Positiivinen Coombsin testi on tyypillistä. Coombsin testi: kliiniset ja laboratorionäkökohdat

Lääketieteessä olevista monista antigeeneistä suurin merkitys annetaan kolmelle veren agglutinogeenityypille. Yksi niistä on tyyppi, joka on vastuussa Rh-tekijän ilmenemisestä: jos sitä on punasolukalvolla, diagnosoidaan Rh + -veriryhmä, jos sitä ei ole - Rh-. Jos erytrosyytit, joissa on Rh + -agglutinogeenia, tulevat Rh-negatiivisen veren koostumukseen, keho laukaisee immuunivasteen ja alkaa tuottaa vasta-aineita tälle antigeenille, mikä aiheuttaa patologisia tiloja.

VIITE! Rh-tekijä on monimutkainen monikomponenttijärjestelmä, jossa on useita kymmeniä antigeenejä. Yleisimmät näistä ovat D-tyypin agglutinogeenit (85 % tapauksista) sekä E ja C.

Coombsin testi suoritetaan vain suorien indikaatioiden läsnä ollessa. Yleinen luettelo syistä Coombsin testin määräämiseen:

• raskauden suunnittelu ja hallinta (vanhemmilla on erilainen Rh);
• luovutus ja verensiirtoon valmistautuminen (veren epäsuhta Rh-arvossa ei ole yhtä haitallinen kuin ero AB0-järjestelmässä);
• suunniteltu kirurginen toimenpide (jos verenhukkaa täydennetään verensiirrolla);
• hemolyyttisten sairauksien diagnosointi.

Tarkemmat käyttöaiheet riippuvat suoritettavan tutkimuksen tyypistä.

Suora Coombsin testi

Suora testi havaitsee vasta-aineita punasolujen pinnalla. Tämä on välttämätöntä olemassa olevan diagnoosin kannalta hemolyyttiset patologiat:

• autoimmuuni (erytrosyytit ja hemoglobiini tuhoutuvat kehon omien vasta-aineiden hyökkäyksen seurauksena);
• lääkitys (patologinen prosessi laukaisee tiettyjen lääkkeiden, kuten kinidiinin tai prokaiiniamidin, nauttimisen);
• verensiirron jälkeen (veriryhmän epäsuhta verensiirron aikana) sekä Rh-konfliktin muodossa raskauden aikana (vastasyntyneiden erytroblastoosi).

VIITE! Hemolyyttinen anemia on sairaus, joka liittyy punasolujen ennenaikaiseen tuhoutumiseen hemolyysin seurauksena, mikä johtaa riittämättömään veren happisaturaatioon ja aivojen ja/tai sisäelinten hypoksiaan.

Verielementtien hemolyysiä havaitaan onkologisissa, infektio- ja reumaattisissa sairauksissa, joten suoraa Coombsin testiä voidaan käyttää lisäkeinona patologisen tilan diagnosoinnissa. Samanaikaisesti on syytä muistaa: analyysin negatiivinen arvo ei sulje pois hemolyysin mahdollisuutta, mutta on syy lisätutkimukseen.

Epäsuora Coombsin testi

Epäsuoraa testiä käytetään useammin patologisten tilanteiden ehkäisyyn. Se auttaa havaitsemaan vasta-aineita veriplasmasta, mikä on välttämätöntä verensiirron yhteensopivuuden arvioimiseksi ja Rh-konfliktin riskien diagnosoimiseksi raskauden aikana.

Yli 80 %:lla ihmisistä on positiivinen Rh-tekijä (Rh+), vastaavasti hieman alle 20 %:lla Rh-negatiivisia. Jos Rh-äidille kehittyy Rh+-vauva, hänen kehonsa alkaa tuottaa vasta-aineita, jotka hyökkäävät sikiön punasoluja vastaan ​​ja aiheuttavat hemolyysin.

Kun otetaan huomioon se tosiasia, että "eri-reesus"-avioliittojen prosenttiosuus saavuttaa 12-15%, vastasyntyneen hemolyyttisen taudin riskin pitäisi olla korkea, mutta todellisuudessa vain 1/25 tällaisesta tapauksesta naisilla, ilmiö. herkistymistä (200 onnistuneesta synnytyksestä, 1 esimerkki hemolyyttisestä patologiasta). Tämä johtuu osittain siitä, että ensimmäinen Rh-positiivinen lapsi ei yleensä aiheuta avointa aggressiota äidin kehossa; Suurin osa tapauksista esiintyy toisella ja sitä seuraavilla lapsilla. Sama periaate pätee kuin tavanomaisessa herkistyksessä tietylle allergeenille.

Ensimmäisellä kosketuksella ei tapahdu reaktiota. Keho vain tutustuu sille uuteen antigeeniin, joka tuottaa IgM-luokan vasta-aineita, jotka vastaavat nopeasta immuunivasteesta, mutta tunkeutuvat harvoin istukan läpi lapsen vereen. Kaikki patologiset reaktiot ilmenevät toistuvassa "tapaamisessa", kun kehossa alkaa muodostua IgG-luokan vasta-aineita, jotka tunkeutuvat helposti sikiön verenkiertoon ja alkavat hemolyysiprosessin.

Epäsuora Coombsin testi raskauden aikana avulla voit havaita vasta-aineiden läsnäolon äidin kehossa ja tunnistaa ajoissa herkistymisen alkuvaihe. Myönteinen vastaus edellyttää rekisteröitymistä kuukausittaiseen vasta-ainetiitteritutkimukseen ja pakollista sairaalahoitoa 3-4 viikkoa ennen synnytystä.

VIITE! Rh-tekijän yhteensopimattomuus ei vaikuta äidin tilaan millään tavalla, hemolyyttinen sairaus kehittyy vain lapsella. Vakavissa tapauksissa ja jos oikea-aikaista vastausta ei saada, sikiö voi kuolla kohdussa tai heti syntymän jälkeen.

Menettelyyn valmistautuminen ja sen toteuttaminen

Diagnoosissa käytetään laskimoverta. Erityistä pitkäaikaista valmistautumista Coombsin testiin ei vaadita. Yritä noudattaa vakiosääntöjä, ennen kuin otat verta suonesta analyysiä varten:

• 3 päivän ajan luopua alkoholista, lääkkeistä (jos mahdollista);
• suunnittele viimeinen ateria myöhemmin kuin 8 tuntia ennen veren ottamista analyysiä varten;
• lopeta tupakointi, fyysinen, henkinen ja emotionaalinen stressi 1 tunnissa;
• Juo lasillinen puhdasta hiilihapotonta vettä ennen toimenpidettä.

Tutkimusmenetelmä perustuu hemagglutinaatioreaktioon.

Kun suoritat suoran testin verinäyte altistetaan ennalta valmistetulle antiglobuliiniseerumille tunnetuilla indikaattoreilla, seosta pidetään jonkin aikaa ja tarkistetaan agglutinaatit, joita muodostuu vasta-aineiden esiintyessä punasoluissa. Agglutinaattien taso diagnosoidaan käyttämällä agglutinaatiotiitteriä.

Epäsuora testi Coombsilla on samanlainen tekniikka, mutta monimutkaisempi toimintosarja. Antigeeniset erytrosyytit (jossa on Rh-tekijä) viedään erotettuun veren seerumiin, ja vasta näiden manipulaatioiden jälkeen lisätään antiglobuliiniseerumia diagnoosia ja agglutinaattitiitteriä varten.

Tutkimustulokset

Normaalisti sekä suorat että epäsuora Coombsin testi pitäisi antaa negatiivinen tulos:

• negatiivinen suora testi osoittaa, että veressä ei ole spesifisiä vasta-aineita punasoluihin liittyvää Rh-tekijää vastaan, eivätkä ne voi olla hemolyysin syy
• negatiivinen epäsuora testi osoittaa, että veriplasmassa ei myöskään ole vapaita vasta-aineita Rh-tekijälle; seikka osoittaa luovuttajan veren yhteensopivuuden vastaanottajan veren (tai äidin ja lapsen veren) kanssa Rh-tekijän mukaan.

Positiivinen Coombs-testi osoittaa kehon Rh-herkistymisen, joka on Rh-konfliktin pääasiallinen syy verensiirron yhteydessä tai kuljetettaessa lasta, jolla on erilainen Rh-tila. Tässä tapauksessa tulokset pysyvät muuttumattomina 3 kuukautta (erytrosyyttien elinikä). Jos syynä on autoimmuuni hemolyyttinen anemia, positiivinen testi voi kummituttaa potilasta useita vuosia (joissakin tapauksissa koko elämän).

VIITE! Antiglobuliinitesti on erittäin herkkä, mutta siinä on vähän tietoa. Se ei rekisteröi hemolyyttisen prosessin aktiivisuutta, ei määritä vasta-aineen tyyppiä eikä pysty tunnistamaan patologian syytä. Täydemmän kuvan saamiseksi hoitava lääkäri määrää välttämättä lisätutkimuksia (verimikroskopia, yleinen ja biokemiallinen analyysi, reumaattiset testit, ESR, rauta- ja ferritiinitasot).

Herkistysasteella voi olla kvalitatiivinen ilmaus ("+" - "++++") tai määrällinen - kuvatekstin muodossa:

• 1:2 - pieni arvo, ei aiheuta vaaraa;
• 1:4 - 1:8 - immunologisen reaktion kehittymisen alku; ei aiheuta vaaraa, mutta vaatii jatkuvaa seurantaa;
• 1:16 -1:1024 - kirkas herkistymismuoto, toimenpiteisiin tulee ryhtyä välittömästi.

Positiivisen testin syy voi olla:

• tyypittämättömän verensiirto (tai kirjoitusvirheellä), kun luovuttajan ja vastaanottajan Rh-tekijä ei täsmää;
• Rhesus-konflikti raskauden aikana (jos isän ja äidin veren antigeenien koostumus ei täsmää);
• autoimmuuni hemolyyttinen anemia - sekä synnynnäinen (primaarinen) että toissijainen, mikä on seurausta tietyistä sairauksista (Evansin oireyhtymä, tarttuva keuhkokuume, kuppa, kylmä hemoglobinuria, lymfooma);
• lääkkeen hemolyyttinen reaktio.

Potilas ei voi ratkaista mitään yllä olevista ongelmista ilman lääkärin apua. Kaikissa tapauksissa tarvitaan kiireellinen konsultaatio, rekisteröinti tai kiireellinen sairaalahoito.

HUOMIO! Harvinaisissa tapauksissa väärä positiivinen Coombs-testi on mahdollista. Syynä tähän voivat olla toistuvat verensiirrot sekä monet sairaudet: nivelreuma, lupus erythematosus, sarkoidoosi. Tämä ilmiö voidaan havaita myös pernan poistamisen jälkeen sekä reaktion kulkua rikkoen (sisällön toistuva ravistelu, epäpuhtauksien läsnäolo).

Coombsin testi on laboratoriotesti, joka tehdään hemagglutinaatioon vaikuttamalla. Se perustuu vasta-aineiden herkkyyteen immunoglobuliineja ja entsyymielementtejä vastaan ​​sekä niiden kykyyn agglutinoida C3:lla tai Lg:llä päällystettyjä punasoluja.

Coombsin suora diagnoosi

Käytetään solujen ulkopuolelle asennettujen vasta-aineiden tai komplementtikomponenttien havaitsemiseen. Suora Coombs-testi suoritetaan seuraavilla vaiheilla.

Tällaisen testin käyttö

Suoraa Coombsin diagnoosia käytetään tietyissä tapauksissa, kuten:

• verensiirron vaikutukset;
• autoimmuuni hemolyysi;
• lääkkeiden aiheuttama hemolyyttinen anemia.

Epäsuora Coombsin testi

Tämä diagnostiikka mahdollistaa solujen vasta-aineiden havaitsemisen seerumista, jota inkuboidaan yleensä luovuttajan tyypin 0 punasolujen kanssa, ja sitten suoritetaan suora testi. Käytä epäsuoraa Coombs-diagnostiikkaa seuraavissa tapauksissa:

Kuinka valmistautua analyysiin

Kyselyyn valmistautumisessa on joitain sääntöjä.

1. Jos potilas on vastasyntynyt, vanhempien tulee olla tietoisia siitä, että testaus auttaa diagnosoimaan HN:n (vastasyntyneen hemolyyttinen sairaus).
2. Jos potilaalla on epäilyksiä hemolyyttisestä anemiasta, hänelle tulee selittää, että analyysin avulla selviää, johtuuko se suojahäiriöistä, lääkkeistä tai muista tekijöistä.
3. Coombsin testi, suora tai epäsuora, ei rajoita ruokavaliota tai ruokavaliota.
4. Potilaalle tulee ilmoittaa, että veri otetaan laskimosta tutkimusta varten, ja myös kertoa milloin tarkalleen laskimopunktio tehdään.
5. Sinun tulee myös varoittaa epämukavuuden todennäköisyydestä käsivarren sitomisen ja itse toimenpiteen aikana.
6. Lääkkeet, jotka voivat vaikuttaa näytteen tuloksiin, on lopetettava.

Näitä lääkkeitä ovat:

• "Streptomysiini";
• "Metyylidopa";
• "Prokaiiniamidi";
• sulfonamidit;
• "Melphalan";
• "Kinidiini";
• "Rifampiini";
• "isoniatsidi";
• kefalosporiinit;
• "Hydralatsiini";
• "Klooripromatsiini";
• "Levodopa";
• "Tetrasykliini";
• "Difenyylihydantoiini";
• "Etosuksimidi";
• "Penisilliini";
• mefenaamihappo.

Verinäytteet otetaan aamulla tyhjään vatsaan.

Miten tapahtuma järjestetään

Coombsin testi suoritetaan seuraavassa järjestyksessä:

1. Tehtäessä diagnostiikkaa aikuispotilaalle laskimopunktion jälkeen veri otetaan putkiin EDTA:lla (etyleenidiamiinitetraasetaatti).
2. Vastasyntyneestä veri otetaan napanuorasta dekantterilasiin, jossa on EDTA:ta.
3. Pistokohtaa painetaan vanupuikolla, kunnes verenvuoto lakkaa.
4. Kun mustelma ilmestyy laskimonpistokohtaan, määrätään lämpimiä kompressioita.
5. Verenoton jälkeen potilas voi palata vieroituslääkkeiden ottamaan.
6. Vastasyntyneen vanhemmille tulee kertoa, että anemian dynamiikan seuraamiseksi voidaan tarvita toissijainen analyysi.

Coombsin testin edut

Tällaisella tutkimuksella on joitain etuja, nimittäin:

Analyysin haitat

Positiivinen Coombsin testi on melko työläs tutkimusmenetelmä, mikä viittaa tyypilliseen suorituksen tarkkuuteen. Sitä käytettäessä voi kohdata tiettyjä vaikeuksia, jotka liittyvät erityisesti heikosti positiivisten vaikutusten tulkintaan.

On todettu, että virheelliset negatiiviset tai heikosti positiiviset reaktiot Coombs-näytteiden tuotannossa voivat olla seurausta solujen epätyydyttävästä aktiivisesta pesusta, antiglobuliinireagenssin heikentymisestä seerumijäännöksillä sekä yhdisteistä, jotka eivät ole rasvaisia. antiglobuliini voidaan korjata, mutta se menettää tehonsa.

Coombs-testillä on toinen haittapuoli - antiglobuliinireagenssin alhainen stabiilisuus, jonka hankinnassa ja varastoinnissa on yksilöllisiä ominaisuuksia, mikä vaikeuttaa myös antiglobuliiniseerumin vaikutuksen numeerista arviointia hemagglutinaatioon.

Sairaudet, jotka voidaan havaita tutkimuksen aikana

Coombsin diagnostiikka mahdollistaa tietyntyyppisten sairauksien havaitsemisen, kuten:

• vastasyntyneiden hemolyyttinen huonovointisuus;
• erilaiset verensiirtoreaktiot;
• autoimmuuni hemolyysi;
• lääketieteellinen hemolyyttinen anemia.

Tähän mennessä Coombsin testiä pidetään melko suosittuna verikoejärjestelmänä sekä aikuisilla että vastasyntyneillä. Sen avulla voidaan tunnistaa monia erilaisia ​​sairauksia.

Coombsin testi on kliininen verikoe, joka tehdään sen selvittämiseksi, sisältääkö veri tiettyjä vasta-aineita, jotka eivät ehkä ole turvallisia. Nämä vasta-aineet tarttuvat punasoluihin ja voivat tunkeutua immuunijärjestelmään ja vahingoittaa muilla tavoilla. Lääketieteellisessä terminologiassa tätä testiä kutsutaan myös antiglobuliinitestiksi (AGT).

Coombsin testien tyypit

Coombsin testejä on kahdenlaisia ​​- suora ja epäsuora.

Suora Coombsin testi, joka tunnetaan myös nimellä suora (DAT), havaitsee autovasta-aineet, jotka kiinnittyvät punasolujen pintaan. Näitä vasta-aineita syntyy joskus elimistössä tiettyjen sairauksien vuoksi tai käytettäessä tiettyjä lääkkeitä, kuten prokaiiniamidia, metyylidopaa tai kinidiiniä.

Nämä vasta-aineet ovat vaarallisia, koska ne aiheuttavat joskus anemiaa tuhoamalla punasoluja.

Tämä testi on joskus määrätty diagnosoimaan keltaisuuden tai anemian syy.

Normaalisti Coombsin reaktio on negatiivinen.

Positiivinen:

• vastasyntyneen hemolyyttinen sairaus;
• autoimmuuni hemolyysi;
• hemolyyttiset verensiirtoreaktiot;
• lääkkeiden aiheuttama immuuni hemolyyttinen anemia.

Epäsuora Coombsin testi, joka tunnetaan myös nimellä , käytetään veren seerumin sisältämien punasolujen vasta-aineiden havaitsemiseen (seerumi on kirkas keltainen verineste, joka jää jäljelle punaisten verisolujen ja koagulantin erittymisen jälkeen).

Epäsuoraa Coombsin testiä käytetään verensiirrossa määrittämään, vastaako luovuttajan veri vastaanottajan verta. Tätä kutsutaan yhteensopivuustestiksi ja se auttaa estämään luovuttajan vereen kohdistuvia haittavaikutuksia. Tätä analyysiä suositellaan myös raskaana oleville naisille. Joillakin naisilla on IgG-vasta-aineita, jotka voivat läpäistä istukan sikiöön ja vahingoittaa vastasyntynyttä aiheuttaen hemolyyttisen sairauden, joka tunnetaan nimellä hemolyyttinen anemia.

Menettely

Veri otetaan ruiskulla suonesta, yleensä kämmenselästä tai kyynärpään kaaresta. Pistokohta desinfioidaan perusteellisesti ennen tätä ja verikokeen jälkeen laitetaan puhdas sideharso tai vanu.

Tuloksena oleva veri puhdistetaan laboratoriossa ja punasolut erotetaan. Näyte tutkitaan sitten peräkkäin käyttämällä erilaisia ​​seerumeita ja Coombs-reagensseja, mikä vastapainotetaan. Jos agglutinaatiota (punasolujen paakkuuntumista) ei ole, tämä tarkoittaa positiivista tulosta.

Jos testi kuitenkin on negatiivinen, se tarkoittaa, että veressä on vasta-aineita, jotka vaikuttavat punasoluja vastaan. Tämä voi viitata erilaisiin sairauksiin, kuten anemiaan (joko luonnolliseen tai lääkkeiden aiheuttamaan), kuppaan tai mykoplasma-infektioon. Tulosten saatuaan hoitava lääkäri määrää asianmukaisen hoidon.

Video

Coombs, Morant, Reis ehdotti vuonna 1945 epätäydellisten punasolujen vastaisten vasta-aineiden havaitsemiseen suunniteltua antiglobuliinitestiä, ja sitä kutsuttiin myöhemmin Coombs-testiksi. Tämän menetelmän ydin piilee siinä, että ihmisen immunoglobuliinien vasta-aineita sisältävä antiglobuliiniseerumi, kun se reagoi epätäydellisillä vasta-aineilla herkistettyjen erytrosyyttien kanssa, johtaa niiden agglutinaatioon.

Riippuen siitä, ovatko vasta-aineet kiinnittyneet punasolujen pinnalle vai ovatko ne vapaita veriplasmassa, käytetään suoraa vai epäsuoraa Coombsin testiä.

Suora Coombsin testi suoritetaan tapauksissa, joissa on syytä uskoa, että tutkittavat punasolut ovat jo olemassa in vivo on herkistetty sopivilla vasta-aineilla, ts. reaktion ensimmäinen vaihe - vasta-aineiden kiinnittyminen erytrosyyttien pinnalle - tapahtui elimistössä ja myöhempi antiglobuliiniseerumin lisäys aiheuttaa herkistyneiden solujen agglutinaation.

Käyttämällä epäsuoraa Coombs-testiä testiseerumissa havaitaan epätäydelliset vasta-aineet. Tässä tapauksessa reaktio etenee kahdessa vaiheessa. Ensimmäinen vaihe on koeerytrosyyttien inkubointi testiseerumin kanssa, jonka aikana testiseeruminäytteen sisältämät vasta-aineet kiinnittyvät punasolujen pinnalle. Toinen vaihe on antiglobuliiniseerumin lisääminen.

Tähän asti Coombsin testiä on käytetty laajalti laboratoriokäytännössä immunopatologisten tilojen diagnosoimiseen, erityisesti autoimmuuni hemolyyttisiin anemioihin, joille on ominaista punasolujen tuhoutuminen solukalvon sitoutumisen vuoksi vasta-aineisiin ja (tai) komplementtijärjestelmä. Sen avulla havaitaan Ig G:n (yleensä Ig G1 ja Ig G3) läsnäolo erytrosyyttikalvolla, mikä voi aktivoida komplementin ja joskus komplementin (C3d). Kuitenkin taudin akuutissa jaksossa punasolujen tuhoutumisesta, joihin kiinnittyi suuri määrä vasta-aineita, hemolyyttisen kriisin aikana sekä riittämättömällä vasta-ainemäärällä taudin kroonisessa kulussa, negatiivinen suora Coombs-testi voidaan todeta.

On korostettava, että epäsuora Coombs-testi on edelleen paras menetelmä verensiirtoväliaineen yksilölliseen valintaan, koska sen avulla voidaan määrittää mahdollisimman tarkasti luovuttajan ja vastaanottajan yksilöllinen yhteensopivuus erytrosyyttiantigeenien suhteen.

Ylimääräistä suoraa antiglobuliinitestiä autovasta-aineiden toteamiseksi suositellaan kaikkien elinten ja kudosten vastaanottajien tutkimuksessa ennen siirtoa ja hematopoieettisten kantasolujen vastaanottajia myös siirron jälkeen.

Immunohematologian ja transfusiologian lisäksi antiglobuliinitestejä käytetään laajasti useiden patologisten tilojen diagnosoinnissa: hematologisissa sairauksissa, mukaan lukien lymfoproliferatiiviset sairaudet, systeemisissä sidekudossairauksissa, Sjögrenin taudissa, kroonisessa aktiivisessa hepatiitissa jne.

Coombsin testejä käytetään aktiivisesti lääketieteellisessä genetiikassa ja oikeuslääketieteessä pinta-erytrosyyttiantigeenien määrittämiseen.

Coombsin testi on melko aikaa vievä tutkimusmenetelmä, joka vaatii erityistä huolellisuutta sen toteuttamisessa. Sitä käytettäessä on joitain vaikeuksia, jotka liittyvät erityisesti heikosti positiivisten reaktioiden tulkintaan. Tiedetään, että väärät heikot positiiviset tai negatiiviset reaktiot Coombs-testejä suoritettaessa voivat johtua erytrosyyttien riittämättömästä pesusta, antiglobuliinireagenssin neutraloinnista seerumijäämillä sekä kosketuksesta rasvattomaan pintaan, jolle antiglobuliinia voidaan levittää. korjattu, menettää toimintansa. Toinen Coombs-testin haittapuoli on antiglobuliinireagenssin epästabiilisuus, jonka valmistuksessa ja varastoinnissa on tiettyjä ominaisuuksia, mikä vaikeuttaa myös hemagglutinaatioreaktion kvantifiointia antiglobuliiniseerumilla.

Lisäksi A. Holburnin, D. Voakin et ai. osoitti, että liiallinen ravistelu punasolususpension uudelleensuspendoinnin aikana voi olla syynä vääriin negatiivisiin tuloksiin. Virheelliset tulokset antiglobuliinitestejä suoritettaessa voivat johtua myös siitä, että antiglobuliinireagenssissa on sekoitus antikomplementaarisia vasta-aineita, erityisesti C3d-, C3c-, C4c- ja C4d-komplementtikomponentteja, jotka adsorboituvat testien erytrosyyttien pinnalle inkubaation aikana ja muodostavat positiivisen tuloksen ilmestyminen.

Nämä puutteet voidaan helposti poistaa pesemällä testinäytteet perusteellisesti ja kontrolloimalla reaktio-olosuhteita.

Viime vuosikymmenen aikana alhaista ionivahvuutta isotonista suolaliuosta (LISS) on käytetty vähentämään epäsuoran Coombs-testin aikaa ja herkkyyttä.

Antiglobuliinitestien kiistaton etu useiden kirjoittajien mukaan on niiden korkea herkkyys, joka ylittää merkittävästi ei-agglutinoituvien vasta-aineiden havaitsemiseen käytettävien vaihtoehtoisten tutkimusmenetelmien resoluution.

Vertailimme veriseerumien tutkimismenetelmien erottelukykyä epätäydellisten vasta-aineiden esiintymisen suhteen käyttämällä polyglusiinia, gelatiinia ja antiglobuliiniseerumia. Tutkimuksen aikana epätäydellisten anti-D-vasta-aineiden tiittereitä seurattiin 140 isoimmuuniluovuttajien veriseeruminäytteestä gelatiini-, polyglusiini- ja epäsuorilla antiglobuliinitesteillä. Näiden menetelmien selvitys suoritettiin yleisesti hyväksyttyjen menetelmien mukaisesti.

Todettiin, että menetelmät punasolujen herkistymisen havaitsemiseksi anti-D-vasta-aineilla ovat erottelukyvyn suhteen järjestetty seuraavasti: herkin on epäsuora Coombs-testi, sitten gelatiinitesti ja vähiten informatiivinen on polyglusiinitesti. Tässä koesarjassa saadut tulokset vastaavat täysin kirjallisuustietoja, minkä perusteella voimme päätellä, että Coombsin testien herkkyys on riittävän korkea, mikä mahdollistaa punasolujen vastaisten vasta-aineiden havaitsemisen suurella varmuudella. elimistössä, jotka eivät aiheuta punasolujen agglutinaatiota.

Coombsin testeissä on kuitenkin tapauksia, joissa epätäydellisiä vasta-aineita ei havaita, vaikka sairauden kliininen kuva tai aikaisempi immunisaatio viittaa niiden mahdolliseen esiintymiseen. Tällaisissa tapauksissa voidaan olettaa, että vasta-aineiden määrä ei riitä saostamaan niitä antiglobuliiniseerumin vasta-aineilla.

Tämän johtopäätöksen vahvisti oma kokeemme, jossa solujen analyyttisen mikroelektroforeesin menetelmällä todettiin anti-D-vasta-aineiden läsnäolo testipunasoluissa, joita ei havaittu epäsuorassa Coombs-testissä. Tässä koesarjassa antiglobuliiniseerumia lisättiin punasoluihin, joita oli aiemmin inkuboitu immunisoitujen luovuttajien verestä saadun seerumin kanssa, vasta-aineen synnyn aikana liikkeellä ollessa, ts. aikana, jolloin tunnetuilla menetelmillä, mukaan lukien Coombsin testi, ei havaittu niistä vasta-aineita.

Tehdyissä tutkimuksissa todiste epätäydellisten vasta-aineiden esiintymisestä erytrosyyttien pinnalla oli tilastollisesti merkitsevä muutos herkistyneiden punasolujen elektroforeettisessa liikkuvuudessa antiglobuliiniseerumin lisäämisen jälkeen. On huomattava, että myöhemmin anti-D-vasta-aineet havaittiin kaikkien immunisoitujen luovuttajien veriseerumissa epäsuorassa Coombs-testissä.

Gillerand et ai. osoitti myös, että antiglobuliinitesteille on ominaista tietty herkkyyskynnys: positiivinen tulos havaitaan vain, kun vähintään 500 Ig G -molekyyliä on kiinnittynyt yhden punasolun pinnalle.

Lisäksi kirjallisuudessa on näyttöä siitä, että mahdollinen negatiivinen Coombs-tulos voi johtua punasoluja herkistäviä vasta-aineiden alhaisesta affiniteetista, minkä seurauksena ne eluoituvat helposti punasolujen pinnalta pesuprosessin aikana. .

Edellä olevan perusteella voidaan päätellä, että joissakin tapauksissa Coombs-testin negatiivinen tulos ei vielä ole todiste punasolujen pinnalle kiinnittyneiden vasta-aineiden puuttumisesta.

Tiedetään, että Coombsin reaktiot ovat erittäin spesifisiä ja mahdollistavat useimpien epätäydellisten vasta-aineiden havaitsemisen. Kuten jotkut kokeelliset tiedot osoittavat, antiglobuliinitestit voivat kuitenkin olla positiivisia ei-immunologisissa olosuhteissa. E. Muirhead et ai. toisena päivänä fenyylihydratsiinin annon jälkeen koirilla havaittiin positiivinen Coombs-testi. Tällainen positiivisen reaktion nopea ilmaantuminen todistaa sen immunologista luonnetta vastaan ​​ja pikemminkin liittyy proteiinin epäspesifiseen adsorptioon erytrosyyttien pinnalle.

M. Williams et ai. havaitsi, että klavulaanihappo voi myös aiheuttaa positiivisen reaktion, joka tekijöiden mukaan liittyy plasman proteiinien epäspesifiseen adsorptioon erytrosyyttien pinnalla. Samanlainen vaikutus havaittiin hoidettaessa kefalosporiiniantibiootteja.

Yllä olevien tutkimusten kirjoittajat korostavat Coombsin testien positiivisten tulosten ei-immunologista luonnetta ja väittävät, että nämä aineet voivat aiheuttaa punasolujen kalvojen muutoksia, minkä seurauksena punasolut voivat adsorboida proteiineja (erityisesti albumiini), joita on normaalisti veriplasmassa ja joilla ei ole vasta-aineominaisuuksia. Lisäksi on mahdollista, että solun pintaan adsorboitunut ksenobiootti toimii linkkinä solukalvon ja plasman proteiinien välillä.

Antiglobuliinitestien tulosten oikeaa tulkintaa varten on otettava huomioon myös perifeerisen veren nuorten ja kypsien punasolujen välinen määrällinen suhde. Havaittiin, että kehosta eristetyt retikulosyytit tehostetun erytroniregeneraation aikana voivat agglutinoitua antiglobuliiniseerumilla.

Positiivinen suora antiglobuliinitestitulos Sitä käytetään myös erilaisissa patologisissa tiloissa, joihin liittyy immuunijärjestelmän häiriöitä, tulehdusprosesseja, jotka johtavat erispesifisten vasta-aineiden epäspesifiseen adsorptioon erytrosyyttikalvoille. Tämä viittaa siihen, että Ig G -molekyylit eivät ole vuorovaikutuksessa spesifisten erytrosyyttiantigeenien kanssa, vaan ne ovat vain kiinnittyneitä tutkittavien solujen pinnalle.

On pidettävä mielessä, että Coombsin testiä määritettäessä sairauksissa, joille on ominaista dysproteinemian kehittyminen tai paraproteiinien esiintyminen, positiivinen tulos johtuu erytrosyyttien pinnalla olevista proteiineista, joilla ei ole punasolujen ominaisuuksia. vasta-aineita, mikä viittaa myös antiglobuliinitestien riittämättömään spesifisyyteen niiden avulla havaitun proteiinin luonteen suhteen.

Siten, kuten useat tutkimukset osoittavat, suorien ja epäsuorien antiglobuliinitestien positiiviset tulokset eivät ole ehdoton todiste vasta-aineiden läsnäolosta, koska positiivisia reaktioita voidaan havaita myös erilaisissa patologisissa tiloissa, jotka eivät liity kehon isosensibilisaatioon tai autosensibilisaatioon. Siksi vain useiden immunoserologisten menetelmien tulosten vertailu sairauden kliiniseen kuvaan antaa meille mahdollisuuden arvioida täysin kehittyvää patologista prosessia.

Positiivinen epäsuora antiglobuliinitesti negatiivisen suoran testin kanssa osoittaa yleensä, että testiseerumissa on vapaita allovasta-aineita, jotka liittyvät aikaisempiin verensiirtoihin tai raskauksiin.

Coombsin testi on usein positiivinen paroksysmaalisen yöllisen hemoglobinurian pahenemisen aikana; positiivinen Coombsin testi anti-C3:lla ja anti-C3dg:llä on kylmäagglutiniinitaudin merkki.

Tapauksissa, joissa on suuri riski saada vastasyntyneen hemolyyttinen sairaus, suorien ja epäsuorien antiglobuliinitestien tulokset ovat erittäin tärkeitä diagnoosin tekemisessä (useimmiten raskauden aikana) ja tarvittaessa ulkonäön ja muutoksen dynaamisessa seurannassa. vasta-ainetiitterissä. Useimmiten vastasyntyneen hemolyyttinen sairaus liittyy äidin ja sikiön yhteensopimattomuuteen D-antigeenin, harvemmin AB0-järjestelmän antigeenien ja vielä harvemmin muiden antigeenien (C, c, K jne.) suhteen. Tuloksena olevat vasta-aineet la, jotka ovat pääsääntöisesti Ig G -luokan epätäydellisiä vasta-aineita, havaitaan selvästi epäsuorassa antiglobuliinitestissä. Tässä taudissa oikein määritetty tiitteri ja havaittujen vasta-aineiden spesifisyys ovat erittäin tärkeitä, koska raskaana olevan naisen veressä olevien punasolujen vasta-aineiden tason ja hemolyyttisen sairauden vaikeusasteen mahdollisen ennusteen välillä on tietty korrelaatio.

Epäsuora Coombs-testi on myös välttämätön kliinisessä käytännössä turvallisen verensiirtohoidon varmistamiseksi. Sen toteuttaminen on pakollinen osa luovuttajien ja erilaisten vastaanottajaryhmien immunohematologisia tutkimuksia sekä kaikkien hoitolaitosten potilaiden rutiinitutkimuksia, jotka saattavat tarvita veren ja sen komponenttien siirtoa.

Epäsuoraa antiglobuliinitestiä käytetään seuraavissa tapauksissa:

Rh-kuuluvuuden (antigeeni D) tarkempaa määrittämistä varten sumeilla tuloksilla Rh-tekijän määrittämisestä muilla menetelmillä (polyglusiini, gelatiini jne.);

Heikkojen erytrosyyttiantigeenien (Kell-, Duffy-, Kidd-, Lewis- jne. järjestelmät) ja vasta-aineiden havaitsemiseen näille antigeeneille;

Alloimmuunisten punasolujen vasta-aineiden havaitsemiseen ja tunnistamiseen, mukaan lukien vasta-aineet, jotka aiheuttavat hemolyyttisiä verensiirron jälkeisiä reaktioita;

Määrittää AB0-järjestelmän immuunivasta-aineiden esiintymisen verensiirron hemolyyttisissä komplikaatioissa;

Yhteensopivuustestiksi siirretyn veren ja sen komponenttien yksilölliseen valintaan.

Näin ollen Coombsin testi on tärkeä diagnostinen testi, jota käytetään lääketieteen eri aloilla (hematologia, synnytys, reumatologia, transfusiologia, kliininen ja laboratoriodiagnostiikka jne.). Coombsin testin ominaisuuksien tuntemus auttaa lisäämään tulosten luotettavuutta ja myötävaikuttaa laboratoriotietojen oikeaan tulkintaan.

Kirjallisuus

1. Vasta-aineet. Menetelmät / toim. D. Cathy. - M.: Mir, 1991.

2. Bayramalibeyli I.E., Rahimov A.A., Gadzhiev A.B.. // Anemian verensiirtohoito: oppikirja. opas lääkäreille. - M .: Prakt. lääketiede, 2005. - S. 105-106.

3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfusiologia. - 2006. - Nro 2. - S. 39-62.

4. Donskov S.I.// Rhesusjärjestelmän veriryhmät: teoria ja käytäntö. - M.: VINITI RAN, 2005. - S. 180-186, 195.

5.Immunoserologia (normatiiviset asiakirjat) / comp. A.G. Bashlay, S.I. Donskov. - M.: VINITI RAN, 1998.

6.Verijärjestelmän tutkimus kliinisessä käytännössä / toim. G.I. Kozintsa, V.A. Makarov. - M.: Triada-X, 1997.

7. Levin V.I. Erytrodiereesin ja erytropoieesin mekanismista akuutin posthemorragisen anemian aikana: Ph.D. dis. …karkkia. hunaja. Tieteet. - Minsk, 1968.

8. Rahimov A.A., Bairamalibeyli I.E.. // Anemian diagnosoinnin, ehkäisyn ja hoidon perusteet. - M .: Venäjän federaation terveysministeriön GOU VUNMT:t, 2002. - S. 204-209.

9. Chumakova E.D.. // Hematologian ja transfusiologian todelliset ongelmat: Valko-Venäjän tasavallan hematologien ja transfusiologien VI kongressin materiaalit, Minsk, 24.-25.5.2007 / toim. A.I. Svirnovsky, M.P. Potapnev. - Minsk: Republikaanien tieteellinen ja käytännöllinen hematologian ja transfusiologian keskus, 2007. - S. 50.

10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lansetti. - 1945. - Voi. 2. - s. 15.

11. Freedman J. // J. Clin. Pathol. - 1979. - Voi. 32. - P. 1014-1018.

12. Holburn A.M. laadunvalvonta. Methods in Hematology / toim. I. Cavill. - Edinburg: Churchill Livingstone, 1982. - Voi. 4. - s. 34-50.

13. Khan S.// CMAJ. - 2006. - Voi. 175, nro 8 - s. 919.

14. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Voi. 63 (liite 7). - s. 719-721.

15. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Voi. 63 (liite 7). - s. 716-718.

16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// Uusi Eng. J. Med. -1976. — Voi. 277. - s. 123-125.

17. Muirhead E.E., GrovesM., Brian S. // J. Lab. Clin. Med. -1954. — Voi. 44. - P. 902-903.

18. Rosse W.F.//Hosp. Prac. - 1995. - N 105.

19. Voak D., Downie D., Mooreb. et ai. //Biotests Bull. - 1986. - Voi. 1. - s. 41-52.

20. Voak D., Haigh T., Downie D. et ai. Solunpesukoneet antiglobuliinitesteihin. Toistotestaus – uusi menetelmä, joka osoittaa yhden laajasti käytetyn koneen – Sorvall CW1-AF2:n – tehottomuuden: raportti DHSS Technical Branchille, helmikuu 1991.

21. Williams M.E., Thomas D., Harman C.P. et ai. //Antimikrobiset aineet ja kemoterapia. -1985. - s. 125-127.

22. Zarandona J.M., Yazer M.H. // CMAJ. - 2006. - Voi. 174, nro 3. - P. 305-307.

Lääketieteen uutisia. - 2008. - Nro 3. - S. 33-36.

Huomio! Artikkeli on osoitettu erikoislääkäreille. Tämän artikkelin tai sen osien uudelleentulostaminen Internetissä ilman hyperlinkkiä alkuperäiseen lähteeseen katsotaan tekijänoikeusrikkomukseksi.

Hemolyyttinen anemia Omia punasoluja vastaan ​​suunnattujen autoimmuunielimien aiheuttamia sairauksia ei ole tarkasti selvitetty. Kuitenkin oletetaan, että jotkin tekijät (esim. virus, epänormaali proteiini) muuttavat punasoluja siten, että elimistö näkee ne jo "vieraana" ja tulee niihin hallintaan vasta-aineiden avulla. Toisen teorian mukaan punasoluja vastaan ​​suunnattuja vasta-aineita syntyy lähes sattumalta epänormaalien plasmaproteiinikappaleiden muodostumisen aikana tietyissä sairauksissa. Tällaiset proteiinikappaleet, aivan kuten "vahingossa", voivat antaa reaktioita, joita voidaan käyttää diagnoosin tekemiseen (esimerkiksi viruskeuhkokuumeen tiedetään antavan positiivisen Wassermann-reaktion, positiivisen Paul-Bunnel-reaktion ja kylmän agglutinaatioreaktion).

On kaksi tärkeimmät autovasta-ainetyypit hemolyyttisellä anemialla, nimittäin: lämpimät vasta-aineet (reagoivat 37 °:ssa) ja kylmät vasta-aineet (jonkien reaktiivisuus lisääntyy lämpötilan lähestyessä nollaa). Lämpimät vasta-aineet ovat yleisempiä kuin kylmät. Dacie havaitsi, että lämpimät hemolysiinit ovat kaksi kertaa yleisempiä kuin kylmät hemolysiinit. Hemolysiinit ja agglutiniinit eivät ole pohjimmiltaan erilaisia ​​vasta-aineita: ne eroavat vain toimintansa luonteesta. Agglutiniinit agglutinoivat punasoluja, ja hemolysiinit tekevät niistä herkempiä monimutkaiselle hemolyysiprosessille (täydennys!). Punasoluihin kiinnittyneet autovasta-aineet muodostavat erytrosyytti-globiinikompleksin. Tämä kompleksi havaitaan käyttämällä Coombsin antiglobiinitestiä.

Coombsin testi suoritetaan Coombsin seerumilla, jonka valmistusta varten kani herkistetään ihmisen seerumilla, jota vastaan ​​muodostuu vasta-aineita kanin seerumissa. Tällaisen herkistetyn seerumin vaikutuksen alaisena ihmisen punasoluihin tapahtuu niiden agglutinaatiota, jos erytrosyyttireseptorit ovat miehittäneet estävät vasta-aineet. Koska nämä estävät vasta-aineet ovat peräisin ihmisen seerumista, ne agglutinoituvat kaniinin seerumin kanssa, joka on herkistynyt ihmisen plasmalle ja joka sisältää saostumia. Tätä reaktiota kutsutaan Coombsin testiksi; autoimmuunielimiin perustuvalle hemolyyttiselle anemialle (Lo tit) se on lähes spesifinen (katso lisätietoja Maierista).

Yleensä hemolyyttisellä anemialla Ensisijaisen punasolujen rikkoutumisen yhteydessä Coombs-testi on negatiivinen ja hankituilla positiivinen. Tästä säännöstä on kuitenkin joitain poikkeuksia: väärä positiivinen Coombsin testi löydettiin perustuslaillisen hemolyyttisen anemian kriisien aikana ja vähemmässä määrin - myös joskus pernan poiston jälkeen, reumaattisen polyartriitin, sarkoidoosin, toistuvien verensiirtojen ja systeemisen lupuksen jälkeen erythematosus. Luonnollisesti hankitulla hemolyyttisellä anemialla ilman autoimmuunikappaleiden muodostumista se on negatiivinen.

Hemolyyttinen anemia autoimmuunielimistön aiheuttamat voidaan jakaa seuraaviin:
a) akuutit, subakuutit ja krooniset muodot sekä edelleen
b) idiopaattinen, jonka etiologia on tuntematon ja c) oireenmukainen [viruskeuhkokuume (vain kylmäagglutiniinit), krooninen lymfaattinen leukemia, retikulosarkooma, lymfosarkooma, systeeminen lupus erythematosus (pääasiassa lämpimät, harvemmin kylmät agglutiniinit), kuppa (kylmäagglutiniinit) (M) s työntekijät)).
c) oireenmukainen [viruskeuhkokuume (vain kylmäagglutiniinit), krooninen lymfaattinen leukemia, retikulosarkooma, lymfosarkooma, systeeminen lupus erythematosus (pääasiassa lämpimät, harvemmin kylmät agglutiniinit), syfilis (kylmäagglutiniinit), munasarjakasvaimet (Miescher et al.)).

Hemolyyttisen anemian klinikka autoimmuunielimien vaikutuksen alaisena kehittyvät ovat hyvin monimuotoisia, ja siksi niiden yleistä kliinistä kuvaa on tuskin mahdollista piirtää. Kaiken ikäiset ja molempien sukupuolten ihmiset kärsivät tasaisesti. Silti idiopaattiset muodot näyttävät olevan yleisempiä naisilla (Sacks and Workman).

Idiopaattisen muodon kliininen kuva vaihtelee taudin vakavuudesta riippuen. Kroonisissa tapauksissa puhkeaminen on asteittaista, sairaus kestää useita vuosia toistuvin pahenemisvaihein. Anemian vakavuus vaihtelee hemolyysin asteesta riippuen. Hemoglobiinin pudotuksia havaitaan jopa 10 %, muissa tapauksissa hemoglobiini pysyy pitkään 50-60 %. Retikulosytoosin voimakkuus ja ihon ja seerumin ikterinen värjäys vastaavat hemolyysin astetta. Bilirubiinia löytyy hyvin harvoin virtsasta, koska se ei kulje munuaisten läpi, mutta hemoglobinuriaa havaitaan. Perna on kroonisissa tapauksissa usein laajentunut ja voi saavuttaa jopa erittäin merkittäviä kokoja, kun taas muissa tapauksissa se on edelleen käsin kosketeltava. Maksa on harvoin laajentunut.

Useimmissa tapauksissa veressä makrosytoosia havaitaan, akuuteissa vaiheissa on myös paljon mikrosyyttejä, normoblastoosia ja polykromiasia puuttuu harvoin, leukosytoosi voi olla 30 000, verihiutaleet ovat normaaleja. Joissakin tapauksissa on kuitenkin huomattavaa trombosytopeniaa. Evans selittää nämä tapaukset verihiutaleiden vasta-aineiden samanaikaisella läsnäololla, jolloin esiintyy sekä hemolyyttistä anemiaa että trombosytopeniaa, joka johtuu autoimmuunielimien toiminnasta - Evansin oireyhtymä. Osmoottinen vastustuskyky on hieman heikentynyt, mutta ei samassa määrin eikä yhtä pysyvästi kuin perustuslaillisessa pallomaisessa soluanemiassa. Lämmönkestävyystesti (Hegglin-Maier) 6 tunnin jälkeen voi myös antaa lievän hemolyysin (oma havainto), mutta vähäisemmässä määrin kuin Marchiafavan anemiassa. Hemosideriinia löytyy myös virtsasta (oma havainto).