Kulttuurimenetelmä-puhdasviljelysäiliön erittyminen ja kertyminen-th viimeisellä. Tunniste.Jokainen.säiliö-ja resistanssialue, joten säiliö.analyysi voi sisältää herkkyyden määritelmän. Pure-to-ry to a \ b

Ominaisuus: monivaiheinen. Miinus - kesto.

Tutkimukset: veri, virtsa, aivo-selkäydinneste, nielun ja nenän lima, ulosteet

Käytä eristämiseen tiheää alustaa Vaiheet: puhtaan viljelmän eristäminen

Esiluokitusmenetelmät:

1) bakteeripesäkkeiden ja niiden ominaisuuksien morf.analyysi erityisillä \ differentiaalisilla elatusaineilla

2) mikroskooppi - värjäsin säiliön

Säiliön lopullista tunnistamista varten: tutkimus b \ x toimii (biotyypitys);

ilmaisinsäiliö Ag (serotyyppi-e) -1) r-tion agglutinaatio lasi-pr. enterobakteereille

2) immunodiff agarissa (korinebak-ii difteria)

def-e herkkyys bakteriofageille (faagityyppi-e)

IMMUNOLOGIA

Antigeeniä tunnistavat reseptorit lymfosyyteissä.

BCR:n ja TCR:n vertailuominaisuudet

2. "Kloonauksen" käsite immunologiassa tarkoittaa:

1. Jokaisen B/T-lymfosyytin kyky reagoida yksittäiseen antigeeniin (epitooppi). 2. Jokaisen B/T-lymfosyytin kyky vastata useisiin epitooppeihin. 3. Antigeenia esittelevien solujen HLA-molekyylien antigeenisten peptidien selektiivinen sitoutuminen. 4. Lymfosyyttien antigeeniä tunnistavien reseptorien spesifisyys (epitooppikomplementaarisuus). 5. T- ja B-lymfosyyttien CD-fenotyypin klonospesifisyys.

Lymfosyyttien kyky tunnistaa antigeeneja ja reagoida niiden kanssa on heterogeeninen. Lisäksi jokainen lymfosyytti ja sen jälkeläinen (klooni) on viritetty olemaan vuorovaikutuksessa yhden antigeenin (tarkemmin sanoen epitoopin) kanssa. Toisin sanoen lymfosyytit kloonataan herkkyyden perusteella antigeeneille, ja tämä määrittää immuunivasteen selektiivisyyden (antigeenispesifisyyden). Kloonauksen molekyyliperustana on antigeenejä sitovien reseptorien spesifisyys: jokaisen kloonin reseptorit ovat ainutlaatuisia ja reagoivat vain yhden antigeenin kanssa. Tämä tarkoittaa, että kloonien ja linjaspesifisten reseptorien määrän on oltava valtava, mikä vastaa ääretöntä määrää mahdollisia antigeenejä. Ennen kuin kohdataan antigeenin, jokaista kloonia edustaa pieni määrä kypsiä lepääviä soluja (niitä kutsutaan "naiiveiksi"). Sitoutumalla komplementaarisiin reseptoreihin antigeeni saa aikaan lymfosyytin aktivaation, joka toimii valintatekijänä (kloonivalinta). Kloonin lukumäärä kasvaa (kloonin laajeneminen), ja sen muodostavat lymfosyytit erilaistuvat efektori- ja muistisoluiksi.

BAKTERIOLOGIA

3. Mycobacterium tuberculosisin merkit, jotka liittyvät niiden soluseinän ominaisuuksiin:

1. Haponkestävyys. 2. Hidas lisääntymisnopeus. 3. Resistenssi fagosyyteille. 4. Vakaus ulkoisessa ympäristössä. 5. Korkea herkkyys antibiooteille.

TUBERKULOOSI. suvun Mycobacterium Yleinen ominaisuus - happo-, alkoholi- ja alkaliresistenssi. perhe Mycobacteriaceae (saprofyytit) osasto Firmicutes. Liikkumattomat, aerobiset gr + sauvamaiset bakteerit. Joskus ne muodostavat rihmastoa muistuttavia rakenteita, mistä johtuu nimi. Värjäämiseen käytetään Ziehl-Neelsen-menetelmää. Taudin aiheuttavat 3 tyyppiä mykobakteerit: Mycobacterium tuberculosis - ihmislaji, Mycobacterium bovis - naudan laji, Mycobacterium africanum - välilajit. [Mykobakteerien antroponoosien aiheuttajat: M.leprae, m.tuberculosis. mykobakteeri-zoonoosin aiheuttaja: M.bovis.] säiliö - sairas, infektioreitti - aerogeeninen. Ilmaantuvuus lisääntyy huonon hygienian takia jne. Kochin sauva on ohut, suora tai hieman kaareva, taipuvainen haarautumaan. Ziehl-Neelsenin menetelmä värjää punaiseksi, sisältää happamia rakeita (perhojyviä sytoplasmassa) Kasvutekijöitä tarvitaan. Nestemäisessä väliaineessa se syntetisoi johtotekijän, virulenssitekijän. Syntetisoi paljon nikotiinihappoa - niasiinia (niasiini testimenetelmä differentn mikobakt). Soluseinän lipidit: mykolihapot, napanuoratekijä, mykosidit, sulfatidit. Siksi hän on haponkestävä, "panssaroitu hirviö". vastustuskyky fagosyyteille. vakaa ympäristössä. Antifagosyyttisen aktiivisuuden tekijät: soluseinän lipidit, sideroforit.

Patogeneesi: tunkeutuminen alveoleihin; lisääntyminen alveolaarisissa makrofageissa (fagosomaalisen lysosomaalisen fuusion esto); epäspesifisen esi-immuunigranulooman muodostuminen (infektoituneiden solujen ympärille muodostunut varsi makrofagista); bakteerien tunkeutuminen alueellisiin imusolmukkeisiin; T-soluimmuniteetin induktio; T-riippuvainen makrofagien aktivointi (ensin Apu, saastuneiden makrofagien biosidisuuden lisääminen, sitten Tkil, makrofagien infektion tuhoaminen); spesifisen postimmuunigranulooman muodostuminen. Prosessin loppuun saattaminen - fibroosi, kalkkiutuminen, piilevien infektioiden muodostuminen, immuniteetin muodot eksogeeniselle uudelleeninfektiolle. [Prosessin aloitus - intramakrofagien hyökkäys. Mekanismit: ei-aggressiivinen fagosytoosi, muodostumisen estäminen fagolyysillä, aktiivinen vastustus fagolysosomien biotoksisille tekijöille, makrofagien ja T-lymfosyyttien välisen toiminnallisen yhteistyön tukahduttaminen.] Primaarinen tuberkuloosi-etu lapsuuden ilmenemismuodossa (+ alikuumennus) - - Primaarinen immuunikompleksi Gonin painopiste. Granuloomassa on Pirogov-Lnghans-soluja, kehää pitkin - lymfosyytit, mononukleaariset solut. Endogeenisen inf:n (sekundaariputken) tai eksogeenin uudelleenaktivoituminen on mahdollista, uudelleentartunta on harvinainen, kehittyy tuberkuloproteiiniallergian taustalla.Levittynyt tuberkuloosi on mahdollista immuunipuutteisilla henkilöillä. Tuberkuliini on tuberkuloproteiinien (proteiinijohdannaisten) kompleksi, jota käytetään allergiadiagnostiikassa. [Käytetään Freundin adjuvanttia: peptidoglykaani + soluseinän lipidit]. Tuberkuloproteiineilla on immunologisesti riippuvainen patogeenisyys, ne osallistuvat suojaavan immuniteetin toteuttamiseen ja niitä käytetään allergiadiagnostiikassa. Soluseinän lipidit: antimakrofagien aktiivisuus, osallistuvat T-soluimmuniteetin induktioon adjuvantteina, määrittävät bakteerien kulttuuriset ja väriset ominaisuudet. Makrofagien päätehtävä epäspesifisen granulooman alueella on solujen immuniteettireaktioiden herättäminen. Immuunijälkeinen granulooma: esiintyy viivästyneen tyyppisen tuberkuloproteiinien yliherkkyysreaktion taustalla, makrofagien ja T-efektorien välisen toiminnallisen yhteistyön vyöhyke, tuhoavien reaktioiden perusta, sanogeneesin (toipumisen) perusta, päättyy oireettomaan jatkumiseen taudinaiheuttaja. Tuberkuloosin tuhoavat prosessit määritetään: mycobacter AG:n immunologisesti välittämät vaikutukset, sytokiiniriippuvainen makrofagien aktivaatio, allergia tuberkuloproteiineille. Immuniteetti Tuberkuloosin vastainen immuniteetti ei-steriili tarttuva, [johtuen mykobakteerien L-muotojen esiintymisestä kehossa.] solumainen, antibakteerinen

Laboratoriodiagnostiikka Pakollisia tutkimusmenetelmiä ovat bakterioskooppinen, bakteriologinen tutkimus, biologinen testi, tuberkuliinidiagnostiikka, joka perustuu elimistön tuberkuliiniyliherkkyyden määrittämiseen (proteiiniseos on puhdistettua tuberkuliinia). Infektioiden ja allergisten reaktioiden havaitsemiseksi he tekevät useammin intradermaalisen Mantoux-testin puhdistetulla tuberkuliinilla standardilaimennoksessa (jopa 14 vuotta). Fluorografia. Hoito-antibioottihoito, kirurgi puuttuu asiaan.

Spesifinen profylaksi suoritetaan ottamalla käyttöön elävä attenuir-rokote - BCG (BCG) - intradermaalisesti viidentenä päivänä lapsen syntymän jälkeen. Seuraavat uusintarokotukset suoritetaan 7, 13 vuoden ajan.

VIROLOGIA

4. Ortomyksovirusten hemagglutiniini:

1. Aloittaa viruksen vuorovaikutuksen solun kanssa. 2. Aktiivistuu rajoitetun proteolyysin jälkeen. 3. Yhdistämistekijä. 4. Suojaava antigeeni. 6. Saatavana kaikissa influenssa-suvun tyypeissä (lajeissa).

Ortomyksovirukset Suku Orthomixoviridae-heimon influenssavirus (lima, ne, joilla on musiiniaffiniteettia). On olemassa 3 tyyppiä - A, B, C. "-" RNA (8 segmenttiä, yksijuosteinen on A ja B, 7 C) Sellaisen segmentoinnin ansiosta kaksi virusta voivat helposti vaihtaa geneettistä tietoa vuorovaikutuksen aikana ja edistää siten suurta vaihtelua viruksen., kierukkamainen nukleokapsidi (koostuu RNA:sta, nukleoproteiinista (rakenteet ja säätelevät roolia ja tyyppi-erityinen ag) ja proteiini), superkapsidi-is (= "kompleksi"). RNA-polymeraasikompleksin proteiinit (entsyymit): PB1-proteiini (transkriptaasi), PB2-proteiini (endonukleaasi), PA-proteiini (replikaasi). Seuraavaksi tulee M-proteiini (osallistuu viruspartikkelien kokoamiseen, tyyppispesifinen AG), sitten bilipidikerros (entinen isäntäsolun kalvosta, tunteet eetteriä kohtaan), josta glykoproteiini piikit, joka koostuu hemagglutiniinista (H). ) ja neurominidaasi (N (tyyppi C ei))

AG-rakenne: sisäinen - NP, proteiini-M, RNA-polymeraasikompleksin proteiinit. Ulkoinen - H (laji 15, ihmisillä: H1-3) ja N (9, ihmisillä: N1, N2). Replikaatio h/z mRNA.

(transkriptaasi, endonukleaasi, replikaasi). Repl ytimessä ja synteesi

Hz H:n endosytoosilla endosomiin, siellä hapan ympäristö muuttaa konformaatiota, paljastaa peptidit (F-proteiinit) aiheuttaen viruksen ja fagolysosomaalisen kalvon fuusion => deproteenisoituminen

Ajelehtia, vaihtoa. viremia. Remantadiini.

Oireet: -RNA (=> se ei voi suorittaa mRNA:n tehtäviä ilman transkriptiota, fragmentaarinen), kuori (sisäinen sisältää M-proteiinin, nukleoproteiinin, ferm-polymeerisarjan), akuuttien hengitystieinfektioiden kiihtyvyys, nukleokapsidihelix sim. Jaa tyyppeihin: (A, B, C) Sisäisten proteiinien AG-lajit (nukleoproteiini). A, B, C eroavat: ekologi, AH-ismin laajuus, virionitilojen kirjo, Epidem-ti-vaihe (patogeenien johtaja on tyypin A virus, tyyppi B on välimuoto, tyyppi C on satunnaisen aiheuttaja taudinpurkaukset). Supercaps-proteiinit: N, H. H: käynnistää vir:n vuorovaikutuksen CL:n kanssa (TK:lla on affiniteetti sialyloituihin glykopeptideihin ja glykolipideihin tästä johtuen virionit kiinnittyvät plasmakalvoille), aktivoituvat proteolyysillä (synteesi prekursorikissa-menetelmä reagoi reseptisolun kanssa, mutta ei takaa obolovirionin fuusioitumista kalvosolujen kanssa => täytyy käydä läpi rajoitettu proteolyysi, proteaasit pilkkovat hemaglutin H1:ksi ja H2:ksi, ja lisäkonformaation jälkeen endosomien happamassa ympäristössä H2 käynnistää fuusion ), fr fuusio (tapa, jolla nuklekapsidit vapautuvat sytoplasmaan: endosomien happamassa ympäristössä ne paljastuvat erityisrakenteen hemaglut (fuusiokohdat) kissan kiihtyvä yhdistetyt virus- ja solukalvot), Protect-AG (ne estävät viruksen se ja tukahduttaa infektio), kaikissa influenssatyypeissä siaalihapon pilkkoutuminen glykolepideistä ja glykopeptideistä, jotka olennaisesti inaktivoivat hemagglutiniinireseptoreita), epitooppierot ovat vaihtelevia. AG-muutos (tämä on muutos, odottamaton, äkillinen kissa johtaa täydelliseen muutokseen H-, N-antigeeniprofiilissa ja uusia alatyyppejä ilmaantuu): vain tyyppi A, ekologinen determinantti-n (viruksia sitova hengitysteihin), geneettinen determinantti (riippuu geenien geneettisestä rekombinaatiosta, kun solut ovat infektoituneet useilla kannoilla samanaikaisesti), virioniproteiinin alatyypin muutos, pandemia (H1N1 (tämä on espanjantauti) H3N2 (Hongkongin virus) kanta, määrittää kannan ominaisuudet alatyyppi, aiheuttaa kannan, jolla on lisääntynyt epidemian läpäisevyys) epid. Rokotetta on vaikea saada: AG-muutos, drift.

Tenttilippu 58.

YLEINEN MIKROBIOLOGIA

Tarttuvien tautien erityisehkäisyn käsite. Rokotuksen immunologiset perusteet. E Jennerin ja L. Pasteurin teoksia. Rokotetyypit (tapetut, elävät, alayksikkörokotteet, mono- ja liitännäisrokotteet). Rekombinantit rokotteet, saamisen periaate. konjugoidut rokotteet. Limakalvorokotteet.

Immuniteetti on passiivinen (1. luonnollisesti saatu tartunnan jälkeen ja 2. rokotteen jälkeen hankittu taide) ja aktiivinen (1. äidin luonnollisesti maidon tai istukan kautta hankkima taide ja 2. seroterapian avulla hankittu taide). Epäspesifinen prof-ka on tarkoitettu tartunnan välttämiseen ja spesifinen konkreettista viritystä vastaan. Rokotuksen ydin on muodostaa muisti kohonneesta verenpaineesta, joka tarjoaa nopean immuunivasteen. Rokotteeseen tarvitaan vain suojaavia antigeenejä (eli jotka aiheuttavat vasta-aineiden tuotantoa)

HISTORIA: Vuonna 1778 Jenner osoitti, että "lehmärokko"-rokotus suojaa isorokkotartunnasta. Se oli puhtaan kokeilun tulos. Tämä on rokotusten syntymäaika. Pasteur loi termin "rokote". Vuonna 1881 hän "tahallisesti" heikensi bakteerien virulenssia viljelemällä niitä epäsuotuisissa olosuhteissa. Hän valmisti ensimmäiset rokotteet kanakoleraa ja pernaruttoa vastaan. Vuonna 885 hän sai rokotteet besh-waa vastaan ​​(myöhemmin kävi ilmi, että se oli tapettu rokote)

Rokotetyypit:

1. LIVE - lisää heikennettyjä (heikennettyjä) bakteereja. Osl-t fysikaaliset, kemialliset menetelmät. "+" - korkea immunogeenisyys ja vaikutuksen kesto (koska heikentyneet bakteerit pystyvät laajentumaan org-me:ssä, pysyvät "-" - lisääntynyt reaktogeenisuus, epävakaus, mitätön. Mutta virulentin fenotyypin palautumisen todennäköisyys. Esimerkki: BCG

2. KILLED-Sod-t inaktivoitu bakteereja, prostia, sieniä tai virioneja. Niiden haitat ja edut ovat päinvastaiset kuin elävien rokotteiden. Pitää tehdä useammin. Esimerkki: n-flunssa, vatsan lavantauti

3. ALAYKSIKKÖ - koostuu puhdistetuista suojaavista antigeeneistä. Reaktiivisuus on minimaalista. O alhainen immunogeenisuus parannettu adjuvanttien avulla

1) Konjugoitu - isp-t imm-that:n luomiseen T-riippumatonta AG:ta vastaan. T-riippumaton AG ei jätä muistia.

2) Anatoksiinit - neutraloidut bakteerimyrkyt. Ongelmana on, että yksimyrkytys on harvinaista. Eksotoksiineja käsitellään formaliinilla ja ne menettävät myrkylliset ominaisuutensa, mutta niiden vastustuskyky säilyy. Ne eivät suojaa bakteereilta. Esimerkki: tetanustoksoidi

3) Rekombinantti - nämä ovat yhdistelmä-DNA-molekyylejä, jotka on valmistettu bakteeriplasmidien perusteella ja joihin on lisätty suojaavien antigeenien geenit. Sellainen DNA synth-t AG, joka indusoi humoraalista ja sellulaarista imm.

1) Paljastettu käyttämällä vapaita plasmideja tai sellaisia, jotka on adsorboitu taiteen kantajille. He ovat turvassa. Esimerkki: B-hepatiitti

2)Vektori - toimitukseen käytä heikentynyttä bakteeria

4. MUCOSALE - kehitetty erityisesti imm-että limakalvoille hengitysteiden, suoliston ja sukupuolielinten infektioita vastaan. Pomiso d-I paikan päällä, ne vaikuttavat myös yleiseen imm-t. Heidän välttämättä sopr-t-apuaineet. Mutta niiden käyttöönotto käytännössä on hyvin hidasta.

9. Bakteriologinen menetelmä tartuntatautien diagnosoimiseksi

Mikrobiologisen diagnostiikan päämenetelmä ja mikrobiologian "kultastandardi" on bakteriologinen menetelmä.

Bakteriologisen menetelmän tarkoitus koostuu patogeenin puhtaan viljelmän eristämisestä testimateriaalista, puhtaan viljelmän keräämisestä ja tämän viljelmän tunnistamisesta joukon ominaisuuksien perusteella: morfologinen, värillinen, kulttuurinen, biokemiallinen, antigeeninen, patogeenisyyden, toksisuustekijöiden ja sen herkkyyden määrittämisen perusteella. mikrobilääkkeille ja bakteriofageille.

Bakteriologinen tutkimusmenetelmä sisältää:

1. testimateriaalin siirrostaminen ravintoalustaan

2. puhtaan kulttuurin eristäminen

3. mikro-organismien tunnistaminen (lajiin kuulumisen määrittäminen).

Aerobisten ja anaerobisten bakteerien puhdasviljelmien eristäminen ja tunnistaminen sisältää seuraavat tutkimukset:

Vaihe I (työskentely alkuperäisellä materiaalilla)

Tarkoitus: saada eristettyjä pesäkkeitä

1. Alustava mikroskopia antaa likimääräisen kuvan mikrofloorasta

2. Tutkimusaineiston valmistelu

3. Kylvö tiheään ravintoalustaan ​​eristettyjen pesäkkeiden saamiseksi

4. Inkubointi optimaalisessa lämpötilassa, useimmiten 37°C, 18-24 tuntia

II vaihe

Tarkoitus: puhtaan kulttuurin saaminen

1. Pesäkkeiden makroskooppinen tutkimus läpäisevässä ja heijastuneessa valossa (pesäkkeiden koon, muodon, värin, läpinäkyvyyden, koostumuksen, rakenteen, ääriviivan, pinnan luonnehdintaa).

2. Eristettyjen pesäkkeiden mikroskooppinen tutkimus

3. Aerotoleranssin testaus (tiukkojen anaerobien esiintymisen varmistamiseksi testimateriaalissa).

4. Tietylle lajille tyypillisten pesäkkeiden kylvö puhtaaseen kasvualustaan ​​tai elektiiviseen kasvualustaan ​​ja inkubointi optimaalisissa olosuhteissa.

Vaihe III

Tarkoitus: Eristetyn puhdasviljelmän tunnistaminen

1. Eristetyn viljelmän tunnistamiseksi biologisten ominaisuuksien kompleksin perusteella tutkitaan seuraavaa:

morfologia ja sävyominaisuudet

kulttuuriset ominaisuudet (kasvun luonne ravintoalustalla)

biokemialliset ominaisuudet (mikro-organismien entsymaattinen aktiivisuus)

serologiset ominaisuudet (antigeeniset)

virulentit ominaisuudet (kyky tuottaa patogeenisyystekijöitä: toksiineja, entsyymejä, puolustus- ja aggressiotekijöitä)

patogeenisuus eläimille

faagien lisoituvuus (herkkyys diagnostisille bakteriofageille)

herkkyys antibiooteille

muita yksittäisiä ominaisuuksia

Vaihe IV (päätelmä)

Tutkittujen ominaisuuksien perusteella tehdään johtopäätös eristetystä viljelmästä

Tutkimuksen ensimmäinen vaihe. Patologisen materiaalin tutkimus alkaa mikroskopialla. Värjätyn natiivimateriaalin mikroskopia mahdollistaa suunnilleen tutkitun kohteen mikrobimaiseman koostumuksen, mikro-organismien joidenkin morfologisten piirteiden selvittämisen. Natiivimateriaalin mikroskopiatulokset määräävät suurelta osin jatkotutkimuksen kulun, ja sen jälkeen niitä verrataan ravintoalustoille inokulaatiossa saatuihin tietoihin.

Kun näytteessä on riittävästi patogeenisiä mikro-organismeja, siirrostus suoritetaan tiheään ravintoalustaan ​​(eristettyjen pesäkkeiden saamiseksi). Jos testimateriaalissa on vähän bakteereja, siirrostus suoritetaan nestemäisille ravinnerikastusalustalle. Ravintoalustat valitaan mikro-organismien vaatimusten mukaan.

Mikro-organismien viljely on mahdollista vain, kun luodaan optimaaliset olosuhteet niiden elintärkeälle toiminnalle ja noudatetaan sääntöjä, jotka sulkevat pois testimateriaalin saastumisen (vieraiden mikrobien aiheuttama vahingossa tapahtuva kontaminaatio). Koeputkessa, pullossa tai petrimaljassa voidaan luoda keinotekoisia olosuhteita, jotka sulkevat pois muiden lajien aiheuttaman viljelykontaminaation. Kaikkien ruokailuvälineiden ja ravintoalustojen on oltava steriilejä ja mikrobimateriaalin inokuloinnin jälkeen suojattuja ulkoiselta kontaminaatiolta, joka saadaan aikaan tulppien tai metallikorkkien ja -kansien avulla. Manipulaatiot testimateriaalilla tulisi suorittaa alkoholilampun liekkivyöhykkeellä materiaalin saastumisen välttämiseksi ulkoisesta ympäristöstä sekä turvallisuusmääräysten noudattamiseksi.

Materiaalin siirrostus ravintoalustaan ​​tulee tehdä viimeistään 2 tunnin kuluessa niiden keräämisestä.

Tutkimuksen toinen vaihe. Pesäkkeiden tutkimus ja puhdasviljelmien eristäminen. Päivän inkuboinnin jälkeen pesäkkeet kasvavat levyillä, ja ensimmäisellä vedolla kasvu on jatkuvaa, ja seuraavassa - eristettyjä pesäkkeitä. Pesäke on kokoelma saman lajin mikrobeja, jotka ovat kasvaneet yhdestä solusta. Koska materiaali on useimmiten mikrobien seos, kasvaa monen tyyppisiä pesäkkeitä. Erilaiset pesäkkeet merkitään lyijykynällä, rajaamalla ne ympyrällä pohjan puolelta ja tutkimalla niitä (taulukko 11). Ensinnäkin tutki pesäkkeitä paljaalla silmällä: makroskooppisia merkkejä. Kuppia tarkastellaan (avaamatta) pohjasta läpäisevässä valossa, pesäkkeiden läpinäkyvyys todetaan (läpinäkyvä, jos se ei vangitse valoa; läpikuultava, jos se vangitsee valoa osittain; läpinäkymätön, jos valo ei kulje pesäkkeen läpi), mittaa (mm) pesäkkeiden koko. Sitten he tutkivat pesäkkeitä kannen sivulta, panevat merkille muodon (säännöllinen pyöreä, epäsäännöllinen, tasainen, kupera), pinnan luonteen (tasainen, kiiltävä, himmeä, karkea, ryppyinen, märkä, kuiva, limainen), värin (väritön, värillinen).

Taulukko 11. Kaavio pesäkkeiden tutkimisesta

Huomautus: 5-7 pistettä tutkitaan mikroskoopin pienellä suurennuksella.

Näet eron pesäkkeiden välillä vielä paremmin, kun lähennät niitä. Tätä varten suljettu astia asetetaan ylösalaisin esinepöydälle, jäähdytin lasketaan hieman alas, käytetään pientä objektiivisuurennusta (x8), kulhoa liikutetaan, pesäkkeissä tutkitaan mikroskooppisia merkkejä: reunan luonne ( sileä, aaltoileva, sahalaitainen, särmäinen), rakenne (homogeeninen, rakeinen, kuitumainen, homogeeninen tai erilainen keskeltä ja reunalta).

Seuraavaksi tutkitaan pesäkkeistä peräisin olevien mikrobisolujen morfologiaa. Tätä varten kunkin merkityn pesäkkeen osasta tehdään sivelynäytteet, jotka on värjätty Gramin mukaan. Kun otat pesäkkeitä, kiinnitä huomiota koostumukseen (kuiva, jos pesäke murenee ja otetaan vaikeasti; pehmeä, jos se otetaan helposti silmukalle; limainen, jos pesäke kurkottaa silmukkaa; kova, jos osa pesäkettä silmukka ei ota, vain koko pesäke voidaan poistaa).

Näytteitä tarkasteltaessa todetaan, että pesäkettä edustaa yhden tyyppinen mikrobi, joten puhtaat bakteeriviljelmät voidaan eristää. Tätä varten tutkituista pesäkkeistä kylvetään uudelleen kaltevalle agarille. Kun pesäkkeistä kylvetään uudelleen, on huolehdittava siitä, että otat täsmälleen aiotut pesäkkeet koskematta lähellä olevien pesäkkeiden silmukkaan. Putket allekirjoitetaan ja niitä inkuboidaan termostaatissa 37 °C:ssa 24 tuntia.

Tutkimuksen kolmas vaihe. Eristetyn kulttuurin tunnistaminen. Mikrobien tunnistaminen - materiaalista eristetyn viljelmän systemaattisen sijainnin määrittäminen lajiin ja varianttiin. Ensimmäinen ehto tunnistamisen luotettavuudelle on kulttuurin ehdoton puhtaus. Mikrobien tunnistamiseen käytetään joukkoa merkkejä: morfologinen (muoto, koko, siimasolujen esiintyminen, kapselit, itiöt, suhteellinen sijainti sivelyssä), tinctorial (suhde Gram-värjäykseen tai muihin menetelmiin), kemiallinen (guaniini + sytosiinisuhde DNA-molekyyli), kulttuurinen (ravinteiden tarve, viljelyolosuhteet, kasvunopeus ja - luonne erilaisilla ravintoalustoilla), entsymaattinen (erilaisten aineiden pilkkoutuminen väli- ja lopputuotteiden muodostumisen myötä), serologinen (antigeeninen rakenne, spesifisyys), biologinen (virulenssi) eläimille, toksisuus, allergeenisuus, antibioottien vaikutus jne.).

Biokemiallista erilaistumista varten bakteerien kyky fermentoida hiilihydraatteja muodostamalla välituotteita ja lopputuotteet, kyky hajottaa proteiineja ja peptoneja sekä tutkia redox-entsyymejä.

Sakkarolyyttisten entsyymien tutkimiseksi eristetyt viljelmät ympätään koeputkiin puolinestemäisellä väliaineella, joka sisältää laktoosia, glukoosia ja muita hiilihydraatteja ja polyoleja. Puolinestemäiselle alustalle siirrostus tehdään ruiskuttamalla alustan syvyyteen. Ruiskuttamalla kylvetty putki väliaineen kanssa pidetään kulmassa, tulppa poistetaan ja putken reuna poltetaan. Materiaali otetaan steriilillä silmukalla ja sillä lävistetään ravintoalustan pylväs lähes pohjaan asti.

Proteolyyttisten entsyymien määrittämiseksi eristetty viljelmä ympätään peptonivedellä tai MPB:llä. Tätä varten he ottavat koeputken, jossa inokulaatio on lähempänä itseään, ja koeputken väliaineella - kauempana itsestään. Molemmat koeputket avataan samanaikaisesti, niiden tulpat otetaan kiinni pikkusormella ja kämmenen reunalla, putkien reunat poltetaan, pieni viljelmä otetaan talteen kalsinoidulla jäähdytetyllä silmukalla ja siirretään toiseen koeputkeen, hierretään nestemäisessä väliaineessa koeputken seinämään ja pestään pois alustalla.

Kylvössä ja uudelleenkylvössä on kiinnitettävä huomiota steriiliyssääntöjen noudattamiseen, jotta ne eivät saastuttaisi viljelykasveja vieraalla mikroflooralla ja eivät myöskään saastuttaisi ympäristöä. Putket merkitään ja asetetaan termostaattiin inkuboitavaksi 37 °C:ssa päivän ajan.

Johtopäätös

Tulosten kirjanpito. Tutkimuksen johtopäätös. Tunnistuksen tulokset huomioidaan ja saatujen tietojen kokonaisuuden perusteella, käsikirjassa (Bergyn opas, 1994-1996) kuvatun tyyppikantojen luokituksen ja ominaisuuksien perusteella määritetään eristettyjen viljelmien tyyppi.

Laboratoriotutkimusmenetelmillä useissa nosologisissa muodoissa on johtava ja useissa kliinisissä tilanteissa ratkaiseva rooli paitsi diagnoosissa myös taudin lopputuloksen määrittämisessä. Diagnostiikan tehtävänä on, että varhainen, tarkka, kattava ja tarkin diagnoosi on perusta järkevälle ja tehokkaalle terapialle, mahdollistaa useimmissa tapauksissa ennustamisen mahdolliset vaihtoehdot taudin etenemiselle ja seurauksille sekä toimii lähtökohtana toteuttaa oikea-aikaisia ​​ja kohdennettuja epidemioita ja ennaltaehkäiseviä toimenpiteitä.
Tartuntatautien diagnosointiin liittyy lähes aina laboratoriomenetelmien kompleksin käyttö.

Nykyaikaisissa olosuhteissa tartuntatautien diagnosointi säilyttää kaikki perinteiset piirteensä, jotka ovat muodostuneet viime vuosikymmeninä. Samaan aikaan sille on ominaista jo löydettyjen sairauksien tunnistamistekniikoiden ja menetelmien jatkuva parantaminen ja uusien, tehokkaampien, myös express-sairauksien, etsiminen.
Bakteeri-infektioiden mikrobiologiseen diagnosointiin on olemassa seuraavat menetelmät: bakterioskooppinen (mikroskooppinen), bakteriologinen (kulttuuri), biologinen (kokeellinen), immunologinen (serologinen), allerginen.
Päämenetelmänä on bakteriologinen tutkimus. Se koostuu testimateriaalin kylvämisestä ravintoalustaan, patogeenin puhtaan viljelmän eristämisestä ja sen tunnistamisesta. Patogeenin tyyppi määräytyy useiden ominaisuuksien perusteella: morfologia, väriominaisuudet (kyky värjäytyä erilaisilla väriaineilla), viljelyominaisuudet (keinotekoisilla ravintoaineilla kasvamisen luonne), biokemialliset ominaisuudet (hiilihydraattien ja proteiinien käyminen). Eristetyn viljelmän lopullinen kuuluminen tietyntyyppisiin mikro-organismeihin todetaan antigeenisen rakenteen tutkimisen jälkeen käyttämällä erilaisia ​​immunologisia reaktioita (agglutinaatio, saostus, neutralointi jne.). Yleensä bakteriologinen tutkimusmenetelmä on monivaiheinen bakteriologinen tutkimus, joka kestää 18-24 tunnista useisiin päiviin.

Bakteriologisella menetelmällä on monia etuja. Yksi ensimmäisistä on tutkia sen avulla tutkittavan biologisen materiaalin mikroflooran laadullista koostumusta. Diagnoosin kannalta tärkeä mikro-organismien lukumäärä 1 g:ssa tutkittavaa ainetta ja 1 ml:ssa nestettä, ns. mikrobien kokonaismäärä, mitattuna pesäkkeitä muodostavissa yksiköissä (CFU/g tai CFU/ml). Tätä varten tietty määrä testimateriaalia kylvetään tiheään ravintoalustaan, termostaatissa inkuboinnin jälkeen lasketaan kasvaneiden pesäkkeiden lukumäärä (pesäke on näkyvä eristetty kertymä yhden tyypin mikro-organismien edustajista, joka muodostuu yhden pesäkkeitä muodostavan yksikön lisääntyminen tiheässä ravintoalustassa).
Vaikuttavimpia mikrobiologian saavuttamia tuloksia ovat antibioottien luominen ja käyttöönotto. Lääkeresistenttien bakteerimuotojen laajan leviämisen vuoksi järkevän kemoterapian määräämiseksi on tarpeen määrittää taudinaiheuttajan eristetyn puhtaan viljelmän antibiogrammi - herkkyys antibakteerisille lääkkeille. Antibiogrammia varten käytetään joko paperilevymenetelmää tai sarjalaimennusmenetelmää.
Paperikiekkomenetelmä perustuu antibiooteilla kyllästettyjen kiekkojen ympärillä olevan bakteerikasvun estoalueen tunnistamiseen. Sarjalaimennusmenetelmässä antibiootti laimennetaan koeputkissa nestemäisellä ravinneväliaineella, jonka jälkeen koeputkiin ympätään sama määrä bakteereja. Bakteerikasvun puuttuessa tai esiintyessä tulokset kirjataan. Sarjalaimennosmenetelmällä määritetään antibiootin pienin estävä konsentraatio (MIC), jonka avulla lasketaan lääkkeen terapeuttinen annos.

Bakteriologisella menetelmällä voidaan tutkia eristettyjen viljelmien antibioottiresistenssin mekanismeja (metisilliiniresistenssi, b-laktamaasin tuotanto). On myös mahdollista arvioida antibiootin pitoisuutta tartuntaprosessin fokuksessa, antibioottiherkkyyden muutosta hoidon dynamiikassa.
Kliinikon kannalta on tärkeää tietää, kuinka tehokas antimikrobinen hoito on, jotta voidaan arvioida laadullisen ja kvantitatiivisen koostumuksen muutosten dynamiikkaa sairauden ja hoidon aikana. Bakteriologisella diagnostisella menetelmällä on mahdollista määrittää, mikä on tartuntaprosessin tulos - toipuminen, kuljetus, kroonisuus.
Tärkeimmät tartuntatautien aiheuttajat ovat tällä hetkellä opportunistiset mikro-organismit, joiden roolia taudin synnyssä on vaikea todistaa. Siksi on tärkeää arvioida eristetyn opportunistisen mikroflooran patogeenisyys.
Ihmiskehossa asuu niin sanotun normaalin mikroflooran edustajat, joiden laadullisen ja määrällisen koostumuksen muutoksella voi olla merkitystä dysbioottisten häiriöiden kehittymisessä. Siksi on mahdollista suorittaa tutkimus ihmiskehon mikrofloorasta - normaalissa ja dysbioosissa, mikrobien välisissä suhteissa eubioottien hoidon aikana.
Kaikki terveydenhuoltolaitokset ovat vaarassa sairastua sairaalainfektioihin. Sen diagnosointi, taudinaiheuttajan määrittäminen, tartuntalähteen tunnistaminen, kantojen identiteetin todistaminen on olennainen osa bakteriologisen laboratorion työtä (3).
Mikrobiologian nykyiselle kehitysvaiheelle on ominaista patologisten tilojen muodostumismekanismien tutkimuksessa tehdyt uudet löydöt. Tärkeimmät niistä ovat bakteerien olemassaolon tosiasian selvittäminen ihmiskehossa osana erilaisia ​​​​yhteisöjä, joita kutsutaan yhteisesti biofilmeiksi, ja mikrobien epäsuoran vaikutuksen tunnistaminen ihmiskehoon. Biofilmeissä olevien bakteerien ominaisuudet eroavat eristettyjen solujen ominaisuuksista, mikä vaikuttaa kaikkiin mikrobien ja ympäristön vuorovaikutuksiin, mukaan lukien immuunipuolustustekijät ja mikrobilääkkeet (4,5).
Biofilmi on hyvin organisoitu, vuorovaikutuksessa oleva mikro-organismien yhteisö (Quorum sensing). 99 % luonnollisten ekosysteemien bakteereista ja 80 % tartuntatautien bakteereista esiintyy biokalvon muodossa.

Biofilmi sitoo soluja, orgaanisia ja epäorgaanisia substraatteja, lisää bakteerien kiinnittymistä epiteeliin ja mahdollisiin pintoihin (elävää ja ei-elävää alkuperää), vähentää antibioottihoidon tehokkuutta ja auttaa bakteereja selviytymään muuttuvassa ympäristössä. Biofilmissä olevat mikro-organismit ovat vastustuskykyisempiä sekä antibakteeristen lääkkeiden että ihmiskehon epäspesifisen infektionvastaisen suojan tekijöille.
Bakteerien antibioottiresistenssin lisäämismekanismit biofilmeissä liittyvät antibioottien rajalliseen tunkeutumiseen sen läpi, bakteerien jakautumisnopeuden hidastumiseen, jonka seurauksena antibioottien toiminnan kohteet vähenevät, sekä geneettisiin muutoksiin biofilmissä säilyvissä bakteereissa. .
Bakteriologisella menetelmällä voidaan tutkia mikrobin suojautumismekanismeja elimistön immuunijärjestelmältä, sen selviytymisstrategiaa makro-organismissa - pysyvyyttä. Mikrobeilla on suojamekanismit ihmisen immuunijärjestelmää vastaan ​​- anti-lysotsyymi, anti-komplementaarinen, anti-laktoferriiniaktiivisuus.
Siten tällä hetkellä bakteriologinen diagnostinen menetelmä mahdollistaa patogeenisten bakteerien elintärkeän aktiivisuuden monia näkökohtia, niiden kehittymisen, selviytymisen ja suppression mekanismeja.

Kirjallisuus

1. Tets V.V. Mikro-organismit ja antibiootit. Ihon, pehmytkudosten, luiden ja nivelten tulehdukset. - Pietari: KLE T, 2006. - 128 s.
2. Käytännön opas infektioita estävään kemoterapiaan /Toim. L. S. Strachunsky, Yu. B. Belousov, S. N. Kozlov. Smolensk: MACMAH, 2007. - 464 s.
3. Rudnov V.A. Pseudomonas aeruginosa -infektion nykyaikainen kliininen merkitys ja sen hoidon mahdollisuus tehohoitoyksiköiden potilailla Infektio ja antimikrobinen hoito 2002. - V. 4, nro 3
4. Sidorenko S.V. Bakteeribiofilmien rooli ihmisen patologiassa Infektiot kirurgiassa. 2004. - V. 2, nro 3. - S. 16-20.
5. Anwar H., Strap J.L., Costerton J.W. Staphylococcus aureuksen biosolujen hävittäminen tobramysiinillä ja kefaleksiinilla. // Voi. J. Microbiol. 1992. - V. 38. - P. 618-625.

Mikrobiologisen diagnostiikan päämenetelmä ja mikrobiologian "kultastandardi" on bakteriologinen menetelmä.

Bakteriologisen menetelmän tarkoitus koostuu patogeenin puhtaan viljelmän eristämisestä testimateriaalista, puhtaan viljelmän keräämisestä ja tämän viljelmän tunnistamisesta joukon ominaisuuksien perusteella: morfologinen, värillinen, kulttuurinen, biokemiallinen, antigeeninen, patogeenisyyden, toksisuustekijöiden ja sen herkkyyden määrittämisen perusteella. mikrobilääkkeille ja bakteriofageille.

Bakteriologinen tutkimusmenetelmä sisältää:

1. testimateriaalin siirrostaminen ravintoalustaan

2. puhtaan kulttuurin eristäminen

3. mikro-organismien tunnistaminen (lajiin kuulumisen määrittäminen).

Aerobisten ja anaerobisten bakteerien puhdasviljelmien eristäminen ja tunnistaminen sisältää seuraavat tutkimukset:

Vaihe I (työskentely alkuperäisellä materiaalilla)

Tarkoitus: saada eristettyjä pesäkkeitä

1. Alustava mikroskopia antaa likimääräisen kuvan mikrofloorasta

2. Materiaalin valmistelu tutkimusta varten (laimennus isotonisella NaCl-liuoksella jne.)

3. Kylvö tiheään ravintoalustaan ​​eristettyjen pesäkkeiden saamiseksi

4. Inkubointi optimaalisessa lämpötilassa, useimmiten 37°C, 18-24 tuntia

II vaihe

Tarkoitus: puhtaan kulttuurin saaminen

1. Makroskooppinen tutkimus siirtokuntia läpäisevässä ja heijastuneessa valossa (pesäkkeiden koon, muodon, värin, läpinäkyvyyden, koostumuksen, rakenteen, ääriviivan, pinnan ominaispiirteitä).

2. Eristettyjen pesäkkeiden mikroskooppinen tutkimus

3. Aerotoleranssin testaus (tiukkojen anaerobien esiintymisen varmistamiseksi testimateriaalissa).

4. Tietyille lajeille ominaisten pesäkkeiden kylvö puhtaaseen kasvualustaan ​​tai elektiiviseen kasvualustaan ​​ja inkubointi optimaalisissa olosuhteissa.

Vaihe III

Tarkoitus: Eristetyn puhdasviljelmän tunnistaminen

1. Eristetyn viljelmän tunnistamiseksi biologisten ominaisuuksien kompleksin perusteella tutkitaan seuraavaa:

morfologia ja sävyominaisuudet

kulttuuriset ominaisuudet (kasvun luonne ravintoalustalla)

biokemialliset ominaisuudet (mikro-organismien entsymaattinen aktiivisuus, glykolyyttinen, proteolyyttinen ja muu aktiivisuus)

Serologiset ominaisuudet (antigeeniset)

Virulentit ominaisuudet (kyky tuottaa patogeenisyystekijöitä: toksiineja, entsyymejä, puolustus- ja aggressiotekijöitä)

patogeenisuus eläimille

fagolisoituvuus (herkkyys diagnostisille bakteriofageille)

herkkyys antibiooteille

Muut yksittäiset kiinteistöt

Vaihe IV (päätelmä)

Tutkittujen ominaisuuksien perusteella tehdään johtopäätös eristetystä viljelmästä

Tutkimuksen ensimmäinen vaihe. Patologisen materiaalin tutkimus alkaa mikroskopialla. Värjätyn natiivimateriaalin mikroskopia mahdollistaa suunnilleen tutkitun kohteen mikrobimaiseman koostumuksen, mikro-organismien joidenkin morfologisten piirteiden selvittämisen. Natiivimateriaalin mikroskopiatulokset määräävät suurelta osin jatkotutkimuksen kulun, ja sen jälkeen niitä verrataan ravintoalustoille inokulaatiossa saatuihin tietoihin.

Kun näytteessä on riittävästi patogeenisiä mikro-organismeja, siirrostus suoritetaan tiheään ravintoalustaan ​​(eristettyjen pesäkkeiden saamiseksi). Jos testimateriaalissa on vähän bakteereja, siirrostus suoritetaan nestemäisille ravinnerikastusalustalle. Ravintoalustat valitaan mikro-organismien vaatimusten mukaan.

Mikro-organismien viljely on mahdollista vain, kun luodaan optimaaliset olosuhteet niiden elintärkeälle toiminnalle ja noudatetaan sääntöjä, jotka sulkevat pois testimateriaalin saastumisen (vieraiden mikrobien aiheuttama vahingossa tapahtuva kontaminaatio). Koeputkessa, pullossa tai petrimaljassa voidaan luoda keinotekoisia olosuhteita, jotka sulkevat pois muiden lajien aiheuttaman viljelykontaminaation. Kaikkien ruokailuvälineiden ja ravintoalustojen on oltava steriilejä ja mikrobimateriaalin inokuloinnin jälkeen suojattuja ulkoiselta kontaminaatiolta, joka saadaan aikaan tulppien tai metallikorkkien ja -kansien avulla. Manipulaatiot testimateriaalilla tulisi suorittaa alkoholilampun liekkivyöhykkeellä materiaalin saastumisen välttämiseksi ulkoisesta ympäristöstä sekä turvallisuusmääräysten noudattamiseksi.

Materiaalin siirrostus ravintoalustaan ​​tulee tehdä viimeistään 2 tunnin kuluessa niiden keräämisestä.

Tutkimuksen toinen vaihe. Pesäkkeiden tutkimus ja puhdasviljelmien eristäminen. Päivän inkuboinnin jälkeen pesäkkeet kasvavat levyillä, ja ensimmäisellä vedolla kasvu on jatkuvaa, ja seuraavassa - eristettyjä pesäkkeitä. Pesäke on kokoelma saman lajin mikrobeja, jotka ovat kasvaneet yhdestä solusta. Koska materiaali on useimmiten mikrobien seos, kasvaa monen tyyppisiä pesäkkeitä. Erilaiset pesäkkeet merkitään lyijykynällä, rajaamalla ne ympyrällä pohjan puolelta ja tutkimalla niitä (taulukko 12). Ensinnäkin tutki pesäkkeitä paljaalla silmällä: makroskooppisia merkkejä. Astiaa tarkastellaan (avaamatta) pohjasta läpäisevässä valossa, pesäkkeiden läpinäkyvyys todetaan (läpinäkyvä, jos se ei vangitse valoa; läpikuultava, jos se vangitsee valoa osittain; läpinäkymätön, jos valo ei kulje pesäkkeen läpi), mittaa (mm) pesäkkeiden koko. Sitten he tutkivat pesäkkeitä kannen sivulta, panevat merkille muodon (säännöllinen pyöreä, epäsäännöllinen, tasainen, kupera), pinnan luonteen (tasainen, kiiltävä, himmeä, karkea, ryppyinen, märkä, kuiva, limainen), värin (väritön, värillinen).

Taulukko 12. Kaavio pesäkkeiden tutkimisesta

Huomautus: Kohteita 5-7 tutkitaan pienisuurennuksella mikroskoopilla tai suurennuslasin alla.

Näet eron pesäkkeiden välillä vielä paremmin, kun lähennät niitä. Tätä varten suljettu astia asetetaan ylösalaisin esinepöydälle, jäähdytin lasketaan hieman alas, käytetään pientä objektiivisuurennusta (x8), kulhoa liikutetaan, pesäkkeissä tutkitaan mikroskooppisia merkkejä: reunan luonne ( sileä, aaltoileva, sahalaitainen, särmäinen), rakenne (homogeeninen, rakeinen, kuitumainen, homogeeninen tai erilainen keskeltä ja reunalta).

Seuraavaksi tutkitaan pesäkkeistä peräisin olevien mikrobisolujen morfologiaa. Tätä varten kunkin merkityn pesäkkeen osasta tehdään sivelynäytteet, jotka on värjätty Gramin mukaan. Kun otat pesäkkeitä, kiinnitä huomiota koostumukseen (kuiva, jos pesäke murenee ja otetaan vaikeasti; pehmeä, jos se otetaan helposti silmukalle; limainen, jos pesäke kurkottaa silmukkaa; kova, jos osa pesäkettä silmukka ei ota, vain koko pesäke voidaan poistaa).

Näytteitä tarkasteltaessa todetaan, että pesäkettä edustaa yhden tyyppinen mikrobi, joten puhtaat bakteeriviljelmät voidaan eristää. Tätä varten tutkituista pesäkkeistä kylvetään uudelleen kaltevalle agarille. Kun pesäkkeistä kylvetään uudelleen, on huolehdittava siitä, että otat täsmälleen aiotut pesäkkeet koskematta lähellä olevien pesäkkeiden silmukkaan. Putket allekirjoitetaan ja niitä inkuboidaan termostaatissa 37 °C:ssa 24 tuntia.

Tutkimuksen kolmas vaihe. Eristetyn kulttuurin tunnistaminen. Mikrobien tunnistaminen - materiaalista eristetyn viljelmän systemaattisen sijainnin määrittäminen lajiin ja varianttiin. Ensimmäinen ehto tunnistamisen luotettavuudelle on kulttuurin ehdoton puhtaus. Mikrobien tunnistamiseen käytetään sarjaa merkkejä: morfologinen (muoto, koko, siipien esiintyminen, kapselit, itiöt, keskinäinen asettuminen siivilässä), tintoriaalinen (suhde Gram-värjäykseen tai muihin menetelmiin), kemiallinen (guaniinin + sytosiinin suhde DNA-molekyylissä), kulttuurinen (ravitsemukselliset tarpeet, viljelyolosuhteet, kasvun nopeus ja luonne erilaisilla ravintoalustoilla), entsymaattinen (erilaisten aineiden pilkkoutuminen väli- ja lopputuotteiden muodostumisen myötä), serologinen (antigeeninen rakenne, spesifisyys), biologinen (virulenssi eläimille, toksisuus, allergeenisuus, antibioottien vaikutus jne.).

Biokemiallista erilaistumista varten tutkitaan bakteerien kykyä fermentoida hiilihydraatteja muodostaen välituotteita, kykyä hajottaa proteiineja ja peptoneja sekä tutkia redox-entsyymejä.

Sakkarolyyttisten entsyymien tutkimukseen eristetyt viljelmät ympätään koeputkiin puolinestemäisellä väliaineella, joka sisältää laktoosia, glukoosia ja muita hiilihydraatteja ja moniarvoisia alkoholeja. Puolinestemäiselle alustalle siirrostus tehdään ruiskuttamalla alustan syvyyteen. Ruiskuttamalla kylvetty putki väliaineen kanssa pidetään kulmassa, tulppa poistetaan ja putken reuna poltetaan. Materiaali otetaan steriilillä silmukalla ja sillä lävistetään ravintoalustan pylväs lähes pohjaan asti.

Proteolyyttisten entsyymien määrittämiseen eristetty viljelmä ympätään peptoniveteen tai BCH:hen. Tätä varten he ottavat koeputken, jossa inokulaatio on lähempänä itseään, ja koeputken väliaineella - kauempana itsestään. Molemmat koeputket avataan samanaikaisesti, niiden tulpat otetaan kiinni pikkusormella ja kämmenen reunalla, putkien reunat poltetaan, pieni viljelmä otetaan talteen kalsinoidulla jäähdytetyllä silmukalla ja siirretään toiseen koeputkeen, hierretään nestemäisessä väliaineessa koeputken seinämään ja pestään pois alustalla.

Kylvössä ja uudelleenkylvössä on kiinnitettävä huomiota steriiliyssääntöjen noudattamiseen, jotta ne eivät saastuttaisi viljelykasveja vieraalla mikroflooralla ja eivät myöskään saastuttaisi ympäristöä. Putket merkitään ja asetetaan termostaattiin inkuboitavaksi 37 °C:n lämpötilassa vuorokauden ajan.

Johtopäätös

Tulosten kirjanpito. Tutkimuksen johtopäätös. Tunnistuksen tulokset huomioidaan ja saatujen tietojen kokonaisuuden perusteella, käsikirjassa (Bergyn opas, 1994-1996) kuvatun tyyppikantojen luokituksen ja ominaisuuksien perusteella määritetään eristettyjen viljelmien tyyppi.

Käytännön oppitunti numero 2.

Aihe: Bakteriologinen menetelmä tartuntatautien diagnosointiin.

Tarkoitus: Tutkia bakteerien puhdasviljelmien eristysmenetelmiä ja hallita tartuntatautien diagnosointimenetelmää.

Kysymyksiä omaan valmistautumiseen:

1. Säännöt testimateriaalin keräämisestä ja kuljettamisesta bakteriologista tutkimusta varten.

2 Säännöt bakteriologiseen tutkimukseen lähetteen antamisesta.

3. Menetelmät mikro-organismien puhtaiden viljelmien eristämiseksi.

4. Bakteriologinen diagnostinen menetelmä. Kohde. Tasot. diagnostinen arvo.

Aiheen peruskäsitteet.

Bakteriologinen menetelmä on tärkein menetelmä tartuntatautien diagnosoinnissa. Sen ydin on määrittää tartuntatautien tyyppi, joten bakteriologisen menetelmän tulosten perusteella voidaan tehdä etiologinen (lopullinen) diagnoosi. Menetelmän suurin haitta on tutkimuksen kesto - 3-5 päivää ja joissakin tapauksissa jopa enemmän.

Bakteriologisen menetelmän onnistuminen riippuu pitkälti esivaiheesta, mukaan lukien testimateriaalin näytteenotosta ja sen kuljetuksesta sekä lähetteen suunnittelusta bakteriologiseen laboratorioon. Tässä tapauksessa on noudatettava useita sääntöjä.

Testimateriaalin näytteenotto on suoritettava ennen antibioottihoidon aloittamista tai 8-10 tuntia viimeisen annoksen jälkeen. Jotta vältetään näytteen saastuminen ympäristön mikroflooralla, on noudatettava tiukinta aseptista. Käytä tätä varten steriiliä materiaalia: a) vanupuikkoja materiaalin ottamiseksi haavasta, limakalvoilta (silmät, nielu, nenä); b) lankasilmukka materiaalia varten emättimestä, peräaukosta; c) ruisku veren, mädan ottamista varten; d) steriilit astiat virtsan, ysköksen ja ulosteiden keräämiseksi suoraan siihen. Vastaanotetun materiaalin kuljetus tulee suorittaa mahdollisimman pian (2-3 tuntia) erityisissä laatikoissa tai laatikoissa. Lähete on liitetty kliiniseen näytteeseen saateasiakirjana. Se sisältää mikrobiologisen tutkimuksen suorittamiseen tarvittavat perustiedot:

potilaan sukunimi, nimi, sukunimi, ikä; taudin ehdotettu diagnoosi; aiempi antimikrobinen hoito; materiaalin luonne; materiaalin ottamisen päivämäärä ja kellonaika; tutkimuksen tarkoitus; hoitolaitoksen nimi, osaston numero, osasto; hoitavan lääkärin allekirjoitus.

Bakteriologinen menetelmä suoritetaan kahdessa vaiheessa (kuva 2.1):

Ensimmäisessä vaiheessa testimateriaali kylvetään kiinteälle tai nestemäiselle ravintoalustalle, viljelyominaisuudet arvioidaan, epäilyttävät pesäkkeet valitaan ja seulotaan vino-agarilla. Tunnistusvaihe sisältää pakollisen tutkimuksen eristetyn puhdasviljelmän ominaisuuksista ja rakenteesta sekä lisätutkimuksia antibioottiherkkyyden, faagiherkkyyden, faagityypin määrittämiseksi, patogeenisyyden ja pysyvien ominaisuuksien tutkimuksen.

Opiskelijoiden itsenäinen työskentely luokkahuoneessa.

Työ 1

Tarkoitus: Hallita bakteriologinen diagnoosimenetelmä.

Tehtävä. Bakteriologiseen laboratorioon saatiin testimateriaali (ulosteet) potilaalta, jolla oli alustava diagnoosi: "Ruokamyrkytys?". Materiaalin mikroskooppinen tutkimus paljasti grampositiivisia kokkeja ja gramnegatiivisia sauvoja.

Eristä puhtaat mikro-organismiviljelmät, suorita niiden tunnistaminen. Selvitä ruokamyrkytyksen etiologia.

Metodologia:

Bakteriologisen menetelmän kaikki vaiheet suoritetaan ehdollisesti yhden oppitunnin aikana: opiskelija suorittaa seuraavan vaiheen käsittelyt, vie materiaalin termostaattiin ja saa välittömästi valmiin tuloksen seuraavaa tutkimuksen vaihetta varten.

1. Testimateriaalin kylvö agarille petrimaljassa mekaanisella erotuksella yksittäisten pesäkkeiden saamiseksi (1. päivä).

Steriloidaan polttimen liekissä ja jäähdytetyssä silmukassa, ota kylvömateriaali ja tuo se kuppiin avaamalla hieman kantta. Ravintoalustan pinnalle materiaali jakautuu silmukassa seuraavasti: kupin reunaan muodostuu toistuvin vedoin soikea alue, jolle jää merkittävä osa materiaalista, sitten tehdään rinnakkaisia ​​vetoja 0,5 cm:n etäisyydellä kupin reunasta toiseen. Kylvössä silmukka tulee pitää yhdensuuntaisena agarin kanssa, jotta se ei naarmuunnu (kuva 2.2.a). Seulonnan jälkeen silmukka poistetaan maljasta ja poltetaan heti liekissä, samalla kun petrimalja suljetaan kannella. Kuppi merkitään ja asetetaan ylösalaisin termostaattiin vuorokaudeksi.

2. Kasvaneiden yhdyskuntien kulttuuriominaisuuksien tutkimus (2. päivä).

Päivää myöhemmin, kun kylvö on oikein, yksittäiset pesäkkeet kasvavat viimeisillä vedoilla (kuva 2.2.b). Erottele erityyppiset pesäkkeet koon, värin (kuva 2.3.a), muodon, läpinäkyvyyden, pinnan luonteen (tasainen, karkea) ja reunan (sileä, rosoinen) (kuva 2.3.b) perusteella. Osasta pesäkkeitä materiaalista valmistetaan sively, värjätään Gramin mukaan ja mikroskooppisesti. Loput tutkittavasta pesäkkeestä kierretään koeputkeen ravinneagarin vinossa, jotta saadaan puhdas viljelmä. Kylvö asetetaan termostaattiin vuorokaudeksi.

3. Eristetyn puhdasviljelmän tunnistaminen (3. päivä).

Päivää myöhemmin kasvatettu puhdasviljelmä tunnistetaan lajin pääominaisuuksien perusteella. Morfologiaa tutkitaan mikroskoopilla puhtaasta viljelmästä otetusta näytteestä. Puhdas viljelmä kylvetään testijärjestelmille (stafitest, enterotest) aktiivisuuden tutkimiseksi. Tätä varten fysiologiseen suolaliuokseen valmistetaan 1 miljardin osa bakteerisuspensiota, jonka jälkeen 0,1 ml suspensiota lisätään testijärjestelmän kuoppiin annostelu- tai Pasteur-pipetteillä. Tabletti asetetaan termostaattiin vuorokaudeksi.

4. Eristettyjen mikro-organismien tyypin määrittäminen (4. päivä).

Arvioi 24 tunnin kuluttua biokemiallisen aktiivisuuden tulokset muuttamalla indikaattorin väriä kaivossa ja vertaa niitä testijärjestelmän taulukoihin. Eristettyjen puhdasviljelmien ominaisuuksien tutkimuksen tulosten mukaan määritetään mikro-organismien tyypit, mikä on yksi bakteriologisen diagnostisen menetelmän perimmäisistä tavoitteista. Burgeyn determinanttia käytetään.

Tulos dokumentoidaan tutkimusprotokollan muodossa.

TUTKIMUSPROTOKOLLA.