Huumausaineiden, psykotrooppisten aineiden ja muiden myrkytystä aiheuttavien aineiden vähimmäispitoisuus biologisessa esineessä. Antibiootin pienin estävä pitoisuus (MIC) Pienin estävä pitoisuus

Analyysi bakteerien kyvystä lisääntyä ja kasvaa kasvualustalla, joka sisältää laskevan lääkeaineen pitoisuuden, mahdollistaa antibiootin (MIC) vähimmäisinhiboivan pitoisuuden määrittämisen, joka estää bakteerien roolia in vitro (taulukko 3(vet7) )). Tämän annoksen arvo määrittää sellaisen lääkeaineen valinnan, joka pystyy saavuttamaan samanlaiset pitoisuudet in vivo, ja se on perusta organismin suhteellisen herkkyyden vertailulle muihin lääkkeisiin nähden. Uskotaan, että altistuksen tehokkuuden varmistamiseksi lääkkeen pitoisuuden infektiokohdassa tulee olla vähintään yhtä suuri kuin antibiootin pienimmän estävän pitoisuuden arvo. Toisaalta plasman lääkepitoisuuden on yleensä oltava korkeampi riittävän kudospitoisuuden varmistamiseksi. Mikrobilääkeannosten perusteeton korottaminen tietyn tyyppisten bakteerien kasvua in vitro estävän antibiootin vähimmäisannoksen saavuttamiseksi voi kuitenkin johtaa lääkkeen kertymiseen myrkyllisinä annoksina vastaanottajan elimistöön.

Tietyn lääkeaineen "kriittinen MIC" on korkein kohtuullisen turvallinen lääkepitoisuus, joka voidaan saavuttaa kliinisesti hyväksyttävällä annoksella ja lääkkeen antoreitillä (taulukko 3(vet7)). MIC riippuu tietystä bakteeriviljelmän tyypistä ja tietystä lääketyypistä. Samanaikaisesti kriittinen MIC on spesifinen tietylle vastaanottajalle ja tietylle lääkeaineelle. Siten kriittinen MIC on sama mille tahansa organismille (taulukko 3(vet7)). Tietyn organismin kriittinen pitoisuus voi vaihdella eläinlajin (johtuen lääkkeen herkkyys- tai jakautumismallien eroista) ja tietystä laboratoriosta riippuen. Viljelymenetelmiä ja antibioottiherkkyystietoja tarjoavaan laboratorioon tulee ottaa yhteyttä tutkimuksissa käytettävien kriittisten arvojen saamiseksi.

In vitro -laimennustietojen perusteella bakteeri luokitellaan herkäksi (S) tietylle lääkeaineelle, jos MIC on merkittävästi alle tämän indikaattorin kriittisen arvon. Keskimääräisen (MS) tai keskitason (IS) herkkyysarvon omaavien patogeenisten mikro-organismien kasvu estyy lääkeainepitoisuuksilla, jotka lähestyvät kriittistä MIC-arvoa. Tällaiset bakteerit voivat aiheuttaa negatiivisia reaktioita potilaan kehossa tai niillä ei ole vaikutusta häneen. Resistenttien (R) bakteerien MIC ylittää vähimmäisannoksen kriittisen arvon. Tällaisen tiettyyn mikro-organismiin vaikuttavan lääkkeen pitoisuuden tehokasta arvoa potilaan kehossa ei todennäköisesti saavuteta. Tällaisissa tapauksissa lääkkeen kertymisen riski toksisilla annoksilla voi myös olla suurempi kuin hoidon mahdollinen hyöty. Bakteerien kasvua estävien uuden sukupolven antibioottien minimiannoksen kriittistä arvoa on joissain tapauksissa vaikeampi määrittää johtuen siirtymisestä ammattimaiseen joustaviin annosaluemerkintöihin.

Lääkeaineet on valittava siten, että aineen kertymisen myrkyllisinä annoksina estävän hoito-ohjelman mukaisesti käytettäessä on mahdollista saavuttaa lääkeaineen plasman maksimipitoisuus, joka ylittää merkittävästi MIC:n. Monet bakteerit ovat herkkiä tietyn lääkkeen vaikutuksille pitoisuuksina, jotka ovat selvästi kriittisen vähimmäisannoksen alapuolella. Kriittisen arvon ja sisäisen MIC-arvon välistä eroa voidaan käyttää vertaamaan eri mikrobilääkkeiden suhteellista tehokkuutta. Esimerkiksi amikasiinin kriittinen arvo on 32 µg/ml, joten E. coli, jonka MIC-arvo on 2 µg/ml, on suhteellisesti herkempi amikasiinille kuin E. coli, jonka MIC-arvo on 16 µg/ml. Molempia lajeja tulisi pitää herkkinä (vaikka toisen lajin voidaan katsoa olevan herkkyys keskimäärin), ensimmäisen lajin bakteerien kasvu näyttää kuitenkin estyneen enemmän. Jos saman E. coli -lajin MIC-arvo on 2 µg/ml amoksisilliinille, sen MIC-arvo on 16 µg/ml (kriittinen arvo 32 µg/ml), näyttää siltä, ​​että tämän mikro-organismin kasvu se voidaan estää helpommin käyttämällä amikasiinia amoksisilliinin sijaan, koska amikasiinin MIC-arvo on kauempana kriittisestä MIC-arvostaan ​​kuin amoksisilliinin MIC-arvo.

Vaikka erot tietyn bakteerilajin ja tietyn lääkkeen (16 tai 32) MIC-arvojen välillä saattavat tuntua melko suurilta (etenkin plasman lääkkeen katkaisun yhteydessä), tämä ero vastaa vain yhtä liuosta putkessa. . Tämä on esimerkki herkkyystietojen yliarvioinnin vaarasta. Jos tietyn organismin MIC-arvo on tarpeeksi lähellä kriittistä arvoa, niin mahdollisten tulkintaerojen vuoksi tälle mikro-organismille voidaan antaa "S" tai "MS" herkkyysaste yhdessä laboratoriossa ja "R" toisessa. Tällaiset mahdolliset arviointierot ovat yksi syy siihen, miksi tulisi välttää sellaisten lääkkeiden käyttöä, joille tietyllä organismilla on "MS"-herkkyys (tai jos MIC-arvo on lähellä kriittistä), ellei lääkkeen pitoisuutta potilaskohdassa. infektio voi huomattavasti ylittää in vitro -analyysillä määritetyn MIC-arvon. Hyvä esimerkki olisi munuaisten kautta erittyvien lääkkeiden käyttö virtsatietulehduksen hoitoon tai sappiin erittyvien lääkkeiden käyttö sappitieinfektion hoitoon. Leukosyyttien (fluorokinolonit, makrolidit) kerääntyminen voi myös johtaa lääkeainepitoisuuksiin kudoksissa, jotka ovat selvästi MIC:n (tai kriittisen MIC:n) yläpuolella alhaisemmasta plasmapitoisuudesta huolimatta.

Bakteerien MIC-arvo voi muuttua myöhempien samojen bakteerilajien aiheuttamien infektioiden aikana, ja se voi muuttua myös itse infektioprosessin aikana. MIC-arvon nousu voi yksinkertaisesti heijastaa erilaista lähestymistapaa analyysin tulosten arviointiin (varsinkin jos erot havaitaan vain laimennettuna in vitro), mutta sitä voidaan pitää myös seurauksena resistenssin kehittymisestä tietylle lääkeaineelle. Tällaisissa tapauksissa mikrobihoidon kulkua voidaan muuttaa käyttämällä lisälääkettä tai vaihtamalla uuteen, tehokkaampaan lääkkeeseen. Polymikrobi-infektioissa tietyn lääkkeen MIC-arvo on todennäköisesti erilainen kullekin infektoivalle bakteerille. Uskotaan, että on helpompi estää sellaisten bakteerien kasvu, joilla on alhainen MIC-arvo tietylle lääkeaineelle kuin mikro-organismin kasvu, jolla on korkeampi MIC-arvo samalle lääkeaineelle.

Venäjän federaation terveysministeriön määräyksellä (luonnos) hyväksytyn myrkytyksen (alkoholi-, huume- tai muu myrkyllinen) lääkärintarkastuksen suorittamista koskevan menettelyn liitteen taulukko 2 "Sisällön kynnysarvot huumausaineiden, psykotrooppisten aineiden, muiden kemikaalien ja niiden aineenvaihduntatuotteiden määrä vahvistetuilla menetelmillä.

Huomautus: kynnystaso- tämä on alustavan tai vahvistavan analyysin menetelmillä määritetty aineen (sen metaboliitin) vähimmäispitoisuus biologisessa esineessä, jonka havaitsemisen jälkeen tutkimuksen tulosta pidetään positiivisena.

Itse asiassa samanlainen taulukko nimeltä " Virtsan analyysin vahvistavien määritysten kynnystasot"annetaan IM Sechenovin nimen ensimmäisen Moskovan valtion lääketieteellisen yliopiston analyyttisen ja oikeuslääketieteellisen toksikologian laitoksen kemiallis-toksikologisessa keskuslaboratoriossa (IM Sechenovin mukaan nimetty TsKhTL GOU VPO ensimmäinen Moskovan valtion lääketieteellinen yliopisto) Venäjän federaation terveysministeriön 30. elokuuta 2011 nro 179-25 / 12I, jossa kuitenkin muun muassa fenobarbitaalin (1 "000 ng / ml), muiden barbituraattien ryhmään kuuluvien aineiden pitoisuudet (100 ng/ml) ja kotiniini (100 ng/ml) on merkitty). Tämän mukaan TsKhTL GOU VPO:n ensimmäinen Moskovan osavaltion lääketieteellinen yliopisto. IM Sechenov, Venäjän federaation terveys- ja sosiaalisen kehityksen ministeriön 27. tammikuuta 2006 antaman määräyksen nro 40 "Kemiallisten ja toksikologisten tutkimusten järjestämisestä ihmisessä esiintymisen analyyttisessä diagnosoinnissa" 2 kohdan mukaisesti alkoholin, huumausaineiden, psykotrooppisten ja muiden myrkyllisten aineiden elin", kehitti ja hyväksyi vaatimukset kemiallis-toksikologisten tutkimusten suorittamiseksi huumausaineiden, psykotrooppisten ja muiden myrkyllisten aineiden esiintymisen analyyttisessä diagnoosissa ihmiskehossa.

Erityisesti tiedotuskirjeen kohdan 12 mukaan suunesteen (syljen) tarkastusta ei voida hyväksyä suoritettaessa ajoneuvonkuljettajien lääkärintarkastusta, testausopiskelijoille, suoritettaessa kemiallisia ja toksikologisia tutkimuksia kansalaisten pyynnöstä ja muissa laissa säädetyissä tapauksissa. , koska sen avulla ei voida luotettavasti todeta huumausaineiden, psykotrooppisten ja muiden myrkyllisten aineiden läsnäoloa ihmiskehossa. Valvottavat aineet voidaan havaita suunesteestä (syljestä) ajan kuluessa, joka on enintään muutama tunti nauttimishetkestä.

Vaatimukset teknisille laitteille, joita käytetään huumausaineiden, psykotrooppisten ja muiden myrkyllisten aineiden (niiden aineenvaihduntatuotteiden) havaitsemiseen virtsanäytteistä alustavien kemiallisten ja toksikologisten tutkimusten aikana (Ohjeen liite 1: Säännöt kehon läsnäoloa koskevien kemiallisten ja toksikologisten tutkimusten suorittamisesta opiskelijoiden yleissivistysjärjestöissä ja ammatillisissa koulutusorganisaatioissa sekä korkeakoulujen koulutusorganisaatioissa huumausaineiden ja huumausaineiden psykotrooppisten aineiden, psykotrooppisten ja muiden myrkyllisten aineiden (niiden aineenvaihduntatuotteiden) laittoman käytön havaitsemiseksi ajoissa / Kehittäjä: Yhdistys Laboratoriopalvelun "Federation Laboratory Medicine" asiantuntijoiden ja organisaatioiden toimittama Venäjän terveysministeriön analyyttisen ja oikeuslääketieteellisen toksikologian pääasiantuntija, kemian tohtori, professori B. N. Izotov ja kliinisen lääketieteen pääasiallinen freelance-asiantuntija Venäjän terveysministeriön laboratoriodiagnostiikasta, lääketieteen tohtori, professori A. G. Kochetov // Moskova, 2015)

Vaatimukset teknisille keinoille, joita käytetään huumausaineiden, psykotrooppisten ja muiden myrkyllisten aineiden (niiden aineenvaihduntatuotteiden) havaitsemiseen virtsanäytteistä suoritettaessa vahvistavia kemiallis-toksikologisia tutkimuksia (edellä olevan lähteen liite 2)

Samaan aikaan puolustaessaan Venäjän federaation hallintorikoslain 12.8 ja 12.27 pykälän, 3 osan mukaisia ​​hallinnollisia rikkomuksia sekä rikosoikeudellista vastuuta rattijuopumuksesta (lain 264 ja 264.1 artikla) Venäjän federaation rikoslaki), ei pidä unohtaa, että tämä hallinnollinen vastuu syntyy huumausaineiden tai psykotrooppisten aineiden esiintymisestä ihmiskehossa riippumatta niiden pitoisuudesta ihmiskehossa, veressä ja virtsassa.

Edellä esitetyn perusteella huumeiden tunnistaminen huumetutkimusten, kemiallisten ja toksikologisten tutkimusten sekä oikeuslääketieteellisten kemiallisten tutkimusten puitteissa huumausaineet, psykotrooppiset ja myrkylliset aineet sekä päihtymystä aiheuttavat aineet, jopa niin sanotusti "käytetyn menetelmän havaitsemisrajan" tasolla ovat perusta ajoneuvon kuljettajan saatamiselle hallinnolliseen tai rikosoikeudelliseen vastuuseen. Venäjän federaation hallintorikoslain ja/tai RF-rikoslain asiaankuuluvat artiklat.

Tiedoksi - " "

Lääkkeen antimikrobisen vaikutuksen kriteerit ovat pienin estävä pitoisuus(MIC) ja minimaalinen bakterisidinen pitoisuus(MBK). MIC on pienin antibioottien pitoisuus, joka estää täysin in vitro näkyvissä bakteerien kasvu. Se ilmoitetaan mg/l tai µg/ml. MBC on pienin antibiootin pitoisuus, joka aiheuttaa bakteereja tappavan vaikutuksen. Sen määrittämiseksi on tarpeen suorittaa kylvö koeputkista, joissa visuaalisesti ei ole kasvua, tiheälle ravinneagarille, joka ei sisällä antibioottia. Tällä indikaattorilla on suuri kliininen merkitys. Sarjalaimennosmenetelmän perusteella on luotu mikromenetelmiä, joissa käytetään pienempää määrää ravintoalustaa. Tällaista tutkimusta varten valmistetaan tällä hetkellä lukuisia kaupallisia sarjoja, jotka koostuvat kuivatuista, stabiloiduista antibioottilaimennoksista ravintoalustaan, jotka laimennetaan testimikrobisuspensiolla. Näitä sarjoja voidaan säilyttää normaaleissa olosuhteissa, jolloin laboratoriossa ei tarvitse valmistaa laimennoksia elatusaineista ja antibiooteista. Toinen mikrolaimennustestien etu on, että ne sisältyvät automatisoituun järjestelmään.

Saatujen tietojen (kasvun estoalueen halkaisija tai MIC-arvo) perusteella mikro-organismit jaetaan herkkiin, kohtalaisen vastustuskykyisiin ja resistentteihin. Näiden luokkien erottamiseksi käytetään niin sanottuja antibioottien rajapitoisuuksia, jotka eivät ole vakioarvoja. Niitä tarkistetaan, kun mikro-organismipopulaation herkkyys muuttuu. Erikoiskomiteoiden jäseninä toimivat johtavat asiantuntijat (kemoterapeutit, mikrobiologit) ovat mukana tulkintakriteerien kehittämisessä ja tarkistamisessa. Yksi näistä on kliinisten laboratoriostandardien kansallinen komitea ( N kansallinen C ommitteefor C kliininen L aboratorio S tandards - NCCLS), järjestetään Yhdysvalloissa. Tällä hetkellä NCCLS-standardeja käytetään kansainvälisinä standardeina arvioitaessa bakteerien herkkyyden määritystuloksia monikeskus-mikrobiologisissa ja kliinisissä tutkimuksissa.

Bakteerien herkkyyden määrittäminen antibiooteille. Mikro-organismien antibioottien herkkyyden kriteerinä on antibiootin pienin estävä pitoisuus (MIC), joka hidastaa patogeenin kasvua normaaleissa koeolosuhteissa.

Lääkeresistenssin määrittämiseksi käytetään potilaan kehosta eristettyä patogeenin päivittäistä puhdasviljelmää ja sen inokulointiin tavanomaista ravintoalustaa (AGV tai Muller-Hinton agar).

Mikro-organismien herkkyys antibiooteille määritetään levydiffuusiomenetelmällä tai menetelmällä, jossa antibiootti laimennetaan sarjassa nestemäiseen tai kiinteään väliaineeseen.

Levyn diffuusiomenetelmä. Antibioottien herkkyyden määrittäminen paperikiekkomenetelmällä perustuu antibiootin diffuusioon ravintoalustaan. Antibioottien pitoisuus kiekoissa valitaan siten, että standarditestimikro-organismien kasvun estoalueiden halkaisijat vastaavat kansainvälisiä standardeja. Tämä pitoisuus vastaa mikro-organismien standardikantojen keskimääräistä terapeuttista annosta.

Valmistettu mikro-organismisuspensio inokuloidaan petrimaljoissa erityisen alustan (AGV tai Mueller-Hinton agar) pinnalle. Sitten steriileillä pinseteillä tavalliset paperilevyt, jotka on kyllästetty erilaisten antibioottien liuoksilla, asetetaan kylvetylle pinnalle yhtä etäisyydelle toisistaan, astian reunoista ja keskeltä (voit käyttää myös erityisiä laitteita ja annostelulaitteita). Kylvettyjä kuppeja säilytetään termostaatissa optimaalisessa lämpötilassa tutkittujen bakteerien kasvulle. Jos bakteerit ovat herkkiä tälle antibiootille, levyn ympärille muodostuu kasvua estävä vyöhyke. Kasvun estoalueen halkaisija vastaa tutkitun mikro-organismin herkkyysastetta tälle antibiootille. Lopputulos arvioidaan erityisten taulukoiden mukaan, jotka osoittavat standardiviljelmien kasvun estoalueiden halkaisijat, herkät, resistentit ja kohtalaisen resistentit.

Levymenetelmä ei anna luotettavaa tietoa mikro-organismien herkkyyden määrittämiseksi polypeptidiantibiooteille, jotka diffundoituvat huonosti agariin (esimerkiksi polymyksiini, ristomysiini). Tämä menetelmä ei myöskään salli antibiootin vähimmäisinhiboivan pitoisuuden määrittämistä.

Sarjalaimennusmenetelmä. Tämä menetelmä määrittää antibiootin vähimmäispitoisuuden, joka estää tutkitun bakteeriviljelmän kasvua (IPC, MIC). Valmistele tätä varten ensin varastoliuos, joka sisältää tietyn pitoisuuden antibioottia (µg/ml tai IU/ml) erityisessä liuottimessa tai puskuriliuoksessa. Lisäksi kaikki myöhemmät laimennokset liemessä (1 ml:n tilavuudessa) valmistetaan pääliuoksesta, minkä jälkeen jokaiseen laimennokseen lisätään 0,1 ml tutkittua bakteerisuspensiota, joka sisältää 106-107 bakteerisolua 1 ml:aa kohti. Lisää viimeiseen putkeen 1 ml lientä (ilman antibioottia) ja 0,1 ml bakteerisuspensiota (viljelykontrolli). Viljoja inkuboidaan 37 0 C:ssa seuraavaan päivään, jonka jälkeen kirjataan kokeen tulokset ravinnealustan sameudesta verrokkiin verrattuna. Viimeinen koeputki läpinäkyvällä ravintoalustalla osoittaa tutkitun bakteeriviljelmän kasvun hidastumista sen sisältämän antibiootin vähimmäisinhiboivan (inhiboivan) pitoisuuden (MIC, MIC) vaikutuksesta. Minimibakterisidisen pitoisuuden (MBC) arvioimiseksi kylvetään tiheälle ravintoalustalle ilman antibioottia koeputkista, joissa ei ole kasvua. MBC:tä pidetään antibiootin vähimmäispitoisuutena, joka aiheuttaa mikro-organismin kuoleman, jolle on ominaista kasvun puuttuminen petrimaljoilla ravintoalustan kanssa.

Menetelmä antibiootin sarjalaimennoksiksi agar-elatusaineeseen. Tässä tapauksessa on mahdollista testata yhdessä kokeessa useiden mikro-organismiviljelmien herkkyys tietyn antibiootin eri pitoisuuksille. Antibiootin eri laimennokset valmistetaan steriiliin agar-elatusaineeseen. Tätä varten siihen lisätään tarvittava määrä alkuperäistä antibioottiliuosta, sekoitetaan perusteellisesti ja kaadetaan steriileihin petrimaljoihin. Agar jähmettymisen jälkeen kupin pohja jaetaan ulkopuolelta markkerilla sektoreihin. Jokainen tutkittu viljelmä kylvetään aivohalvauksella käyttämällä bakteriologista silmukkaa tietylle sektorille maljoissa, joissa on erilaisia ​​antibioottipitoisuuksia. Testiviljelmien siirrostaminen maljoille, joissa on eri pitoisuuksia antibioottia, voidaan tehdä käyttämällä applikaattoria, joka mahdollistaa 12-15 viljelmän siirrostamisen samanaikaisesti levyä kohden. Sitten kupit asetetaan termostaattiin lämpötilaan, joka on optimaalinen tutkittujen bakteerien kasvulle ja kehitykselle. Tulokset otetaan huomioon bakteerikasvun läsnäolon tai puuttumisen perusteella verrattuna kasvuun kasvualustalla kontrollimaljassa. Bakteerien katsotaan olevan herkkiä antibiootille pitoisuudessa, jossa niiden kasvu estyy kokonaan.

E-testimenetelmä. Tämä menetelmä yhdistää sarjalaimennusmenetelmän ja levymenetelmän edut. Levyjen sijasta käytetään antibiootilla kyllästettyjä suodatinpaperiliuskoja ("viivoja"), ja nauhan pohjassa antibiootin pitoisuus on minimaalinen ja "ylhäällä" - maksimi. Suikalot asetetaan ravinneagarin pinnalle, johon on ympätty tutkittavaa viljelmää. Jos bakteerit ovat herkkiä tämän lääkkeen vaikutukselle, sen estäviä pitoisuuksia sisältävien liuskojen ympärille ilmestyy ellipsoidinen kasvua estävä vyöhyke. Antibioottipitoisuuden numeerinen arvo tämän vyöhykkeen pohjalla osoittaa kyseisen antibiootin MIC:n kyseiselle satolle.

TO herkkä Käsitteeseen kuuluvat mikro-organismikannat, joiden kasvu estyy potilaan veren seerumissa löydetyillä lääkeainepitoisuuksilla käytettäessä tavanomaisia ​​antibioottiannoksia.

TO kohtalaisen vakaa Sisältää kannat, joiden kasvun estäminen vaatii pitoisuuksia, jotka syntyvät veren seerumissa, kun lääkkeen enimmäisannoksia annetaan.

kestävää ovat mikro-organismeja, joiden kasvua lääke ei estä pitoisuuksina, jotka muodostuvat kehossa käytettäessä sallittuja enimmäisannoksia.

Testikysymykset.

Määrittele termi "antibiootit". Antibioottien pääryhmät valmistusmenetelmästä riippuen: luonnolliset, puolisynteettiset, synteettiset. Nimeä tiedemies, joka kehitti kemoterapian teorian. Mitkä ominaisuudet ovat ratkaisevia kemoterapeuttista lääkettä valittaessa? Mikä on kemoterapeuttinen indeksi, kirjoita sen kaava, mikä sen pitäisi olla? Määritä ensimmäiset antispirokeaalilääkkeet; ensimmäinen antibakteerinen lääke ja sen saaneen tiedemiehen nimi. Mitkä ovat venäläisten tutkijoiden nimet, jotka löysivät ensimmäisenä vihreän homeen antibakteeriset ominaisuudet. Nimeä tiedemies, joka tutki Penicillium-sienen antibakteerisia ominaisuuksia ja yritti eristää penisilliiniä. Tutkijat, jotka saivat ensimmäisenä penisilliinivalmisteita. Antibioottien valmistajat - anna esimerkkejä. Antibioottien luokitus alkuperän, kemiallisen koostumuksen ja vaikutusspektrin mukaan. Antibioottien vaikutusmekanismi: kohteet (eri ryhmien antibioottien käyttökohteet). Vaikutustyypit - bakterisidinen ja bakteriostaattinen; kuinka ne määritetään in vitro -kokeessa? Virusvastaiset antibiootit, niiden toimintamekanismit. Millä yksiköillä antibioottien aktiivisuutta mitataan? antibioottien säilytysolosuhteet.

Nimeä ja kuvaile antibioottihoidon mahdolliset sivuvaikutukset. Määrittele mikrobien lääkeresistenssin käsite. Lääkeresistenssityypit. Luonnollinen ja hankittu (ensisijainen ja toissijainen). Lääkeresistenssin geneettiset mekanismit: kromosomi ja plasmidi. Lääkeresistenssin fenotyyppiset mekanismit - nimeä ja kuvaile. Antibioottien järkevä käyttö - nimeä menetelmät. Nimeä lääkkeet - antibiootteja tuhoavien entsyymien estäjät. Kuvaa menetelmiä mikrobien herkkyyden määrittämiseksi antibiooteille.

Merkityksellisyys

Oftalmologisessa käytännössä antibakteerisen lääkkeen valinta, kuten muissakin antimikrobisen hoidon tapauksissa, riippuu ensisijaisesti patogeenistä ja sen herkkyydestä antibiooteille. Käytettävän antibakteerisen lääkkeen on oltava bakteereja tappavaa ja sillä on oltava alhainen vähimmäisinhiboiva pitoisuus (MIC). Tämä on erityisen tärkeää nykyaikaisissa olosuhteissa, joissa mikro-organismien vastustuskyky antibiooteille kasvaa jatkuvasti. Lääkkeen antaminen annoksina, jotka eivät pysty vaikuttamaan haitallisesti mikro-organismiin, voi edistää mikroflooran vastustuskyvyn kehittymistä.

MIC on antibakteerisen lääkkeen pienin pitoisuus, joka estää paljaalla silmällä näkyvän mikroflooran kasvun. Juuri IPC mahdollistaa mikro-organismin antibiootille herkkyyden määrittämisen tarkimmin. Mitä pienempi lääkkeen MIC on, sitä suurempi on mikroflooran herkkyys sille. Vain tieto IPC:stä antaa meille mahdollisuuden ratkaista kysymys: saavuttaako antibiootti paikallisesti käytettynä patogeenin lokalisaatioalueille pitoisuudessa, joka on riittävä tukahduttamaan tämän mikro-organismin? On myös huomattava, että silmähoidossa eniten käytetyt antibakteeriset lääkkeet (fluorokinolonit ja aminoglykosidit) ovat annosriippuvaisia ​​lääkkeitä, ts. mikro-organismien kuolemisnopeus kasvaa suoraan suhteessa niiden pitoisuuteen. Tieteellisessä kirjallisuudessa on näyttöä ofloksasiinin MIC-arvon hitaamasta saavuttamisesta silmän etukammion kosteudessa verrattuna levofloksasiinin. On myös todistettu, että levofloksasiinin yhden tiputuksen jälkeen sen pitoisuus on monta kertaa suurempi kuin kaikkien silmätulehduksia aiheuttavien mikro-organismien MIC. Uusia antibakteerisia lääkkeitä tuodaan kuitenkin jatkuvasti kliiniseen käytäntöön, eikä saatavilla olevassa kirjallisuudessa ole käytännössä mitään tietoa IPC:stä, ts. silmätautien nykyaikaisten antibioottien koko kirjon antimikrobisesta tehosta, mikä oli syynä tutkimuksellemme.

Kohde

Määritä nykyaikaisten antibioottien MIC yleisimmälle mikroflooralle.

materiaali ja metodit

Antibioottien MIC-arvon määrittämiseen käytimme Hi Comb MIC -testiä (Venäjän federaation terveysministeriön rekisteröintitodistus 2003/1664, 23. joulukuuta 2003). Testi koostuu liuskoista, joihin on kiinnitetty kiekkoja, jotka on kyllästetty ei yhdellä, vaan sarjalla saman antibiootin alenevia pitoisuuksia. Tutkimusta suoritettaessa otimme ensin sidekalvon ontelon sisällön rokotetta varten yksinkertaiselle agarille. Seuraavaksi mikro-organismin puhdasviljelmä eristettiin ja kylvettiin sopivaan kiinteään ravintoalustaan ​​petrimaljalle nurmikon muodossa. Sitten petrimaljoja inkuboitiin termostaatissa 37°:n lämpötilassa 24 tuntia. Samanaikaisesti testiliuskojen ympärille muodostui ellipsin muotoinen mikroflooran retentioalue, joka mahdollisti antibakteerisen lääkkeen MIC:n määrittämisen. MIC määritettiin digitaalisessa mittakaavassa testiliuskalla mikroflooran kasvua estävän elliptisen alueen vähimmäishalkaisijan alueella. Määritimme kliinisen käytännön yleisimpien antibakteeristen lääkkeiden MIC-arvot - siprofloksasiini (Cipromed, Sentiss), ofloksasiini (Floxal, Baush & Lomb), levofloksasiini (Signicef, Sentiss), moksifloksasiini (Vigamox, Alcon), gatifloksasiini (Zimar, Allergan) ja tobramysiini (Tobrex, Alcon).

tuloksia

Kaikkiaan tutkittiin 105 vähintään 2 kuukauden ikäistä potilasta. enintään 7 vuotta erilaisilla silmän etuosan tulehduksellisilla sairauksilla: akuutti ja krooninen sidekalvotulehdus, blefarokonjunktiviitti, kroonisen dakryokystiitin monimutkainen nenäkyyneltiehyen ahtauma ja bakteerikeratiitti. Lasten sidekalvoontelosta erittyneistä viljelykasveista löydettiin epidermaalista (43,9 %) ja Staphylococcus aureusta (22,9 %), streptokokkeja (15,1 %) sekä gramnegatiivista mikroflooraa (18,1 %).

Kaikissa testatuissa antibakteerisissa lääkkeissä epidermaalisen stafylokokin MIC oli korkein. Alhaisin epidermaalisen stafylokokin MIC havaittiin lääkkeillä levofloksasiini ja moksifloksasiini - 0,544 ja 0,551 µg. Suurimman MIC:n rekisteröimme tobramysiinissä (8,623 μg), ts. tämä lääke oli vähiten tehokas Staphylococcus epidermidis vastaan. Huolimatta siitä, että gatifloksasiinia on käytetty suhteellisen hiljattain kliinisessä käytännössä, sen MIC oli melko korkea - 1,555 mcg. Siprofloksasiinin ja ofloksasiinin MIC oli pieni - 1,023 ja 1,191 µg, vastaavasti.

Kaikkien Staphylococcus aureuksen antibakteeristen lääkkeiden MIC oli pienempi kuin epidermaalisen. Samaan aikaan levofloksasiinilla (0,020 μg) osoittautui olevan alhaisin MIC, ts. Staphylococcus aureuksen aiheuttamien infektioiden hoitoon tämä lääke on osoittautunut tehokkaimmaksi. Moksifloksasiinin (0,202 µg) ja ofloksasiinin (0,240 µg) MIC oli myös alhainen, mutta 10 kertaa korkeampi kuin levofloksasiinin MIC. Korkeimman MIC-arvon rekisteröimme tobramysiinillä (5,115 µg).

Seuraavat streptokokit eristettiin lasten sidekalvoontelosta: Streptococcus pneumoniae, Streptococcus viridans ja Streptococcus haemolyticus. Alhaisin MIC kaikille lapsilta eristetyille streptokokeille todettiin moksifloksasiinilla - vain 0,006 μg. Levofloksasiinin MIC oli myös pieni, mutta ylitti merkittävästi moksifloksasiinin MIC-arvon - 0,135 μg. Korkein MIC kirjattiin siprofloksasiinille (1,246 µg) ja korkein tobramysiinille (6,460 µg).

Lapsista eristettyjen gramnegatiivisten mikro-organismien ryhmään kuuluivat Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter brevis, Klebsiella pneumoniae ja Serratia marcencens. Pienin gramnegatiivisen mikroflooran MIC havaittiin siprofloksasiinilla - 0,034 µg. Alhaiset MIC-pisteet, ts. korkea tehokkuus havaittiin myös levofloksasiinille - 0,051 mcg. Ofloksasiinin ja gatifloksasiinin MIC oli merkittävästi korkeampi ja lähes sama - 0,096 ja 0,102 µg. Korkein MIC kirjattiin jälleen tobramysiinille (7,050 µg) (katso kuva).

Johtopäätös

Siten levofloksasiini osoittautui tehokkaimmaksi antibakteeriseksi lääkkeeksi suhteessa lasten useimmin eristettyyn mikroflooraan. Tämän lääkkeen streptokokkien ja gramnegatiivisten mikro-organismien MIC-arvo osoittautui myös alhaiseksi, minkä ansiosta voimme suositella 0,5-prosenttiseen levofloksasiini Signicefiin perustuvaa lääkettä kaikkien bakteeriluonteisten tulehduksellisten silmäsairauksien hoitoon.

Streptokokkien aiheuttamien tulehduksellisten silmäsairauksien hoidossa suositaan moksifloksasiinia, koska sen streptokokkien MIC oli pienin. Siprofloksasiinin MIC kaikille gramnegatiivisille mikroflooralle osoittautui alhaisimmaksi, mikä vahvistaa tämän lääkkeen yleisesti tunnustetun korkean tehokkuuden. Korkein MIC kaikille eristetyille mikro-organismeille löydettiin tobramysiinistä.

Lääkkeen antimikrobisen vaikutuksen kriteerit ovat pienin estävä pitoisuus(IPC) ja minimaalinen bakterisidinen pitoisuus(MBK). MIC on pienin antibioottien pitoisuus, joka in vitro täysin vaimentaa näkyvissä bakteerien kasvu. Se ilmoitetaan mg/l tai µg/ml. MBC on pienin antibiootin pitoisuus, joka aiheuttaa bakteereja tappavan vaikutuksen. Sen määrittämiseksi on tarpeen siirrostaa koeputkista (visuaalisesti ei kasvua) tiheään ravintoaineagariin, joka ei sisällä antibioottia. Tällä indikaattorilla on suuri kliininen merkitys. Sarjalaimennosmenetelmän perusteella on luotu mikromenetelmiä, joissa käytetään pienempää määrää ravintoalustaa. Tällaista tutkimusta varten on tällä hetkellä saatavilla lukuisia kaupallisia sarjoja, jotka koostuvat kuivatuista, stabiloiduista antibioottilaimennoksista, jotka laimennetaan testimikrobisuspensiolla. Näitä sarjoja voidaan säilyttää normaaleissa olosuhteissa, jolloin laboratoriossa ei tarvitse valmistaa laimennoksia elatusaineista ja antibiooteista. Toinen mikrolaimennustestien etu on, että ne sisältyvät automatisoituun järjestelmään.

Saatujen tietojen (kasvun hidastusvyöhykkeen halkaisija tai IPC-arvo) perusteella mikro-organismit jaetaan herkkiin, kohtalaisen vastustuskykyisiin ja resistentteihin. Näiden luokkien erottamiseksi käytetään niin sanottuja antibioottien rajapitoisuuksia, jotka eivät ole vakioarvoja. Niitä tarkistetaan, kun mikro-organismipopulaation herkkyys muuttuu. Erikoiskomiteoiden jäseninä toimivat johtavat asiantuntijat (kemoterapeutit, mikrobiologit) ovat mukana tulkintakriteerien kehittämisessä ja tarkistamisessa. Yksi näistä on kliinisten laboratoriostandardien kansallinen komitea ( N kansallinen C komitea puolesta C kliininen L aboratorio S tandards - NCCLS), järjestetään Yhdysvalloissa. Tällä hetkellä NCCLS-standardeja käytetään kansainvälisinä standardeina arvioitaessa bakteerien herkkyyden määritystuloksia monikeskus-mikrobiologisissa ja kliinisissä tutkimuksissa.

Bakteerien herkkyyden määrittäminen antibiooteille

Mikro-organismien antibioottien herkkyyden kriteeri on antibiootin pienin estävä pitoisuus (MIC) tai minimaalinen estävä pitoisuus (MIC), joka hidastaa patogeenin kasvua normaaleissa koeolosuhteissa.

Lääkeresistenssin määrittämiseksi käytetään potilaan kehosta eristettyä patogeenin päivittäistä puhdasviljelmää ja sen inokulointiin tavanomaista ravintoalustaa (AGV tai Muller-Hinton agar).

Mikro-organismien herkkyys antibiooteille määritetään levydiffuusiomenetelmällä tai menetelmällä, jossa antibiootti laimennetaan sarjassa nestemäiseen tai kiinteään väliaineeseen.

Levyn diffuusiomenetelmä

Antibioottien herkkyyden määrittäminen paperikiekkomenetelmällä perustuu antibiootin diffuusioon ravintoalustaan. Antibioottien pitoisuus kiekoissa valitaan siten, että standarditestimikro-organismien kasvun estoalueiden halkaisijat vastaavat kansainvälisiä standardeja. Tämä pitoisuus vastaa mikro-organismien standardikantojen keskimääräistä terapeuttista annosta.

Valmistettu mikro-organismisuspensio inokuloidaan petrimaljoissa erityisen alustan (AGV tai Mueller-Hinton agar) pinnalle. Sitten steriileillä pinseteillä tavalliset paperilevyt, jotka on kyllästetty erilaisten antibioottien liuoksilla, asetetaan kylvetylle pinnalle yhtä etäisyydelle toisistaan, astian reunoista ja keskeltä (voit käyttää myös erityisiä laitteita ja annostelulaitteita). Kylvettyjä kuppeja säilytetään termostaatissa optimaalisessa lämpötilassa tutkittujen bakteerien kasvulle. Jos bakteerit ovat herkkiä tälle antibiootille, levyn ympärille muodostuu kasvua estävä vyöhyke. Kasvun estoalueen halkaisija vastaa tutkitun mikro-organismin herkkyysastetta tälle antibiootille. Lopputulos arvioidaan erityisten taulukoiden mukaan, jotka osoittavat standardiviljelmien kasvun estoalueiden halkaisijat, herkät, resistentit ja kohtalaisen resistentit.

Levymenetelmä ei anna luotettavaa tietoa mikro-organismien herkkyyden määrittämiseksi polypeptidiantibiooteille, jotka diffundoituvat huonosti agariin (esimerkiksi polymyksiini, ristomysiini). Tämä menetelmä ei myöskään salli antibiootin vähimmäisinhiboivan pitoisuuden määrittämistä.