Фиш анализ при раке молочной железы. Что такое фиш анализ при раке молочной железы? Что он показывает? Фиш исследование при раке

Определение HER-2 статуса опухоли методом FISH - исследование предрасположенности к развитию опухоли и подбор своевременного адекватного лечения при раке молочной железы (РМЖ) или раке желудка (РЖ).

HER-2 (HER-2/neu) - human epidermal growth factor receptor-2 - это белок, который может влиять на рост раковых клеток. Он создается специальным геном, который называется ген HER-2/neu. HER-2 является рецептором для определённого фактора роста, который называется человеческим эпидермальным фактором роста, естественным образом существующим у человека. Когда человеческий эпидермальный фактор роста прикрепляется к рецепторам HER-2 на раковых клетках груди, он может стимулировать рост и деление этих клеток. В здоровой ткани HER-2 передаёт сигналы, регулирующие пролиферацию и выживаемость клеток, но гиперэкспрессия HER-2 может обусловить злокачественную трансформацию клеток.

Гиперэкспрессия HER-2 при некоторых подтипах РМЖ ведёт к усилению пролиферации и ангиогенеза, нарушению регуляции апоптоза (генетически запрограммированного самоуничтожения клеток). Показано, что при раке молочной железы гиперэкспрессия этого рецептора в ткани опухоли ассоциирована с более агрессивным течением болезни, повышенным метастатическим потенциалом опухоли и менее благоприятным прогнозом. Открытие связи гиперэкспрессии HER-2 с неблагоприятным прогнозом РМЖ привело к поиску таких подходов к лечению, которые направлены на специфическое блокирование онкогена HER-2/neu (таргетная анти-HER2-терапия).

Рак молочной железы (РМЖ) - злокачественная опухоль железистой ткани молочной железы. РЖМ занимает первое место среди всех злокачественных заболеваний у женщин.

В зависимости от наличия биологических маркёров опухоли - экспрессии гормональных рецепторов (эстрогена и/или прогестерона), экспрессии HER-2 - выделяют гормон-рецептор-положительный, HER-2-положительный и тройной негативный РМЖ.

HER-2/neu-положительные (HER-2+) типы рака молочной железы отличаются высокой экспрессией белка HER-2/neu.
HER=2/neu-негативные (HER-2-) типы рака молочной железы отличаются низкой экспрессией или отсутствием белка HER-2/neu.
Считается, что у одной из пяти женщин с раком груди опухоль является HER-2-положительной. Большинство раковых опухолей молочной железы являются гормонально-зависимыми: эстрогены и прогестерон оказывают на них стимулирующий эффект (пролиферативный и неопластический). При HER-2-положительном раке молочной железы на поверхности опухолевых клеток присутствует избыток HER-2-рецепторов. Данное явление носит название «положительный HER-2-статус» и диагностируется у 15–20% женщин, страдающих РМЖ.

HER-2 - рецептор эпидермального фактора роста человека 2-го типа, который присутствует в тканях и в норме, участвуя в регуляции деления и дифференцировки клеток. Его избыток на поверхности опухолевых клеток (гиперэкспрессия) предопределяет быстрый неконтролируемый рост новообразования, высокий риск метастазирования, низкую эффективность некоторых видов лечения. HER-2-положительный РМЖ является особенно агрессивной формой данного заболевания, поэтому точное определение HER-2-статуса имеет ключевое значение для выбора тактики лечения.

Рак желудка (РЖ) - злокачественная опухоль, происходящая из эпителия слизистой оболочки желудка.

РЖ занимает 4-е место в структуре онкологической заболеваемости и 2-е место в структуре онкологической смертности в мире. Заболеваемость РЖ у мужчин в 2 раза выше, чем у женщин. Россия относится к регионам с высоким уровнем заболеваемости РЖ и смертности от данного заболевания. Диагностика РЖ на ранних стадиях затруднена из-за длительного бессимптомного течения заболевания. Часто РЖ выявляют на поздних стадиях, когда 5-летняя выживаемость не превышает 5–10%, а единственным методом лечения остаётся химиотерапия.

Основным методом лечения РЖ является хирургический. Однако у большинства пациентов на момент постановки диагноза определяется распространённый опухолевый процесс, что делает невозможным выполнение радикальной операции и требует проведения системной лекарственной терапии. Проведение химиотерапии статистически достоверно увеличивает общую выживаемость больных метастатическим РЖ, улучшая качество их жизни.

Онкоген HER-2 (erbB-2) был первоначально идентифицирован в опухолях молочной железы. Амплификация и гиперэкспрессия данного гена является относительно специфическим событием для карцином молочной железы и практически не встречается в опухолях других локализаций. Рак желудка представляется одним из немногих исключений: активация HER-2 отмечается примерно в 10–15% злокачественных новообразований этого органа и коррелирует с агрессивным течением заболевания.

Гиперэкспрессия HER-2 является фактором неблагоприятного прогноза. По данным разных исследований, амплификация гена HER-2 у больных РЖ коррелирует с низкими показателями общей выживаемости.

Для оценки HER-2-статуса при РЖ и РМЖ используют FISH метод.

FISH - исследования позволяет определять качественные и количественные изменения хромосом для диагностики злокачественных заболеваний крови и солидных опухолей.

Сегодня во всём мире широко применяются исследования методом FISH.

Метод FISH (флуоресцентная гибридизация in situ) - изучение числа HER-2/neu-генов внутри раковых клеток.

Показания:

• рак молочной железы - в целях прогноза и подбора терапии;
• рак желудка - в целях прогноза и подбора терапии.

Необходимы гистологический протокол и иммуногистохимический протокол, стекло ИГХ.

Интерпретация результатов
Результаты FISH-теста выражаются следующим образом:

1. Положительный (повышенное содержание, есть амплификация гена HER-2):

• HER-2-положительный рак молочной железы;

• HER-2-отрицательный рак молочной железы.

Поскольку FISH-тест позволяет выявить генетические отклонения, вызывающие рак, он является эффективным методом диагностики некоторых видов рака. Тест также используется для подтверждения поставленного диагноза и позволяет получить дополнительную информацию о возможном исходе болезни и целесообразности применения химиотерапии.

Например, у пациентов с раком молочной железы FISH-тест ткани, взятой при биопсии, помогает определить наличие в клетках копий HER2-гена.

Клетки с копиями HER2-гена имеют большее количество HER2-рецепторов, которые получают сигналы, стимулирующие рост раковых клеток в молочной железе. Поэтому для пациентов с копиями HER2-гена целесообразно применение герцептина (трастузумаба) - средства, угнетающего способность HER2-рецепторов принимать сигналы.

Из-за высокой стоимости и относительной недоступности FISH-теста чаще применяют другой тест на выявление рака молочной железы - иммуногистохомию (ИГХ).

Во врачебных кругах ведутся споры относительно высокой эффективности FISH-теста по сравнению со стандартными тестами. Однако благодаря техническому прогрессу FISH-тест становится все дешевле и доступнее в разнообразных клинических условиях.

Как работает FISH-тест

При проведении FISH-теста на образце ткани пациента используются флуоресцентные метки, которые связываются только с определенными участками хромосом. Затем с помощью флуоресцентного микроскопа определяют участки хромосом, с которыми связались флуоресцентные зонды, и наличие возможных отклонений, провоцирующих развитие рака.

В раковых клетках могут обнаруживаться следующие отклонения:

• транслокация - перенос участка хромосомы в новое положение на той же или другой хромосоме;
• инверсия - разворот участка хромосомы на 180 градусов при сохранении соединения с самой хромосомой;
• делеция - утрата части хромосомы;
• дупликация - удвоение участка хромосомы, приводящее к избыточному содержанию копий гена в клетке.

Транслокации помогают диагностировать некоторые виды лейкемии, лимфомы и саркомы. Наличие дупликации в раковых клетках молочной железы помогает врачу подобрать оптимальное лечение.

Преимущество FISH-теста перед стандартными цитогенетическими тестами (исследующими генетический состав клеток) состоит в том, что он позволяет определить даже самые небольшие генетические изменения, которые нельзя рассмотреть при помощи обычного микроскопа.

Другим важным отличием FISH-теста является возможность его проведения на клетках, которые еще не начали активно развиваться. Другие тесты выполняются на клетках только после их роста в лабораторных условиях в течение двух недель, поэтому весь процесс может занимать до трех недель, а результаты FISH-теста становятся известны уже через несколько дней.

Примеры FISH-теста для диагностики рака

Хотя FISH-тест чаще всего применяется для анализа генетических отклонений при раке молочной железы, он также помогает получить важную информацию о других видах рака.

Например, при диагностике рака мочевого пузыря FISH-тест клеток мочи дает более точные результаты, чем тесты на атипичные клетки. Кроме того, он позволяет определить рецидив рака мочевого пузыря на 3-6 месяцев раньше.

FISH-тест также помогает обнаружить отклонения в хромосомах при лейкозе, включая клетки, свидетельствующие об агрессивной форме хронического лимфолейкоза (ХЛЛ). Пациентам с агрессивной формой ХЛЛ может требоваться срочное лечение, в то время как при менее агрессивных формах может быть достаточно наблюдения.

Споры о FISH-тесте

Не все эксперты согласны с тем, что FISH-тест является наиболее точным анализом для диагностики видов рака, восприимчивых к герцептину.

В 2010 году ученые из института Mayo (Ирландия) заявили, что менее дорогостоящий ИГХ-тест почти настолько же эффективен для определения восприимчивости к герцептину, как и FISH-тест.

Другие эксперты критикуют FISH-тест за невозможность обнаружения малых мутаций, таких как небольшие делеции, вставки и точечные мутации, а также за игнорирование некоторых инверсий.

Совершенствование FISH-теста

Несмотря на то что технология FISH-теста позволяет анализировать пока не все участки хромосом, она постоянно развивается в этом направлении.

Например, в 2007 году канадские ученые объявили о разработке чипа размером с предметное стекло микроскопа, который позволит проводить FISH-тест при помощи устройства, помещающегося в ладони.

Этот усовершенствованный тест, получивший название «FISH-тест на чипе», позволит получить результаты в течение одного дня и будет стоить дешевле других тестов

Рак молочной железы (РМЖ) - распространенный вид онкологии и, к сожалению, пока не разработано ни одного способа терапии, дающего полную гарантию излечения. Поэтому лучший выход для больного - профилактика и своевременная диагностика РМЖ. Фиш - анализ при раке молочной железы - это наиболее современный метод исследования, позволяющий направить лечение пациента по наиболее верному пути.

Несмотря на огромный накопленный опыт в изучении и лечении этого заболевания, медицина до сих пор не в состоянии указать внешние факторы, вызывающие злокачественную опухоль молочной железы. Ни один из известных канцерогенов не удается достоверно связать с возникновением этой болезни. Современные способы диагностики в целом дают неплохие результаты и позволяют с высокой точностью определить наличие либо отсутствие заболевания и стадию развития. Однако не все они дают исчерпывающую информацию, позволяющую точно назначить лечение.

1. Общий анализ крови - проверяется уровень лейкоцитов, скорость оседания эритроцитов и гемоглобин. Первые два показателя при онкологии увеличиваются, последний, наоборот, понижается. Однако этот анализ позволяет судить лишь о наличии определенных проблем в организме. Поставить точный диагноз «рак молочный железы» с его помощью нельзя, особенно на раннем этапе развития опухоли.
2. Биохимия - определяет уровень ферментов и электролитов, что позволяет судить о наличии метастазов. Однако эти данные не всегда объективны. Также это исследование показывает наличие в крови некоторых онкомаркеров, которые помогают отследить наличие раковой опухоли и ее дислокацию.
3. Спектральный анализ позволяет определить наличие рака с вероятностью более 90%, в том числе и на ранней стадии.Метод основан на изучении крови под инфракрасным излучением, что позволяет определить ее молекулярный состав.
4. Биопсия - производится путем забора образца ткани из груди и дальнейшего цитологического анализа, который определяет наличие раковых клеток и их количество, которое зависит от степени развития заболевания.
5. Генетический анализ определяет предрасположенность пациента к образованию рака груди.Он проводится путем обнаружения в крови определенных генов, отвечающих за передачу рака от поколения к поколению.

Однако новейшим и эффективным методом исследования на сегодняшний день является так называемый FISH (фиш) тест. Расшифровка аббревиатуры в переводе с английского звучит как «внутриклеточная флуоресцентная гибридизация».

Метод фиш - тестирование является относительно новым - он используется с 1980 года. Однако несмотря на сложность и высокую цену, он успел заслужить положительные отзывы как от врачей, так и от пациентов, которые благодаря ему успешно избавились от рака.

За рост клеток молочной железы в человеческом организме отвечает ген под названием HER2. Название в переводе с английского означает Человеческий Эстрогенный Рецептор - 2. В норме рецепторы этого гена вырабатывают HER2 - белок, который регулирует деление клеток железы. Раковая опухоль (как правило, это карцинома) при зарождении «обманывает» этот ген, заставляя его наращивать дополнительную ткань, которая будет использоваться опухолью для своего развития. Эта аномалия проявляется примерно в 30% случаев и характеризуется термином «амплификация».

Таким образом организм больного сам помогает развиваться онкологии. Если этот процесс не остановить, то даже самые современные и мощные методы лечения могут не помочь пациенту.

Исследование амплификации гена HER2 проводится обычно в два этапа:

• IHC (иммуногистохимический тест);
• непосредственно FISH - анализ (флуоресцентная гибридизация).

Под местным наркозом пациенту проводят биопсию - забор образцов тканей, которые отправляется в специализированную лабораторию.

Сначала обычно проводится иммуногистохимия - микроскопический анализ образца ткани раковой опухоли. Он определяет принципиальное наличие гена HER2 в опухолевой ткани. Это исследование значительно дешевле, чем фиш-тест, а также проще и быстрее проводится. Однако при этом оно не дает столь точных сведений.Результат определяется в цифрах от нуля до трех баллов. Если результат меньше либо равен единице, то ген HER2 в опухоли отсутствует и необходимости в дальнейшем исследовании нет. От двух до трех баллов - пограничное состояние, свыше трех - злокачественное образование находится в процессе роста и необходимо приступать ко второму этапу диагностики.

Фиш-исследование при раке молочной железы производится следующим образом: в кровь вводятся элементы молекул ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты), помеченные специальным красителем. Эти маркеры встраиваются в молекулы ДНК пациента и определяют, имеет ли место амплификация HER2 и каков ее уровень. Анализ проводится в реальном времени, врач сравнивает скорость деления гена в месте предполагаемой опухоли со скоростью деления обычного участка молочной железы.

При раке молочной железы FISH исследование может дать следующие результаты:

• реакция положительная - скорость деления гена HER2 в опухолевой ткани превосходит нормальную в два раза и выше,в таком случае необходима дополнительная терапия;
• реакция отрицательная - HER2 не участвует в процессе деления раковых клеток и, если опухоль все же имеется, этот ген не будет катализировать ее развитие.

Таким образом анализ позволяет определить неправильное поведение гена HER2 и скорректировать лечение, применив параллельно терапию, направленную на подавление этого гена. В настоящее время для этого применяется препарат Герцептин.

Если своевременно не провести фиш-тест или не обратить внимание на его результаты, у врача не будет данных о поведении HER2. В таком случае лечение будет назначено без учета возможной агрессивной деятельности этого гена. Скорее всего результата такая терапия не принесет - опухоль и далее будет агрессивно развиваться.

Кроме описанного выше, слежение за поведением гена HER2 дает онкологам понимание степени агрессивности опухоли и возможность спрогнозировать скорость ее роста и распространения. Это играет очень важную роль в построении лечения пациента. Определяется, есть ли необходимость в назначении тяжелого лечения (например, облучение или химия), или достаточно будет гормональной терапии, имеет ли смысл хирургическое вмешательство или оно необязательно.

Плюсы и минусы фиш-анализа

Как и любой другой метод диагностики, FISH-исследование имеет положительные и отрицательные стороны.

1. Исследование проводится быстро - результат бывает готов уже через несколько дней, в то время как другие способы диагностики занимают до нескольких недель. Этот момент бывает крайне важен в вопросе борьбы с онкологией.
2. Кроме исследования рака молочной железы, анализ позволяет узнать предрасположенность того или иного пациента к онкологии любого органа брюшной полости. Пациенту предоставляется подробный отчет, руководствуясь которым он может в дальнейшем проходить обследования для профилактики возможного развития рака.
3. В силу специфики фиш-анализа, при помощи его можно обнаружить самые незначительные генетические аномалии, которые не поддаются диагностике другими методами.
4. В отличие от некоторых других видов исследований, фиш-тест безопасен для пациента. Кроме биопсии, он не требует никаких дополнительных травмирующих воздействий.

Часть онкологов считают эффективность фиш-теста спорной. Они опираются на проведенные исследования, которые не выявили существенного преимущества этого метода перед более дешевым IHC-исследованием.

• дороговизна исследования;
• из-за того, что внедряемые в ДНК маркеры несколько специфичны, их нельзя применять на некоторых участках хромосом;
• анализ выявляет не все генетические повреждения, что может привести к диагностическим ошибкам.

В целом несмотря на критику, фиш-анализ является самым быстрым и точным из методов диагностики карциномы груди. Немаловажно и то, что он позволяет прогнозировать развитие и некоторых других видов онкологии.

Любой рак проще всего поддается лечению на ранних стадиях развития. К сожалению, по иронии судьбы, большинство из известных видов злокачественных образований крайне трудно диагностируются на ранних стадиях. Кроме того, многие из применяемых методов диагностики занимают много времени и не дают полностью объективной картины. Фиш-анализ не только дает самую точную картину по состоянию опухоли, но также позволяет уберечь пациента от разрушительных для организма форм лечения (например, химиотерапии), так как определяется степень агрессивности опухоли и, соответственно, вероятность возникновения метастазов.

Рак молочной железы нельзя недооценивать. Он может затронуть абсолютно всех – и молодых, и старых, и женщин, и мужчин. Чрезвычайная сложность лечения, высокая смертность, растущая динамика заболеваемости являются причиной повышенного внимания к этой проблеме со стороны медицины.

На сегодняшний день нет метода лечения, на 100% гарантирующего положительный исход болезни. Существующие методы трудоемки, дорогостоящи и способны нанести большой сопутствующий урон организму.

Это одно из тех заболеваний, про которое можно сказать, что лучшее лечение – это исключение факторов риска и своевременная диагностика.

Предрасположенность к раку молочной железы

Несмотря на то, что рак впервые был описан еще в XV веке до нашей эры и у ученых есть огромное количество информации, ее все равно не хватает для полного описания этиологии рака молочной железы.

Не найдены с достаточной достоверностью факторы внешней среды, влияющие на возникновение или развитие рака. Отдельные исследования, указывающие на тот или иной канцероген, не получают полноценного признания всего медицинского сообщества. Тем не менее, есть некоторая зависимость между раком груди и следующими обстоятельствами:

Одним из самых важных вышеперечисленных факторов является фактор возраста: с годами вероятность развития рака груди возрастает на порядки. В целом, сложность вопроса этиологии РМЖ обусловлена его генной природой. Неизвестно, почему вдруг происходит сбой и ткань молочной железы начинает бесконтрольное деление, затрагивая соседние ткани и приводя к метастазам по всему организму.

Но ученые сходятся в одном: современная жизнь гораздо больше располагает к раковым заболеваниям, чем прежде.

Так, указывается на большие дозы электромагнитного излучения, плохую экологию, пониженное содержание кислорода в городах, гиподинамию, стресс и пр. Нельзя не учитывать и значительно увеличившийся возраст жизни, ведь рак – это болезнь, приходящая, как правило, в зрелом возрасте.

Необходимые анализы

Возможности положительного исхода рака напрямую связаны со сроком начала лечения, поэтому отношение к диагностике должно быть самым серьезным.

В качестве диагностических методов обязательны:

• ежемесячная самостоятельная проверка (тест пальпацией);
• проверка у врача раз в квартал;
• УЗИ каждые полгода;
• МРТ ежегодно.

Маммография (рентгенологические исследование) не рекомендуется до 30 лет, поскольку в молодом возрасте воздействия радиации лучше избегать. При подозрениях на рак молочной железы, необходимо будет пройти такие анализы:

Метод FISH-исследования

FISH-исследование (FISH-анализ) – это цитогенетический метод, применяемый для изучения мембранного белка HER2 (Human Estrogen Receptor2). При проведении FISH-исследования используют ДНК-зонды, помеченные флуоресцентной краской. Эти зонды встраиваются в необходимые участки ДНК и способны количественно определить степень амплификации HER2. Поскольку исследование проводится в динамике, и гены продолжают делиться, можно оценить соотношение числа копий гена HER2 с числом копий нормально делящегося участка. Если оно больше или равно 2, результат считается HER2-положительным.

FISH-анализ играет важнейшую роль в прогнозировании рака и выбора принципа лечения. Так, амплификация или повышенная активность этого белка встречается в 30% случаев рака и требует особых методов лечения, направленных на угнетение его функции. В нормальном состоянии HER2 контролирует рост, деление и самовосстановление клеток. В случае заболевания раком этот белок производит слишком много мембранных рецепторов и дает клеткам команду на неконтролируемое деление. Так клетка превращается в раковую.

При положительном результате FISH-теста назначается лечение, направленное на супрессию HER2. Основным лекарством на сегодняшний день является Герцептин. Если не проводить этот тест или игнорировать его результаты, выбор метода лечения окажется неправильным, и рак перейдет в терминальную стадию. Кроме того, такой рак отличается более агрессивным развитием, чем HER2-негативный.

Вместе с FISH-анализом проводят имунногистохимический анализ. Это тоже генный способ исследования белка HER2, но в случае с иммуногистохимическим анализом выявляется количество белка HER2 не в клетке, а в конкретно взятом образце.

От фиш-метода он отличается стоимостью, но это на выходе дает менее информативные результаты, которые зависят от исследователя, лаборатории и применяемых критериев. Количество белка HER2 определяется по окраске исследуемого образца и оценивается по шкале от нуля до трех. В совокупности эти два метода являются золотым стандартом исследования HER2-статуса пациента.

Таким образом, несмотря на свой имидж, рак груди вполне поддается успешному лечению. В арсенале онкологов – все передовые достижения медицины. Все эти средства вполне доступны самому обычному гражданину.

Главное в успешном исходе болезни – своевременная сдача анализов на рак молочной железы, выбор правильного метода лечения и ранее его начало. Не стоит отчаиваться при отсутствии результатов, ведь положительный эмоциональный фон тоже оказывает значительное влияние на ход заболевания.

Этот способ сегодня используется для диагностики некоторых типов раковых опухолей, так как злокачественное перерождение клетки обусловлено изменениями ее генома. Соответственно, обнаружив характерные нарушения в генах, можно с высокой достоверностью отнести эту клетку к раковым. Кроме того, FISH-тест применяется и для подтверждения уже установленного диагноза, а также для получения дополнительных данных о возможности применения специфических химиопрепаратов с целью проведения процедуры химиотерапии при раке груди и уточнения прогноза заболевания.

Хорошим примером использования FISH-теста может послужить его проведение у пациентов с раковой опухолью молочной железы. С помощью этой методики ткани, полученные при биопсии, исследуются на наличие копий гена под названием HER-2. Если этот ген присутствует, это означает, что на поверхности клеток расположено большое число HER2-рецепторов. Они чувствительны к сигналам, стимулирующим развитие и размножение опухолевых элементов. В этом случае открывается возможность для эффективного использования трастузумаба – этот препарат блокирует активность HER2-рецепторов, а значит, угнетает рост опухоли.

Как проводится FISH-тест?

Эти отклонения в структуре хромосом бывают нескольких видов:
транслокация – перемещение части хромосомного материала на новую позицию в пределах той же самой или другой хромосомы;
инверсия – поворот части хромосомы на 1800 без отделения от основного ее тела;
делеция – потеря какого-либо хромосомного участка;
дупликация – копирование части хромосомы, что приводит к увеличению количества копий одного и того же гена, содержащегося в клетке.

Каждое их таких нарушений несет в себе определенные диагностические признаки и информацию. Так, например, транслокации могут свидетельствовать о наличии лейкемий, лимфом или сарком, а наличие генных дупликаций помогает назначить наиболее эффективную терапию.

В чем преимущество FISH-теста?

Еще одно преимущество FISH-теста заключается в том, что его можно использовать на материале, недавно полученном от пациента. Для стандартного цитогенетического анализа необходимо предварительно вырастить клеточную культуру, то есть дать клеткам пациента размножиться в лабораторных условиях. Этот процесс занимает около 2 недель, и еще неделя уходит на проведение обычного исследования, в то время как результат FISH-теста будет получен всего через несколько суток.

Неуклонное развитие медицинской науки постепенно приводит к удешевлению FISH-теста и все более широкому его вхождению в повседневную практику специалистов-онкологов.