsin reaktio: seulonta isoimmuuni-erytrosyyttivasta-aineiden varalta

Yhteensopivuuden arviointi AB0-järjestelmän mukaan, "kylmien" vasta-aineiden havaitseminen

1. Valmistele luovuttajan verinäyte:
   • laita 0,2 ml verta koeputkeen automaattisella annostelijalla;
   • pese punasolut 3 kertaa 5,0 ml:ssa suolaliuosta;
   • suspensoi pelletti uudelleen 3-4 ml:aan matalan ionivahvuuden omaavaa LISS-liuosta.
2. Merkitse toinen puhdas putki: merkitse vastaanottajan nimi ja luovuttajan nimi.
3. Annostele 0,1 ml saajan seerumia merkittyyn putkeen automaattisen annostelijan avulla.
4. Lisää 2 tippaa 5 % erytrosyyttisuspensiota LISS-liuoksessa.
5. Sentrifugoi seos välittömästi 1200 g:llä 18-25°C:ssa 15-20 sekunnin ajan.
6. Ravista putkea kevyesti, jotta sedimentti erottuu pohjasta. Arvioi agglutinaattien esiintyminen. Hemolyysin ja/tai agglutinaattien esiintyminen tarkoittaa:
   • yhteensopimattomuus AB0-järjestelmän mukaan;
   • "kylmien" IgM- tai IgA-luokan vasta-aineiden läsnäolo potilaan seerumissa, jotka eivät ole spesifisiä AB0-antigeeneille.

"Lämpöisten" vasta-aineiden havaitseminen

1. Jos hemolyysiä ja/tai agglutinaatteja ei tapahdu, inkuboi putkea 10-15 minuuttia 37 °C:ssa.
2. Sentrifugoi putkea 1200 g:llä 15-20 sekuntia huoneenlämpötilassa.
3. Ravista putkea ja tarkista hemolyysi ja/tai agglutinaatiot supernatantista. Positiivinen tulos osoittaa, että potilaan seerumista on havaittu "termisiä" IgM-vasta-aineita luovuttajan erytrosyyttiantigeenejä vastaan.

IgG-vasta-aineiden havaitseminen Coombs-testissä

1. Jos tulos on negatiivinen tutkimuksen viimeisessä vaiheessa, lisää 5 ml 0,9 % NaCl-liuosta koeputkeen Pasteur-pipetillä.
2. Sentrifugoi putkea 1200 g:llä 15 - 20 sekuntia ilman lämpötilassa 18 - 25 °C. Hävitä supernatantti varovasti Pasteur-pipetillä.
3. Toista punasolujen pesu vielä 2–3 kertaa.
4. Lisää 1-2 tippaa antiglobuliiniseerumia koeputkeen. Suorita perusteellinen sekoitus.
5. Sentrifugoi putkea 1200 g:ssä 15-20 sekuntia.
6. Hajota erytrosyyttisedimentti varovasti ja arvioi reaktion tulos visuaalisesti. Agglutinaation havaitseminen tarkoittaa IgG-vasta-aineiden läsnäoloa luovuttajan erytrosyyttiantigeenejä vastaan ​​potilaan seerumissa.

Vasta-aineet sijaitsee punasolujen pinnalla, voi olla sekä staattisessa että vapaassa tilassa veriplasmaa. Vasta-aineiden tilasta riippuen suoritetaan suora tai epäsuora Coombs-reaktio. Jos on syytä uskoa, että vasta-aineet ovat kiinnittyneet punasolujen pinnalle, suoritetaan suora Coombs-testi. Tässä tapauksessa testi läpäisee yhdessä vaiheessa - lisätään antiglobuliiniseerumi. Jos punasolujen pinnalla on epätäydellisiä vasta-aineita, agglutinaatio punasolut.

Epäsuora reaktio

Epäsuora Coombsin reaktio etenee kahdessa vaiheessa. Ensinnäkin se on toteutettava keinotekoisesti herkistyminen punasolut. Tätä varten erytrosyyttejä ja tutkittavaa veriseerumia inkuboidaan, mikä saa aikaan vasta-aineiden kiinnittymisen punasolujen pinnalle. Sen jälkeen suoritetaan Coombs-testin toinen vaihe - antiglobuliiniseerumin lisääminen.

saostumisreaktio - RP (Lat praecipilosta saostumaan) on liukoisen molekyyliantigeenin kompleksin muodostumista ja saostumista vasta-aineiden kanssa sameuden muodossa, ns. saostua. Se muodostuu sekoittamalla antigeenejä ja vasta-aineita vastaavina määrinä, yhden niistä ylimäärä alentaa immuunikompleksin muodostumistasoa. Saostusreaktio laitetaan koeputkiin (rengassaostusreaktio), geeleihin, ravintoalustaan ​​jne. Saostusreaktioita puolinestemäisessä agar- tai agaroosigeelissä käytetään laajalti, kaksois-immunodiffuusio Ouchterlony, radium-immunodiffuusio, immunoelektroforeesi jne.

HLA-kirjoitus- ihmisen tärkeimmän - HLA-kompleksin tutkimus. Tämä muodostuminen sisältää geenialueen kromosomissa 6, jotka koodaavat HLA-antigeenejä, jotka osallistuvat erilaisiin immuunivasteisiin.

Tehtävät klo HLA-kirjoitus voivat olla hyvin erilaisia ​​- biologinen tunnistaminen (HLA-tyyppi periytyy vanhempien geenien mukana), eri sairauksien alttiuden määrittäminen, luovuttajien valinta elinsiirtoa varten - tässä tapauksessa vertaillaan luovuttajan ja vastaanottajan kudosten HLA-tyypityksen tuloksia. HLA-tyypityksen avulla selvitetään, kuinka samanlaisia ​​tai erilaisia ​​puolisot ovat kudosten yhteensopivuusantigeenien suhteen, jotta lapsettomuustapaukset voidaan diagnosoida.

HLA-kirjoitus ehdottaa HLA-polymorfismianalyysi ja se suoritetaan kahdella menetelmällä - serologisella ja molekyyligeneettisellä. Klassinen serologinen HLA-tyypitysmenetelmä perustuu mikrolymfosytotoksiseen testiin, kun taas molekyylimenetelmä käyttää PCR:ää (polymeraasiketjureaktio).

Serologinen HLA-kirjoitus suoritettiin eristetyillä solupopulaatioilla. Tärkeimmät histokompkulkeutuvat pääasiassa lymfosyytit. Siksi T-lymfosyyttien suspensiota käytetään pääasiallisina luokan I antigeenien kantajina ja B-lymfosyyttien suspensiota HLA-luokan II antigeenien määrittämiseen. Haluttujen solupopulaatioiden eristämiseen kokoverestä käytetään joko sentrifugointia tai immunomagneettista erotusta. Uskotaan, että ensimmäinen menetelmä voi johtaa vääriin positiivisiin tietoihin, koska osa soluista kuolee tässä tapauksessa. Toinen menetelmä tunnustetaan spesifisemmäksi - kun taas yli 95 % soluista pysyy elävinä.

Mutta perusta lymfosytotoksisen testin järjestämiselle HLA-kirjoitus on spesifinen seerumi, joka sisältää vasta-aineita HLA-antigeenien I ja II luokkien eri alleelisille varianteille. Serologisella testillä voit määrittää HLA-tyypin tutkimalla, mitkä seerumeista reagoivat lymfosyyttien kanssa ja mitkä eivät.

Jos solujen ja seerumin välillä tapahtuu reaktio, solun pinnalle muodostuu antigeeni-vasta-ainekompleksi. Komplementtia sisältävän liuoksen lisäämisen jälkeen tapahtuu lyysi ja solukuolema. HLA-tyypityksen serologinen testi arvioidaan käyttämällä fluoresenssimikroskopiaa positiivisten (punainen fluoresenssi) ja negatiivisten (vihreä fluoresenssi) reaktioiden arvioimiseksi tai faasikontrastimikroskopiaa kuolleiden solujen ytimien värjäämiseksi. HLA-tyypityksen tulos johdetaan ottaen huomioon reagoineiden seerumien ja ristiin reagoivien antigeeniryhmien spesifisyys, sytotoksisuusreaktion intensiteetti.

Serologisen haitat HLA-kirjoitus ovat ristireaktiot, heikko vasta-aineaffiniteetti tai HLA-antigeenien alhainen ilmentyminen, proteiinituotteiden puuttuminen useista HLA-geeneistä.

Nykyaikaisempia molekyylimenetelmiä HLA-kirjoitus käytetään jo standardoituja synteettisiä näytteitä, jotka eivät reagoi leukosyyttien pinnalla olevien antigeenien, vaan DNA:n kanssa ja osoittavat suoraan, mitä antigeenejä näytteessä on. Molekyylimenetelmät eivät vaadi eläviä valkosoluja, mitä tahansa ihmissolua voidaan tutkia, ja muutama mikrolitra verta riittää toimimaan tai voit rajoittua suun limakalvon kaapimiseen.

Molekyyligeneettinen HLA-kirjoitus käyttää PCR-menetelmää, jonka ensimmäinen vaihe on saada puhdas genominen DNA (kokoverestä, leukosyyttisuspensiosta, kudoksista).

Sitten DNA-näyte kopioidaan - monistetaan koeputkessa käyttämällä alukkeita (lyhyt yksijuosteinen DNA), jotka ovat spesifisiä tietylle HLA-lokukselle. Kunkin alukeparin päiden tulee olla tiukasti komplementaarisia tiettyä alleelia vastaavan ainutlaatuisen sekvenssin kanssa, muuten monistumista ei tapahdu.

PCR:n jälkeen toistuvan kopioinnin aikana saadaan suuri määrä DNA-fragmentteja, jotka voidaan arvioida visuaalisesti. Tätä varten reaktioseoksille suoritetaan elektrolyysi tai hybridisaatio, ja ohjelman tai taulukon avulla määritetään, onko tiettyä vahvistumista tapahtunut. HLA-tyypityksen tulos esitetään kattavan raportin muodossa geeni- ja alleelitasoilla. Käytettyjen näytteiden standardoinnin vuoksi molekyyli HLA-kirjoitus tarkemmin sanottuna serologinen. Lisäksi se tarjoaa enemmän tietoa (enemmän uusia DNA-alleeleja) ja korkeamman yksityiskohtaisuuden, koska sen avulla voit tunnistaa antigeenien lisäksi myös itse alleelit, jotka määrittävät, mikä antigeeni solussa on.

immuuni hajoamisreaktio. Reaktio perustuu spesifisten vasta-aineiden kykyyn muodostaa immuunikomplekseja solujen, mukaan lukien erytrosyyttien, bakteerien, kanssa, mikä johtaa komplementtijärjestelmän aktivaatioon klassista reittiä ja solujen hajoamiseen. Immuunihajotusreaktioista useimmiten käytetään hemolyysireaktiota ja harvemmin bakteriolyysireaktiota (pääasiassa koleran ja koleran kaltaisten vibrioiden erottamisessa).

hemolyysireaktio. Vasta-aineiden kanssa komplementin läsnä ollessa tapahtuvan reaktion vaikutuksesta erytrosyyttien samea suspensio muuttuu kirkkaan punaiseksi läpinäkyväksi nesteeksi - "lakkavereksi" hemoglobiinin vapautumisen vuoksi. Kun määritetään komplementin kiinnittymisen diagnostista reaktiota (RCC), hemolyysireaktiota käytetään indikaattorina: vapaan komplementin läsnäolon tai puuttumisen (sitoutumisen) testaamiseen.

Paikallinen hemolyysireaktio geelissä(Jernen reaktio) on yksi hemolyysireaktion muunnelmista. Sen avulla voit määrittää vasta-aineita muodostavien solujen lukumäärän. Vasta-aineita - hemolysiinejä - erittävien solujen lukumäärä määräytyy hemolyysiplakkien lukumäärän perusteella, joka esiintyy erytrosyyttejä, tutkitun imukudoksen solususpensiossa ja komplementissa sisältävässä agargeelissä.

Immunofluoresenssimenetelmä

(RIF, immunofluoresenssireaktio) - menetelmä spesifisen Ag:n (Ab) havaitsemiseksi käyttämällä fluorokromiin konjugoitua Ab:ta (Ag). Sillä on korkea herkkyys ja spesifisyys. Sitä käytetään express d-ki -infektioihin. sairaudet (sairauden aiheuttajan tunnistaminen tutkimusaineistossa) sekä leukosyyttien ja muiden solujen vasta-aineiden ja pintareseptorien ja markkerien määritykseen (immunofenotyypitys). Suora I. m. koostuu kudosleikkeen tai näytteen käsittelemisestä patologisesta materiaalista tai mikrobista, joka sisältää fluorokromiin konjugoituja spesifisiä vasta-aineita; lääkeaine pestään sitoutumattomien vasta-aineiden poistamiseksi ja tutkitaan fluoresoivalla mikroskoopilla. Positiivisissa tapauksissa kohteen reunalle ilmestyy valovoimainen immuunikompleksi. Säätö on tarpeen epäspesifisen luminesenssin sulkemiseksi pois. klo epäsuora. Niitä. ensimmäisessä vaiheessa kudosleikkaus tai sivelyvalmiste käsitellään ei-fluoresoivalla spesifisellä aineella, toisessa vaiheessa luminoivalla aineella kyseisen eläimen -globuliineja vastaan, jota levitettiin ensimmäisessä vaiheessa. Positiivisessa tapauksessa muodostuu valokompleksi, joka koostuu Ar:sta, Am:sta ja Am:sta At:sta (sandwich-menetelmä). Luminesoivan mikroskoopin lisäksi, jotta voidaan ottaa huomioon RIF solun fenotyypityksen aikana, lasersolulajittelija .

virtaussytometria- menetelmä solun, sen organellien ja siinä tapahtuvien prosessien parametrien optiseksi mittaamiseksi.

Tekniikka koostuu lasersäteen valon sironnan havaitsemisesta, kun solu kulkee sen läpi nestesuihkussa, ja valon hajoamisasteen avulla saat käsityksen solun koosta ja rakenteesta. Lisäksi analyysissä otetaan huomioon solun muodostavien tai näytteeseen ennen virtaussytometriaa lisättyjen kemiallisten yhdisteiden fluoresenssitaso (autofluoresenssi).

Solususpensio, joka on aiemmin leimattu fluoresoivilla monoklonaalisilla vasta-aineilla tai fluoresoivilla väriaineilla, tulee virtauskennon läpi kulkevaan nestevirtaan. Olosuhteet valitaan siten, että solut asettuvat riviin peräkkäin ns. suihkun hydrodynaaminen fokusointi suihkussa. Sillä hetkellä, kun solu ylittää lasersäteen, ilmaisimet tallentavat:

valonsironta pienissä kulmissa (1° - 10°) (tätä ominaisuutta käytetään solujen koon määrittämiseen).

valonsironta 90° kulmassa (voit arvioida ytimen / sytoplasman suhteen sekä solujen heterogeenisyyden ja rakeisuuden).

fluoresenssin intensiteetti useissa fluoresenssikanavilla (2 - 18-20) - voit määrittää solususpension alapopulaatiokoostumuksen jne.

Coombs, Morant, Reis ehdotti vuonna 1945 epätäydellisten punasolujen vastaisten vasta-aineiden havaitsemiseen suunniteltua antiglobuliinitestiä, ja sitä kutsuttiin myöhemmin Coombs-testiksi. Tämän menetelmän ydin piilee siinä, että ihmisen immunoglobuliinien vasta-aineita sisältävä antiglobuliiniseerumi, kun se reagoi epätäydellisillä vasta-aineilla herkistettyjen erytrosyyttien kanssa, johtaa niiden agglutinaatioon.

Riippuen siitä, ovatko vasta-aineet kiinnittyneet punasolujen pinnalle vai ovatko ne vapaita veriplasmassa, käytetään suoraa vai epäsuoraa Coombsin testiä.

Suora Coombs-testi suoritetaan tapauksissa, joissa on syytä uskoa, että tutkittavat punasolut ovat jo olemassa in vivo on herkistetty sopivilla vasta-aineilla, ts. reaktion ensimmäinen vaihe - vasta-aineiden kiinnittyminen erytrosyyttien pinnalle - tapahtui kehossa ja myöhempi antiglobuliiniseerumin lisäys aiheuttaa herkistyneiden solujen agglutinaation.

Käyttämällä epäsuoraa Coombs-testiä testiseerumissa havaitaan epätäydelliset vasta-aineet. Tässä tapauksessa reaktio etenee kahdessa vaiheessa. Ensimmäinen vaihe on koeerytrosyyttien inkubointi testiseerumin kanssa, jonka aikana testiseeruminäytteen sisältämät vasta-aineet kiinnittyvät punasolujen pinnalle. Toinen vaihe on antiglobuliiniseerumin lisääminen.

Tähän asti Coombsin testiä on käytetty laajalti laboratoriokäytännössä immunopatologisten tilojen diagnosoimiseen, erityisesti autoimmuuni hemolyyttisiin anemioihin, joille on ominaista punasolujen tuhoutuminen solukalvon sitoutumisen vuoksi vasta-aineisiin ja (tai) komplementtijärjestelmä. Se havaitsee Ig G:n (yleensä Ig G1 ja Ig G3) läsnäolon erytrosyyttikalvolla, mikä voi aktivoida komplementin ja joskus komplementin (C3d). Kuitenkin taudin akuutissa jaksossa punasolujen tuhoutumisesta, joihin kiinnittyi suuri määrä vasta-aineita, hemolyyttisen kriisin aikana sekä riittämättömällä vasta-ainemäärällä taudin kroonisessa kulussa, negatiivinen suora Coombs-testi voidaan todeta.

On korostettava, että epäsuora Coombs-testi on edelleen paras menetelmä verensiirtoväliaineen yksilölliseen valintaan, koska sen avulla voidaan määrittää mahdollisimman tarkasti luovuttajan ja vastaanottajan yksilöllinen yhteensopivuus erytrosyyttiantigeenien suhteen.

Ylimääräistä suoraa antiglobuliinitestiä autovasta-aineiden toteamiseksi suositellaan kaikkien elinten ja kudosten vastaanottajien tutkimuksessa ennen siirtoa ja hematopoieettisten kantasolujen vastaanottajia myös siirron jälkeen.

Immunohematologian ja transfusiologian lisäksi antiglobuliinitestejä käytetään laajasti useiden patologisten tilojen diagnosoinnissa: hematologisissa sairauksissa, mukaan lukien lymfoproliferatiiviset sairaudet, systeemisissä sidekudossairauksissa, Sjögrenin taudissa, kroonisessa aktiivisessa hepatiitissa jne.

Coombsin testejä käytetään aktiivisesti lääketieteellisessä genetiikassa ja oikeuslääketieteessä pinta-erytrosyyttiantigeenien määrittämiseen.

Coombsin testi on melko aikaa vievä tutkimusmenetelmä, joka vaatii erityistä huolellisuutta sen toteuttamisessa. Sitä käytettäessä on joitain vaikeuksia, jotka liittyvät erityisesti heikosti positiivisten reaktioiden tulkintaan. Tiedetään, että väärät heikot positiiviset tai negatiiviset reaktiot Coombs-testejä suoritettaessa voivat johtua erytrosyyttien riittämättömästä pesusta, antiglobuliinireagenssin neutraloinnista seerumijäämillä sekä kosketuksesta rasvattomaan pintaan, jolle antiglobuliinia voidaan levittää. korjattu, menettää toimintansa. Toinen Coombs-testin haittapuoli on antiglobuliinireagenssin epästabiilisuus, jonka valmistuksessa ja varastoinnissa on tiettyjä ominaisuuksia, mikä vaikeuttaa myös hemagglutinaatioreaktion kvantifiointia antiglobuliiniseerumilla.

Lisäksi A. Holburnin, D. Voakin et ai. osoitti, että liiallinen ravistelu punasolususpension uudelleensuspendoinnin aikana voi olla syynä vääriin negatiivisiin tuloksiin. Virheelliset tulokset antiglobuliinitestejä suoritettaessa voivat johtua myös siitä, että antiglobuliinireagenssissa on sekoitus antikomplementaarisia vasta-aineita, erityisesti C3d-, C3c-, C4c- ja C4d-komplementtikomponentteja, jotka adsorboituvat testien erytrosyyttien pinnalle inkubaation aikana ja muodostavat positiivisen tuloksen ilmestyminen.

Nämä puutteet voidaan helposti poistaa pesemällä testinäytteet perusteellisesti ja kontrolloimalla reaktio-olosuhteita.

Viime vuosikymmenen aikana alhaista ionivahvuutta isotonista suolaliuosta (LISS) on käytetty vähentämään epäsuoran Coombs-testin aikaa ja herkkyyttä.

Antiglobuliinitestien kiistaton etu useiden kirjoittajien mukaan on niiden korkea herkkyys, joka ylittää merkittävästi ei-agglutinoituvien vasta-aineiden havaitsemiseen käytettävien vaihtoehtoisten tutkimusmenetelmien resoluution.

Vertailimme veriseerumien tutkimismenetelmien erottelukykyä epätäydellisten vasta-aineiden esiintymisen suhteen käyttämällä polyglusiinia, gelatiinia ja antiglobuliiniseerumia. Tutkimuksen aikana epätäydellisten anti-D-vasta-aineiden tiittereitä seurattiin 140 isoimmuuniluovuttajien veriseeruminäytteestä gelatiini-, polyglusiini- ja epäsuorilla antiglobuliinitesteillä. Näiden menetelmien selvitys suoritettiin yleisesti hyväksyttyjen menetelmien mukaisesti.

Todettiin, että menetelmät punasolujen herkistymisen havaitsemiseksi anti-D-vasta-aineilla ovat erottelukyvyn suhteen järjestetty seuraavasti: herkin on epäsuora Coombs-testi, sitten gelatiinitesti ja vähiten informatiivinen on polyglusiinitesti. Tässä koesarjassa saadut tulokset vastaavat täysin kirjallisuustietoja, minkä perusteella voimme päätellä, että Coombsin testien herkkyys on riittävän korkea, mikä mahdollistaa punasolujen vastaisten vasta-aineiden havaitsemisen suurella varmuudella. elimistössä, jotka eivät aiheuta punasolujen agglutinaatiota.

Coombsin testeissä on kuitenkin tapauksia, joissa epätäydellisiä vasta-aineita ei havaita, vaikka sairauden kliininen kuva tai aikaisempi immunisaatio viittaa niiden mahdolliseen esiintymiseen. Tällaisissa tapauksissa voidaan olettaa, että vasta-aineiden määrä ei riitä saostamaan niitä antiglobuliiniseerumin vasta-aineilla.

Tämän johtopäätöksen vahvisti oma kokeemme, jossa solujen analyyttisen mikroelektroforeesin menetelmällä todettiin anti-D-vasta-aineiden läsnäolo testipunasoluissa, joita ei havaittu epäsuorassa Coombs-testissä. Tässä koesarjassa antiglobuliiniseerumia lisättiin punasoluihin, joita oli aiemmin inkuboitu immunisoitujen luovuttajien verestä saadun seerumin kanssa, vasta-aineen synnyn aikana liikkeellä ollessa, ts. aikana, jolloin tunnetuilla menetelmillä, mukaan lukien Coombsin testi, ei havaittu niistä vasta-aineita.

Tehdyissä tutkimuksissa todiste epätäydellisten vasta-aineiden esiintymisestä erytrosyyttien pinnalla oli tilastollisesti merkitsevä muutos herkistyneiden punasolujen elektroforeettisessa liikkuvuudessa antiglobuliiniseerumin lisäämisen jälkeen. On huomattava, että myöhemmin anti-D-vasta-aineita havaittiin kaikkien immunisoitujen luovuttajien veren seerumissa epäsuorassa Coombs-testissä.

Gillerand et ai. osoitti myös, että antiglobuliinitesteille on ominaista tietty herkkyyskynnys: positiivinen tulos havaitaan vain, kun vähintään 500 Ig G -molekyyliä on kiinnittynyt yhden punasolun pinnalle.

Lisäksi kirjallisuudessa on näyttöä siitä, että mahdollinen negatiivinen Coombs-tulos voi johtua punasoluja herkistäviä vasta-aineiden alhaisesta affiniteetista, minkä seurauksena ne eluoituvat helposti punasolujen pinnalta pesuprosessin aikana. .

Edellä olevan perusteella voidaan päätellä, että joissakin tapauksissa Coombs-testin negatiivinen tulos ei vielä ole todiste punasolujen pinnalle kiinnittyneiden vasta-aineiden puuttumisesta.

Tiedetään, että Coombsin reaktiot ovat erittäin spesifisiä ja mahdollistavat useimpien epätäydellisten vasta-aineiden havaitsemisen. Kuten jotkut kokeelliset tiedot osoittavat, antiglobuliinitestit voivat kuitenkin olla positiivisia myös ei-immunologisissa olosuhteissa. E. Muirhead et ai. toisena päivänä fenyylihydratsiinin annon jälkeen koirilla havaittiin positiivinen Coombs-testi. Tällainen nopea positiivisen reaktion ilmaantuminen todistaa sen immunologista luonnetta vastaan ​​ja pikemminkin liittyy proteiinin epäspesifiseen adsorptioon erytrosyyttien pinnalle.

M. Williams et ai. havaitsi, että klavulaanihappo voi myös aiheuttaa positiivisen reaktion, joka tekijöiden mukaan liittyy plasman proteiinien epäspesifiseen adsorptioon erytrosyyttien pinnalla. Samanlainen vaikutus havaittiin hoidettaessa kefalosporiiniantibiootteja.

Yllä olevien tutkimusten kirjoittajat korostavat Coombsin testien positiivisten tulosten ei-immunologista luonnetta ja väittävät, että nämä aineet voivat aiheuttaa punasolujen kalvojen muutoksia, minkä seurauksena punasolut voivat adsorboida proteiineja (erityisesti albumiini), joita on normaalisti veriplasmassa ja joilla ei ole vasta-aineominaisuuksia. Lisäksi on mahdollista, että solun pintaan adsorboitunut ksenobiootti toimii linkkinä solukalvon ja plasman proteiinien välillä.

Antiglobuliinitestien tulosten oikeaa tulkintaa varten on otettava huomioon myös perifeerisen veren nuorten ja kypsien punasolujen välinen määrällinen suhde. Havaittiin, että kehosta eristetyt retikulosyytit tehostetun erytroniregeneraation aikana voivat agglutinoitua antiglobuliiniseerumilla.

Positiivinen suora antiglobuliinitestitulos Sitä käytetään myös erilaisissa patologisissa tiloissa, joihin liittyy immuunijärjestelmän häiriöitä, tulehdusprosesseja, jotka johtavat erispesifisten vasta-aineiden epäspesifiseen adsorptioon erytrosyyttikalvoille. Tämä viittaa siihen, että Ig G -molekyylit eivät ole vuorovaikutuksessa spesifisten erytrosyyttiantigeenien kanssa, vaan ne ovat vain kiinnittyneitä tutkittavien solujen pinnalle.

On pidettävä mielessä, että Coombsin testiä määritettäessä sairauksissa, joille on ominaista dysproteinemian kehittyminen tai paraproteiinien esiintyminen, positiivinen tulos johtuu erytrosyyttien pinnalla olevista proteiineista, joilla ei ole punasolujen ominaisuuksia. vasta-aineita, mikä viittaa myös antiglobuliinitestien riittämättömään spesifisyyteen niiden avulla havaitun proteiinin luonteen suhteen.

Siten, kuten useat tutkimukset osoittavat, suorien ja epäsuorien antiglobuliinitestien positiiviset tulokset eivät ole ehdoton todiste vasta-aineiden läsnäolosta, koska positiivisia reaktioita voidaan havaita myös erilaisissa patologisissa tiloissa, jotka eivät liity kehon isosensibilisaatioon tai autosensibilisaatioon. Siksi vain useiden immunoserologisten menetelmien tulosten vertailu sairauden kliiniseen kuvaan antaa meille mahdollisuuden arvioida täysin kehittyvää patologista prosessia.

Positiivinen epäsuora antiglobuliinitesti negatiivisen suoran testin kanssa osoittaa yleensä, että testiseerumissa on vapaita allovasta-aineita, jotka liittyvät aikaisempiin verensiirtoihin tai raskauksiin.

Coombsin testi on usein positiivinen paroksysmaalisen yöllisen hemoglobinurian pahenemisen aikana; positiivinen Coombsin testi anti-C3:lla ja anti-C3dg:llä on kylmäagglutiniinitaudin merkki.

Tapauksissa, joissa on suuri riski saada vastasyntyneen hemolyyttinen sairaus, suorien ja epäsuorien antiglobuliinitestien tulokset ovat erittäin tärkeitä diagnoosin tekemisessä (useimmiten raskauden aikana) ja tarvittaessa ulkonäön ja muutoksen dynaamisessa seurannassa. vasta-ainetiitterissä. Useimmiten vastasyntyneen hemolyyttinen sairaus liittyy äidin ja sikiön yhteensopimattomuuteen D-antigeenin, harvemmin AB0-järjestelmän antigeenien ja vielä harvemmin muiden antigeenien (C, c, K jne.) suhteen. Tuloksena olevat vasta-aineet la, jotka ovat pääsääntöisesti Ig G -luokan epätäydellisiä vasta-aineita, havaitaan selvästi epäsuorassa antiglobuliinitestissä. Tässä taudissa oikein määritetty tiitteri ja havaittujen vasta-aineiden spesifisyys ovat erittäin tärkeitä, koska raskaana olevan naisen veressä olevien punasolujen vasta-aineiden tason ja hemolyyttisen sairauden vaikeusasteen mahdollisen ennusteen välillä on tietty korrelaatio.

Epäsuora Coombs-testi vaaditaan myös kliinisessä käytännössä turvallisen verensiirtohoidon varmistamiseksi. Sen toteuttaminen on pakollinen osa luovuttajien ja erilaisten vastaanottajaryhmien immunohematologisia tutkimuksia sekä kaikkien hoitolaitosten potilaiden rutiinitutkimuksia, jotka saattavat tarvita veren ja sen komponenttien siirtoa.

Epäsuoraa antiglobuliinitestiä käytetään seuraavissa tapauksissa:

Rh-kuuluvuuden (antigeeni D) tarkempaa määrittämistä varten sumeilla tuloksilla Rh-tekijän määrittämisestä muilla menetelmillä (polyglusiini, gelatiini jne.);

Heikkojen punasoluantigeenien (Kell-, Duffy-, Kidd-, Lewis- jne. järjestelmät) ja näiden antigeenien vasta-aineiden havaitsemiseen;

Alloimmuunisten punasolujen vasta-aineiden havaitsemiseen ja tunnistamiseen, mukaan lukien vasta-aineet, jotka aiheuttavat hemolyyttisiä verensiirron jälkeisiä reaktioita;

Määrittää AB0-järjestelmän immuunivasta-aineiden esiintymisen verensiirron hemolyyttisissä komplikaatioissa;

Yhteensopivuustestiksi siirretyn veren ja sen komponenttien yksilölliseen valintaan.

Näin ollen Coombsin testi on tärkeä diagnostinen testi, jota käytetään lääketieteen eri aloilla (hematologia, synnytys, reumatologia, transfusiologia, kliininen ja laboratoriodiagnostiikka jne.). Coombsin testin ominaisuuksien tuntemus auttaa lisäämään tulosten luotettavuutta ja myötävaikuttaa laboratoriotietojen oikeaan tulkintaan.

Kirjallisuus

1. Vasta-aineet. Menetelmät / toim. D. Cathy. - M.: Mir, 1991.

2. Bayramalibeyli I.E., Rahimov A.A., Gadzhiev A.B.. // Anemian verensiirtohoito: oppikirja. opas lääkäreille. - M .: Prakt. lääketiede, 2005. - S. 105-106.

3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfusiologia. - 2006. - Nro 2. - S. 39-62.

4. Donskov S.I.// Rhesusjärjestelmän veriryhmät: teoria ja käytäntö. - M.: VINITI RAN, 2005. - S. 180-186, 195.

5.Immunoserologia (normatiiviset asiakirjat) / comp. A.G. Bashlay, S.I. Donskov. - M.: VINITI RAN, 1998.

6.Verijärjestelmän tutkimus kliinisessä käytännössä / toim. G.I. Kozintsa, V.A. Makarov. - M.: Triada-X, 1997.

7. Levin V.I. Erytrodiereesin ja erytropoieesin mekanismista akuutin posthemorragisen anemian aikana: Ph.D. dis. …karkkia. hunaja. Tieteet. - Minsk, 1968.

8. Rahimov A.A., Bairamalibeyli I.E.. // Anemian diagnosoinnin, ehkäisyn ja hoidon perusteet. - M .: Venäjän federaation terveysministeriön GOU VUNMT:t, 2002. - S. 204-209.

9. Chumakova E.D.. // Hematologian ja transfusiologian todelliset ongelmat: Valko-Venäjän tasavallan hematologien ja transfusiologien VI kongressin materiaalit, Minsk, 24.-25.5.2007 / toim. A.I. Svirnovsky, M.P. Potapnev. - Minsk: Republikaanien tieteellinen ja käytännöllinen hematologian ja transfusiologian keskus, 2007. - S. 50.

10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lansetti. - 1945. - Voi. 2. - s. 15.

11. Freedman J. // J. Clin. Pathol. - 1979. - Voi. 32. - P. 1014-1018.

12. Holburn A.M. laadunvalvonta. Methods in Hematology / toim. I. Cavill. - Edinburg: Churchill Livingstone, 1982. - Voi. 4. - s. 34-50.

13. Khan S.// CMAJ. - 2006. - Voi. 175, nro 8 - s. 919.

14. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Voi. 63 (liite 7). - s. 719-721.

15. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Voi. 63 (liite 7). - s. 716-718.

16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// Uusi Eng. J. Med. -1976. — Voi. 277. - s. 123-125.

17. Muirhead E.E., GrovesM., Brian S. // J. Lab. Clin. Med. -1954. — Voi. 44. - P. 902-903.

18. Rosse W.F.//Hosp. Prac. - 1995. - N 105.

19. Voak D., Downie D., Mooreb. et ai. //Biotests Bull. - 1986. - Voi. 1. - s. 41-52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. et ai. Solunpesukoneet antiglobuliinitesteihin. Toistotestaus – uusi menetelmä, joka osoittaa yhden laajasti käytetyn koneen – Sorvall CW1-AF2:n – tehottomuuden: raportti DHSS Technical Branchille, helmikuu 1991.

21. Williams M.E., Thomas D., Harman C.P. et ai. //Antimikrobiset aineet ja kemoterapia. -1985. - s. 125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H. // CMAJ. - 2006. - Voi. 174, nro 3. - P. 305-307.

Lääketieteen uutisia. - 2008. - Nro 3. - S. 33-36.

Huomio! Artikkeli on osoitettu erikoislääkäreille. Tämän artikkelin tai sen osien uudelleentulostaminen Internetissä ilman hyperlinkkiä alkuperäiseen lähteeseen katsotaan tekijänoikeusrikkomukseksi.

Coombsin testi on erityinen laboratoriotesti, joka havaitsee punasoluissa tai niiden pinnalla olevia vasta-aineita. Tämä menettely mahdollistaa immuunijärjestelmän diagnosoinnin, myös vastasyntyneiden, sekä hemolyyttisten verensiirtoreaktioiden tunnistamisen. Coombsin testiä käytetään aktiivisesti oikeuslääketieteessä ja tieteellisessä genetiikassa erytrosyyttiantigeenien määrittämiseen. Kaikkien tällaisen analyysin täytäntöönpanoa koskevien sääntöjen noudattaminen antaa sinulle luotettavimman tuloksen.

Antiglobuliinitestin tarkoitus

Suora Coombs-testi mahdollistaa punasoluihin kiinnittyneiden punasolujen vastaisten vasta-aineiden havaitsemisen. Positiivinen reaktio tällaisessa tutkimuksessa viittaa autoimmuniteetin kehittymiseen.On huomattava, että negatiivinen tulos ei sulje pois esiintymistä, koska vasta-aineet ovat usein vapaassa muodossa, eli niillä ei ole yhteyttä punasoluihin. Tällaisissa tapauksissa on suositeltavaa suorittaa epäsuora Coombs-testi, jonka avulla voit määrittää autonomiset aineet

Miten analyysi suoritetaan?

Laskimoverinäytteenotto potilaalta tehdään aamulla tyhjään vatsaan huolimatta siitä, että merkittäviä tällaisen testin lopputulokseen vaikuttavia tekijöitä ei löytynyt. Otettua materiaalia saa säilyttää 2–8 °C:n lämpötilassa enintään seitsemän päivää. Jotta tämä tutkimus olisi mahdollisimman tarkka, kokoveri on toimitettava laboratorioon kahden ensimmäisen tunnin aikana. Ihannetapauksessa Coombsin testin tulisi näyttää negatiivinen tulos, joka osoittaa hemolyyttisten muutosten puuttumisen kehossa.

Summien purkaminen

Coombsin testi on melko aikaa vievä tutkimusmenetelmä, joka vaatii huolellista ja tarkkaa suoritusta. Tällaista testiä käytettäessä voi esiintyä vaikeuksia, jotka liittyvät lopputulosten virheelliseen tulkintaan positiivisten reaktioiden heikon ilmentymisen vuoksi. On huomattava, että analyysin epäluotettavuus - eli positiivinen Coombs-testi - voi johtua punasolujen tehottomasta pesusta, kosketuksesta rasvan kanssa.
pintaan sekä antiglobuliinireagenssien neutralointi komponenteilla

seerumi. Toinen tämän tutkimusmenetelmän haittapuoli on otetun materiaalin epävakaus, jonka varastoinnissa on tiettyjä ominaisuuksia.

Väärä negatiivinen tulos voi johtua punasolususpension liiallisesta ravistelusta uudelleensuspendoinnin aikana. Virheelliset tulokset voivat johtua myös anti-komplementaaristen vasta-ainekontaminanttien läsnäolosta, jotka adsorboituvat inkuboinnin aikana testattujen punasolujen pinnalle, jolloin tuloksena on positiivinen tulos. Jos testinäytteet pestään perusteellisesti ja reaktio-olosuhteita valvotaan, nämä puutteet voidaan helposti poistaa, mikä lisää mahdollisuuksia saada Coombs-testin luotettavimmat indikaattorit.

- antiglobuliinitesti, jonka tarkoituksena on havaita Rh-negatiivisesta verestä epätäydelliset punasolujen vastaiset Rh-tekijän vasta-aineet - spesifinen proteiini, joka sijaitsee Rh-positiivisen veren punasolujen pinnalla. Tätä testiä on kahta tyyppiä: suora - vasta-aineiden havaitseminen punasolujen pinnalla, epäsuora - vasta-aineiden havaitseminen veren seerumissa. Suora testi suoritetaan verisairauksien diagnosoinnissa ja hoidon seurannassa: hemolyyttinen anemia, vastasyntyneen hemolyyttinen sairaus ja muut. Epäsuora testi suoritetaan luovuttajan ja vastaanottajan veren yhteensopivuuden arvioimiseksi verensiirron aikana sekä Rh-konfliktin olemassaolon ja riskin määrittämiseksi raskauden suunnittelussa ja hallinnassa. Coombs-testin materiaalina on laskimoveri, tutkimus suoritetaan agglutinaatioreaktioon perustuvilla menetelmillä. Yleensä molemmat testit antavat negatiivisen tuloksen. Analyysi suoritetaan yhden päivän sisällä.

Coombsin testi on Rh-negatiivisen veren kliininen tutkimus, jonka tarkoituksena on havaita Rh-tekijän vasta-aineita. Testiä käytetään reesuskonfliktin ja hemolyyttisten reaktioiden kehittymisen riskin tunnistamiseen. Jokaisessa ihmisessä punasolujen pinta sisältää tietyn joukon antigeenejä tai agglutinogeenejä - eri luonteisia yhdisteitä, joiden läsnäoloa tai puuttumista käytetään veriryhmän ja Rh-tekijän arvioimiseen. Antigeenejä on monenlaisia, lääketieteellisessä käytännössä agglutinogeenit A ja B, jotka määrittävät veriryhmän, ja agglutinogeeni D, Rh-tekijä, ovat käytännössä merkittävimpiä. Positiivisella Rh-tekijällä D-antigeenit havaitaan punasolujen ulkokalvolla, negatiivisella - ei.

Coombsin testi, jota kutsutaan myös antiglobuliinitestiksi, on tarkoitettu epätäydellisten punasolujen vasta-aineiden havaitsemiseen Rh-tekijäjärjestelmälle verestä. Rh-tekijän vasta-aineet ovat spesifisiä immunoglobuliineja, joita muodostuu Rh-negatiivisessa veressä, kun siihen pääsee punasoluja, joissa on D-agglutinogeenia.Tämä voi tapahtua, kun sikiön ja raskaana olevan naisen veri sekoitetaan, jolloin verensiirrot suoritetaan ilman edeltävää verimääritystä. Coombs-testistä on kaksi versiota - suora ja epäsuora. Kun suoritetaan suora Coombs-testi, vasta-aineet havaitaan kiinnittyneinä punasolujen pintaan. Tutkimusta käytetään hemolyyttisen reaktion syyn määrittämiseen. Epäsuora Coombs-testi on tarkoitettu punasolujen vastaisten vasta-aineiden havaitsemiseen veriplasmassa. On tarpeen määrittää luovuttajan ja vastaanottajan tai äidin ja sikiön veren yhteensopivuus, se auttaa estämään reesuskonfliktin kehittymisen ja sitä seuraavan punasolujen hemolyysin.

Kummankin Coombs-testin muunnelman veri otetaan suonesta. Analyysi suoritetaan agglutinaatiomenetelmällä käyttäen antiglobuliiniseerumia. Tutkimuksen tuloksia hyödynnetään hematologiassa hemolyyttisten reaktioiden syiden tunnistamisessa, kirurgiassa ja elvytyksessä verensiirtojen aikana, synnytys- ja gynekologiassa Rh-negatiivisen veren raskauden seurannassa.

Indikaatioita

Suora Coombs-testi, joka havaitsee punasolujen pintaan kiinnittyneet vasta-aineet, on määrätty eri alkuperää oleviin hemolyyttisiin reaktioihin (punasolujen tuhoutumiseen). Tutkimus on tarkoitettu primaariseen autoimmuuni hemolyyttiseen anemiaan, verensiirron jälkeiseen hemolyyttiseen anemiaan, vastasyntyneen hemolyyttiseen sairauteen, autoimmuuni-, kasvain- tai tartuntatautien aiheuttamaan punasolujen hemolyysiin sekä lääkkeiden käyttöön, esim. kinidiini, metyylidopa, prokaiiniamidi . Epäsuoraa Coombsin testiä, joka havaitsee veriplasman vasta-aineita, käytetään estämään reesuskonfliktin kehittyminen. Se on tarkoitettu potilaille, jotka valmistautuvat verensiirtoon, sekä raskaana oleville naisille, joilla on negatiivinen Rh-tekijä, edellyttäen, että lapsen tulevalla isällä on positiivinen Rh-tekijä.

Rh-yhteensopivuuden määrittämiseksi Coombsin testiä ei anneta potilaille, joilla on Rh-positiivinen veri. Näissä tapauksissa punasolujen pinnalla on jo antigeenejä, vasta-aineiden tuotantoa ei voida laukaista verensiirrolla tai sikiön veren pääsyllä raskaana olevan naisen verenkiertoon. Tutkimusta ei myöskään ole tarkoitettu raskaana oleville naisille, jos molemmilla vanhemmilla on negatiivinen Rh-tekijä, perinnöllinen resessiivinen ominaisuus. Tällaisten parien lapsella on aina Rh-negatiivinen veri, immunologinen konflikti äidin kanssa on mahdotonta. Hemolyyttisissä patologioissa antiglobuliinitestiä ei käytetä hoidon onnistumisen seuraamiseen, koska tulokset eivät heijasta punasolujen tuhoutumisprosessin aktiivisuutta.

Coombsin testin rajoituksena on tutkimusmenettelyn monimutkaisuus - luotettavien tulosten saamiseksi on noudatettava lämpötila- ja aikaehtoja, reagenssien ja biomateriaalin valmistussääntöjä. Coombs-testin etuna on sen korkea herkkyys. Hemolyyttisessä anemiassa tämän testin tulokset pysyvät positiivisina, vaikka hemoglobiini, bilirubiini ja retikulosyytit palaisivat normaaleiksi.

Valmistelu analysointiin ja materiaalin keräämiseen

Coombs-testin suorittamisen materiaalina on laskimoveri. Verinäytteenoton ajalle ja potilaan valmistelulle ei ole erityisiä vaatimuksia. Kuten missä tahansa tutkimuksessa, on suositeltavaa pitää tauko ruokailun jälkeen vähintään 4 tuntia ja viimeisen 30 minuutin aikana tupakoinnin lopettamista, liikuntaa ja henkisen stressin välttämistä. Lääkkeiden käytön lopettamisesta kannattaa myös keskustella etukäteen lääkärin kanssa – jotkut lääkkeet voivat vääristää Coombs-testin tuloksia. Veri otetaan ruiskulla kyynärlaskimosta, harvemmin käden takalaskimosta. Muutaman tunnin kuluessa materiaali toimitetaan laboratorioon.

Kun suoritetaan suora Coombs-testi, antiglobuliiniseerumia lisätään potilaan veriseerumiin. Jonkin ajan kuluttua seoksesta tutkitaan agglutinaattien esiintyminen - niitä muodostuu, jos punasoluissa on vasta-aineita. Positiivisella tuloksella määritetään agglutinoiva tiitteri. Epäsuora Coombsin testi koostuu useammasta vaiheesta. Ensinnäkin seerumissa olevat vasta-aineet kiinnittyvät injektoituihin punasoluihin inkubaation aikana. Sitten näytteeseen lisätään antiglobuliiniseerumia, jonkin ajan kuluttua määritetään agglutinaattien läsnäolo ja tiitteri. Analyysijakso on 1 päivä.

Normaalit tulokset

Normaalisti suoran Coombs-testin tulos on negatiivinen (-). Tämä tarkoittaa, että veressä ei ole punasoluihin liittyviä vasta-aineita, eivätkä ne voi olla hemolyysin syy. Epäsuoran Coombs-testin normaali tulos on myös negatiivinen (-), eli veriplasmassa ei ole Rh-tekijän vasta-aineita. Kun valmistellaan vastaanottajan verensiirtoa, tämä tarkoittaa yhteensopivuutta luovuttajan veren kanssa, kun seurataan raskautta - äidin Rh-herkistymisen puuttuminen, alhainen immunologisen konfliktin kehittymisen riski. Fysiologiset tekijät, kuten ruokailutottumukset tai fyysinen aktiivisuus, eivät voi vaikuttaa testin tulokseen. Siksi, jos tulos on positiivinen, lääkärin kuuleminen on välttämätöntä.

Analyysin diagnostinen arvo

Positiivinen Coombs-testin tulos ilmaistaan ​​kvalitatiivisesti (+) - (++++) tai kvantitatiivisesti tiittereinä 1:16 - 1:256. Vasta-ainepitoisuudet erytrosyyteistä ja veren seerumista määritetään molemmista näytteistä. Suoran Coombs-testin positiivisella tuloksella punasolujen ulkokalvolla havaitaan vasta-aineita, jotka johtavat näiden verisolujen tuhoutumiseen. Syynä voi olla verensiirto ilman aikaisempaa tyyppiä - verensiirron jälkeinen hemolyyttinen reaktio, samoin kuin vastasyntyneen erytroblastoosi, lääkkeiden käytöstä johtuva hemolyyttinen reaktio, primaarinen tai sekundaarinen autoimmuuni hemolyyttinen anemia. Punasolujen sekundaarista tuhoutumista voivat aiheuttaa systeeminen lupus erythematosus, Evansin oireyhtymä, Waldenströmin makroglobulinemia, kohtauksellinen kylmä hemoglobinuria, krooninen lymfaattinen leukemia, lymfooma, tarttuva mononukleoosi, kuppa, mykoplasminen keuhkokuume.

Epäsuoran Coombs-testin positiivinen tulos osoittaa, että plasmassa on Rh-tekijän vasta-aineita. Käytännössä tämä tarkoittaa, että Rh-herkistyminen on tapahtunut, on mahdollista, että Rh-konflikti kehittyy luovuttajan veren infuusion jälkeen raskauden aikana. Raskauskomplikaatioiden estämiseksi naiset, joiden Coombs-testin tulos on positiivinen, merkitään erityisrekisteriin.

Normista poikkeamien hoito

Coombsin testi viittaa isoserologisiin tutkimuksiin. Sen tulokset mahdollistavat hemolyyttisen reaktion tunnistamisen sekä luovuttajan ja vastaanottajan, äidin ja sikiön veren yhteensopivuuden määrittämisen reesuskonfliktin kehittymisen estämiseksi. Jos testin tulos on positiivinen, on tarpeen kysyä neuvoa hoitavalta lääkäriltä - synnytyslääkäri-gynekologi, hematologi, kirurgi.