Minimumskoncentrationen af ​​narkotiske stoffer, psykotrope stoffer, andre stoffer, der forårsager forgiftning i en biologisk genstand. Antibiotisk minimum hæmmende koncentration (MIC) Minimum hæmmende koncentration

En analyse af bakteriers evne til at formere sig og vokse på medier, der indeholder en aftagende koncentration af et lægemiddelstof, gør det muligt at bestemme den minimale hæmmende koncentration af et antibiotikum (MIC), som hæmmer bakteriers rolle in vitro (tabel 3(vet7) )). Værdien af ​​denne dosis bestemmer valget af et lægemiddelstof, der er i stand til at opnå lignende koncentrationer in vivo, og er grundlaget for at sammenligne organismens relative følsomhed i forhold til andre lægemidler. Det antages, at for at sikre effektiviteten af ​​eksponeringen skal koncentrationen af ​​lægemidlet i infektionsfokus være mindst lig med værdien af ​​den minimale hæmmende koncentration af antibiotikumet. På den anden side skal plasmalægemiddelkoncentrationen normalt være højere for at sikre tilstrækkelige vævskoncentrationer. Imidlertid kan en uberettiget stigning i doser af antimikrobielle stoffer for at opnå minimumsdosis af et antibiotikum, der hæmmer væksten af ​​en bestemt type bakterier in vitro, føre til ophobning af lægemidlet i modtagerens krop i toksiske doser.

Den "kritiske MIC" for et bestemt lægemiddelstof er den højeste rimeligt sikre lægemiddelkoncentration, der kan opnås med en klinisk acceptabel dosis og administrationsvej for lægemidlet (tabel 3(vet7)). MIC afhænger af den specifikke type bakteriekultur og den specifikke type lægemiddel. Samtidig er den kritiske MIC specifik for en bestemt modtager og et bestemt lægemiddelstof. Den kritiske MIC vil således være den samme for enhver organisme (tabel 3(vet7)). Den kritiske koncentration for en bestemt organisme kan variere afhængigt af dyrearten (på grund af forskelle i lægemidlets følsomhed eller distributionsmønstre) og det særlige laboratorium. Laboratoriet, der leverer dyrkningsmetoder og antibiotikafølsomhedsdata, bør kontaktes for kritiske værdier, der skal bruges i deres undersøgelser.

Baseret på in vitro fortyndingsdata klassificeres en bakterie som modtagelig (S) over for et bestemt lægemiddelstof, hvis MIC er væsentligt under den kritiske værdi af denne indikator. Væksten af ​​patogene mikroorganismer med en gennemsnitlig (MS) eller mellemliggende (IS) følsomhedsværdi hæmmes ved lægemiddelkoncentrationer, der nærmer sig den kritiske MIC-værdi. Sådanne bakterier kan forårsage negative reaktioner af patientens krop eller har ingen effekt på ham. MIC for resistente (R) bakterier overstiger den kritiske værdi af minimumsdosis. Det er usandsynligt, at den effektive værdi af koncentrationen i patientens krop af et sådant lægemiddel, der påvirker en bestemt mikroorganisme, opnås. I sådanne tilfælde kan risikoen for lægemiddelakkumulering ved toksiske doser også opveje den potentielle fordel ved behandlingen. Den kritiske værdi af minimumsdosis af ny generation af antibiotika, der hæmmer væksten af ​​bakterier, er i nogle tilfælde sværere at bestemme på grund af overgangen til professionel fleksibel mærkning af dosisområder.

Lægemiddelstoffer skal vælges således, at det ved anvendelse i overensstemmelse med et regime, der forhindrer ophobning af stoffet i toksiske doser, er muligt at opnå en maksimal plasmakoncentration af lægemiddelstoffet, der væsentligt overstiger MIC. Mange bakterier vil være modtagelige for virkningerne af et bestemt lægemiddel i koncentrationer, der ligger et godt stykke under den kritiske minimumsdosis. Forskellen mellem den kritiske værdi og den iboende MIC-værdi kan bruges til at sammenligne den relative effektivitet af forskellige antimikrobielle stoffer. For amikacin er den kritiske værdi f.eks. 32 µg/mL, så E. coli med en MIC-værdi på 2 µg/mL er relativt mere følsom over for amikacin end E. coli med en MIC-værdi på 16 µg/mL. Begge arter bør betragtes som følsomme (selvom den anden art kan anses for at have en gennemsnitlig følsomhed), men væksten af ​​bakterier af den første art synes at være hæmmet i højere grad. Hvis den samme art af E. coli med en MIC-værdi på 2 µg/mL i forhold til amoxicillin har en MIC-værdi på 16 µg/mL (med en kritisk værdi på 32 µg/mL), ser det ud til, at væksten af ​​denne mikroorganisme ville lettere hæmmes ved at anvende amikacin frem for amoxicillin, fordi MIC-værdien af ​​amikacin er længere væk fra dens kritiske MIC-værdi end MIC-værdien af ​​amoxicillin.

Selvom forskellene mellem MIC-værdierne for en specifik bakterieart og et specifikt lægemiddel (16 eller 32) kan virke ret store (især i forbindelse med plasma-lægemiddel cut-off), svarer denne forskel til kun én løsning i røret . Dette er et eksempel på faren ved at overvurdere følsomhedsdata. Hvis MIC-værdien for en bestemt organisme er tæt nok på den kritiske værdi, kan denne mikroorganisme på grund af mulige fortolkningsforskelle tildeles en følsomhedsgrad på "S" eller "MS" i et laboratorium og "R" i et andet . Sådanne mulige uoverensstemmelser i vurderingen er en af ​​grundene til, at brugen af ​​lægemidler, for hvilke en bestemt organisme har "MS"-følsomhed (eller hvis MIC-værdien er tæt på kritisk) bør undgås, medmindre koncentrationen af ​​lægemidlet på stedet for infektion kan langt overstige MIC-værdien bestemt ved in vitro-analyse. Et godt eksempel ville være brugen af ​​lægemidler, der udskilles af nyrerne til at behandle en urinvejsinfektion eller brugen af ​​lægemidler, der udskilles i galden til at behandle en galdevejsinfektion. Akkumulering af visse lægemidler af leukocytter (fluoroquinoloner, makrolider) kan også resultere i lægemiddelkoncentrationer i væv langt over MIC (eller kritisk MIC) på trods af lavere plasmakoncentrationer.

Bakteriers MIC kan ændre sig under efterfølgende infektioner med den samme bakterieart, og kan også ændre sig under selve infektionsprocessen. En stigning i MIC-værdien kan blot afspejle en anden tilgang til evaluering af resultaterne af analysen (især hvis forskelle kun påvises, når de fortyndes in vitro), men kan også betragtes som en konsekvens af udviklingen af ​​resistens over for et bestemt lægemiddelstof. I sådanne tilfælde kan forløbet af antimikrobiel behandling ændres ved at bruge et ekstra lægemiddel eller skifte til et nyt, mere effektivt lægemiddel. Ved polymikrobielle infektioner er MIC-værdien af ​​et bestemt lægemiddel sandsynligvis forskellig for hver inficerende bakterie. Det menes, at det er lettere at forhindre vækst af bakterier med en lav MIC-værdi for et bestemt lægemiddelstof end vækst af en mikroorganisme med en højere MIC-værdi for samme lægemiddelstof.

Tabel 2 i tillægget til proceduren for udførelse af en lægeundersøgelse for forgiftning (alkoholisk, narkotisk eller anden giftig), godkendt efter ordre fra Sundhedsministeriet i Den Russiske Føderation (udkast), "Tærskelværdier for indholdet af narkotiske stoffer, psykotrope stoffer, andre kemikalier og deres metabolitter, bestemt ved metoder, bekræftende analyse.

Bemærk: tærskelniveau- dette er minimumskoncentrationen af ​​et stof (dets metabolit) i en biologisk genstand, bestemt ved metoderne til foreløbig eller bekræftende analyse, ved påvisning af hvilken resultatet af undersøgelsen anses for positivt.

Faktisk kaldes en lignende tabel " Tærskelniveauer for bekræftende analyser i urinanalyse"gives i det centrale kemisk-toksikologiske laboratorium ved afdelingen for analytisk og retsmedicinsk toksikologi ved statens uddannelsesinstitution for højere professionel uddannelse First Moscow State Medical University opkaldt efter I.M. Sechenov (TsKhTL GOU VPO First Moscow State Medical University opkaldt efter I.M. Sechenov) af Sundhedsministeriet i Den Russiske Føderation af 30. august 2011 nr. 179-25 / 12I, hvor dog blandt andet koncentrationerne af phenobarbital (1 "000 ng / ml), andre stoffer fra gruppen af barbiturater (100 ng/ml) og cotinin (100 ng/ml) er angivet). Ifølge denne TsKhTL GOU VPO First Moscow State Medical University. I. M. Sechenov, i overensstemmelse med punkt 2 i ordren fra Ministeriet for Sundhed og Social Udvikling i Den Russiske Føderation af 27. januar 2006 nr. 40 "Om tilrettelæggelsen af ​​kemiske og toksikologiske undersøgelser i den analytiske diagnose af tilstedeværelsen hos mennesker krop af alkohol, narkotiske stoffer, psykotrope og andre giftige stoffer", udviklede og godkendte kravene til udførelse af kemisk-toksikologiske undersøgelser i den analytiske diagnose af tilstedeværelsen af ​​narkotiske stoffer, psykotrope og andre giftige stoffer i den menneskelige krop.

Især i henhold til paragraf 12 i informationsskrivelsen er undersøgelse af mundvæsken (spyt) uacceptabel, når der gennemføres en lægeundersøgelse af bilførere, tester elever, udfører kemiske og toksikologiske undersøgelser, når borgerne ansøger og i andre tilfælde fastlagt ved lov. , da det ikke tillader pålideligt at fastslå det faktum, at tilstedeværelsen i den menneskelige krop af narkotiske stoffer, psykotrope og andre giftige stoffer. Kontrollerede stoffer kan påvises i oral væske (spyt) inden for et tidsinterval, der ikke overstiger et par timer fra indtagelsesøjeblikket.

Krav til teknisk udstyr, der anvendes til at påvise narkotiske stoffer, psykotrope og andre giftige stoffer (deres metabolitter) i urinprøver under foreløbige kemiske og toksikologiske undersøgelser (Bilag nr. 1 til Retningslinjerne: Regler for udførelse af kemiske og toksikologiske undersøgelser for tilstedeværelse af kroppen af studerende i almene uddannelsesorganisationer ogr, samt uddannelsesorganisationer for videregående uddannelser med det formål at tidlig opdagelse af ulovligt forbrug af narkotiske stoffer og psykotrope stoffer af narkotiske stoffer, psykotrope og andre giftige stoffer (deres metabolitter) / Udvikler: Sammenslutningen af ​​specialister og organisationer for laboratorietjeneste "Federation Laboratory Medicine" redigeret af cheffreelancespecialist i analytisk og retsmedicinsk toksikologi fra Ruslands sundhedsministerium, doktor i kemi, professor B.N. Izotov og cheffreelancespecialist i klinisk om laboratoriediagnostik fra det russiske sundhedsministerium, doktor i medicinske videnskaber, professor A. G. Kochetov // Moskva, 2015)

Krav til tekniske midler, der anvendes til at påvise narkotiske stoffer, psykotrope og andre giftige stoffer (deres metabolitter) i urinprøver, når der udføres bekræftende kemisk-toksikologiske undersøgelser (bilag nr. 2 til ovenstående kilde)

På samme tid, når man forsvarer sager om administrative lovovertrædelser i henhold til artikel 12.8 og 12.27, del 3 i Den Russiske Føderations kodeks for administrative lovovertrædelser, såvel som i sager, der involverer strafansvar ved kørsel i spirituspåvirket tilstand (artikel 264 og 264.1 i straffeloven Kode for Den Russiske Føderation), bør man ikke glemme, at det administrative ansvar opstår i tilfælde af tilstedeværelsen af ​​narkotiske stoffer eller psykotrope stoffer i den menneskelige krop, uanset deres koncentration i den menneskelige krop, i blod og urin.

I lyset af ovenstående, identifikation inden for rammerne af lægemiddelundersøgelser, kemiske og toksikologiske undersøgelser, retskemiske undersøgelser af narkotika stoffer, psykotrope og giftige stoffer og stoffer, der forårsager forgiftning, selv på niveauet så at sige "detektionsgrænsen for den anvendte metode" er grundlaget for at pålægge føreren af ​​køretøjet administrativt eller strafferetligt ansvar efter relevante artikler i Den Russiske Føderations kodeks for administrative lovovertrædelser og/eller RF-kriminalkodeks.

Til orientering - " "

Kriterierne for lægemidlets antimikrobielle aktivitet er minimal hæmmende koncentration(MIC) og minimum bakteriedræbende koncentration(MBK). MIC er den laveste koncentration af antibiotika, der fuldstændig hæmmer in vitro synlig bakteriel vækst. Det udtrykkes i mg/l eller µg/ml. MBC er den laveste koncentration af et antibiotikum, der forårsager en bakteriedræbende virkning. For at bestemme det er det nødvendigt at udføre podning fra reagensglas, hvor der visuelt ikke er nogen vækst, på en tæt næringsagar, der ikke indeholder et antibiotikum. Denne indikator er af stor klinisk betydning. Baseret på metoden med serielle fortyndinger er der skabt mikrometoder, der involverer brugen af ​​et mindre volumen næringsmedium. Adskillige kommercielle kits er i øjeblikket tilgængelige til denne form for forskning, bestående af tørrede, stabiliserede fortyndinger af antibiotika i et næringsmedium, som fortyndes med en testmikrosuspension. Disse sæt kan opbevares under normale forhold, hvilket eliminerer behovet for at forberede fortyndinger af medier og antibiotika i laboratoriet. En anden fordel ved mikrofortyndingstest er, at de indgår i et automatiseret system.

Baseret på de opnåede data (diameteren af ​​væksthæmningszonen eller MIC-værdien) opdeles mikroorganismer i følsomme, moderat resistente og resistente. For at skelne mellem disse kategorier anvendes de såkaldte grænsekoncentrationer af antibiotika, som ikke er konstante værdier. De revideres i takt med, at mikroorganismepopulationens følsomhed ændres. Førende specialister (kemoterapeuter, mikrobiologer), som er medlemmer af særlige udvalg, er engageret i udvikling og revision af fortolkningskriterier. En af disse er National Committee for Clinical Laboratory Standards ( N ational C ommitteefor C linisk L aboratorium S tandards - NCCLS), organiseret i USA. I øjeblikket bruges NCCLS-standarderne som internationale standarder til evaluering af resultaterne af bestemmelse af bakteriers følsomhed i multicenter mikrobiologiske og kliniske undersøgelser.

Bestemmelse af bakteriers følsomhed over for antibiotika. Kriteriet for mikroorganismers følsomhed over for antibiotika er den minimale hæmmende koncentration (MIC) af antibiotikummet, som hæmmer væksten af ​​patogenet under standard eksperimentelle forhold.

For at bestemme lægemiddelresistens anvendes en daglig ren kultur af patogenet isoleret fra patientens krop og et standard næringsmedium (AGV eller Muller-Hinton agar) til dets inokulering.

Bestemmelsen af ​​mikroorganismers følsomhed over for antibiotika udføres ved diskdiffusionsmetoden eller ved fremgangsmåden med serielle fortyndinger af antibiotikummet i flydende eller faste medier.

Diskdiffusionsmetode. Bestemmelse af følsomhed over for antibiotika ved metoden med papirskiver er baseret på diffusionen af ​​antibiotikumet ind i næringsmediet. Koncentrationen af ​​antibiotika i skiverne er valgt således, at diametrene af væksthæmningszonerne for standardtestmikroorganismer svarer til internationale standarder. Denne koncentration svarer til den gennemsnitlige terapeutiske dosis for standardstammer af mikroorganismer.

Den forberedte suspension af mikroorganismer inokuleres på overfladen af ​​et specielt medium (AGV eller Mueller-Hinton agar) i petriskåle. Derefter, med en steril pincet, placeres standardpapirskiver imprægneret med opløsninger af forskellige antibiotika på den frøede overflade i lige stor afstand fra hinanden, fra kanterne og midten af ​​skålen (du kan også bruge specielle enheder og dispensere). Frøede kopper opbevares i en termostat ved en temperatur, der er optimal for væksten af ​​de undersøgte bakterier. Hvis bakterier er følsomme over for dette antibiotikum, dannes der en væksthæmningszone omkring disken. Diameteren af ​​væksthæmningszonen svarer til graden af ​​følsomhed af den undersøgte mikroorganisme over for dette antibiotikum. Det endelige resultat vurderes i henhold til specielle tabeller, som angiver diametrene af zonerne for væksthæmning af standardkulturer, følsomme, resistente og moderat resistente.

Diskmetoden giver ikke pålidelige data til bestemmelse af mikroorganismers følsomhed over for polypeptidantibiotika, der diffunderer dårligt ind i agar (for eksempel polymyxin, ristomycin). Denne metode tillader heller ikke at bestemme den minimale hæmmende koncentration af antibiotikummet.

Seriel fortyndingsmetode. Denne metode bestemmer minimumskoncentrationen af ​​det antibiotikum, der hæmmer væksten af ​​den undersøgte bakteriekultur (IPC, MIC). For at gøre dette skal du først forberede stamopløsningen, der indeholder en vis koncentration af antibiotika (µg/ml eller IE/ml) i et specielt opløsningsmiddel eller bufferopløsning. Yderligere fremstilles alle efterfølgende fortyndinger i bouillonen (i et volumen på 1 ml) ud fra hovedopløsningen, hvorefter 0,1 ml af den undersøgte bakteriesuspension indeholdende 106-107 bakterieceller pr. 1 ml tilsættes til hver fortynding. Tilsæt 1 ml bouillon (uden antibiotikum) og 0,1 ml bakteriesuspension (kulturkontrol) til det sidste glas. Afgrøderne inkuberes ved 37 0 C til næste dag, hvorefter resultaterne af forsøget på næringsmediets turbiditet noteres, sammenlignet med kontrollen. Det sidste rør med et gennemsigtigt næringsmedium indikerer en væksthæmning af den undersøgte bakteriekultur under påvirkning af den minimale hæmmende (inhiberende) koncentration (MIC, MIC) af det antibiotikum, der er indeholdt i det. For at vurdere den minimale bakteriedræbende koncentration (MBC) udsås der på et tæt næringsmedium uden antibiotika fra reagensglas uden vækst. MBC tages som minimumskoncentrationen af ​​det antibiotikum, der forårsager mikroorganismens død, hvilket er karakteriseret ved fraværet af vækst på petriskåle med et næringsmedium.

Metode til seriefortynding af et antibiotikum i et agarmedium. I dette tilfælde er det muligt at teste følsomheden over for forskellige koncentrationer af et givet antibiotikum af flere kulturer af mikroorganismer i et eksperiment. Forskellige fortyndinger af antibiotikummet fremstilles i et sterilt agarmedium. Til dette tilsættes den nødvendige mængde af den oprindelige antibiotikaopløsning, blandes grundigt og hældes i sterile petriskåle. Efter agaren er størknet, deles bunden af ​​koppen udefra i sektorer med en markør. Hver undersøgt kultur udsås med et slagtilfælde ved hjælp af en bakteriologisk løkke på en bestemt sektor i retter med forskellige koncentrationer af antibiotika. Podning af testkulturer på plader med forskellige koncentrationer af antibiotika kan udføres ved hjælp af en applikator, der gør det muligt at pode 12-15 kulturer samtidigt pr. plade. Derefter placeres kopperne i en termostat ved en temperatur, der er optimal for vækst og udvikling af de undersøgte bakterier. Resultaterne tages i betragtning ved tilstedeværelse eller fravær af bakterievækst i sammenligning med vækst på mediet i kontrolskålen. Bakterier anses for at være følsomme over for antibiotika i en koncentration, hvor deres vækst er fuldstændig undertrykt.

E-test metode. Denne metode kombinerer fordelene ved den serielle fortyndingsmetode og diskmetoden. I stedet for diske bruges strimler ("linealer") af filterpapir imprægneret med et antibiotikum, og i bunden af ​​strimlen vil antibiotikakoncentrationen være minimal, og i "toppen" - maksimal. Strimlerne anbringes på overfladen af ​​næringsagar, der er inokuleret med den undersøgte kultur. Hvis bakterier er følsomme over for virkningen af ​​dette lægemiddel, vises en ellipsoid zone med væksthæmning omkring de områder af strimlen, der indeholder dets hæmmende koncentrationer. Den numeriske værdi af antibiotikakoncentrationen i bunden af ​​denne zone angiver MIC for det antibiotikum for den afgrøde.

Til følsom omfatte stammer af mikroorganismer, hvis vækst hæmmes ved koncentrationer af lægemidlet, der findes i patientens blodserum, når der anvendes konventionelle doser af antibiotika.

Til moderat stabil omfatter stammer, hvis væksthæmning kræver koncentrationer, der skabes i blodserumet, når de maksimale doser af lægemidlet administreres.

bæredygtige er mikroorganismer, hvis vækst ikke undertrykkes af lægemidlet ved koncentrationer skabt i kroppen ved brug af de maksimalt tilladte doser.

Test spørgsmål.

Definer udtrykket "antibiotika". De vigtigste grupper af antibiotika, afhængigt af fremstillingsmetoden: naturlig, semisyntetisk, syntetisk. Navngiv den videnskabsmand, der udviklede teorien om kemoterapi. Hvilke egenskaber er afgørende ved valg af kemoterapeutisk lægemiddel? Hvad er et kemoterapeutisk indeks, skriv dets formel, hvad skal det være? Angiv de første antispirochetale lægemidler; det første antibakterielle lægemiddel og navnet på den videnskabsmand, der modtog det. Hvad er navnene på russiske videnskabsmænd, der først opdagede de antibakterielle egenskaber ved grøn skimmel. Navngiv den videnskabsmand, der studerede de antibakterielle egenskaber af svampen Penicillium og gjorde et forsøg på at isolere penicillin. Forskere, der først modtog penicillinpræparater. Producenter af antibiotika - giv eksempler. Klassificering af antibiotika efter oprindelse, kemisk sammensætning, virkningsspektrum. Antibiotikas virkningsmekanisme: mål (anvendelsespunkter for antibiotika fra forskellige grupper). Typer af handling - bakteriedræbende og bakteriostatisk; hvordan bestemmer man dem i et in vitro-eksperiment? Antivirale antibiotika, mekanismer for deres virkning. I hvilke enheder måles aktiviteten af ​​antibiotika? opbevaringsbetingelser for antibiotika.

Nævn og beskriv de mulige bivirkninger ved antibiotikabehandling. Definer begrebet lægemiddelresistens i mikrober. Typer af lægemiddelresistens. Naturlig og erhvervet (primær og sekundær). Genetiske mekanismer for lægemiddelresistens: kromosomalt og plasmid. Lægemiddelresistens fænotypiske mekanismer - navngiv og beskriv. Rationel brug af antibiotika - navngiv metoderne. Navngiv stofferne - hæmmere af enzymer, der ødelægger antibiotika. Beskriv metoder til bestemmelse af mikrobers følsomhed over for antibiotika.

Relevans

I oftalmisk praksis afhænger valget af et antibakterielt lægemiddel, som i andre tilfælde af antimikrobiel terapi, primært af patogenet og dets følsomhed over for antibiotika. Det anvendte antibakterielle lægemiddel skal være bakteriedræbende og have en lav minimal hæmmende koncentration (MIC). Dette er især vigtigt under moderne forhold med mikroorganismers konstant stigende resistens over for antibiotika. Udnævnelsen af ​​lægemidlet i doser, der ikke er i stand til at have en skadelig virkning på mikroorganismen, kan bidrage til den videre udvikling af mikroflora-resistens.

MIC er den laveste koncentration af et antibakterielt lægemiddel, der forårsager undertrykkelse af væksten af ​​mikroflora synlig for det blotte øje. Det er IPC'en, der gør det muligt mest præcist at karakterisere graden af ​​en mikroorganismes følsomhed over for et antibiotikum. Jo lavere MIC af lægemidlet, jo højere er mikrofloraens følsomhed over for det. Kun viden om IPC giver os mulighed for at løse spørgsmålet: når antibiotikummet, når det påføres topisk, lokaliseringszonerne af patogenet i en koncentration, der er tilstrækkelig til at undertrykke denne mikroorganisme? Det skal også bemærkes, at de mest udbredte antibakterielle lægemidler i oftalmologisk praksis (fluoroquinoloner og aminoglykosider) er dosisafhængige lægemidler, dvs. dødshastigheden for mikroorganismer stiger i direkte forhold til deres koncentration. I den videnskabelige litteratur er der tegn på en langsommere opnåelse af MIC for ofloxacin i fugten i øjets forkammer sammenlignet med levofloxacin. Det er også blevet bevist, at efter en enkelt instillation af levofloxacin er dets koncentration mange gange højere end MIC for alle mikroorganismer, der forårsager øjeninfektioner. Nye antibakterielle lægemidler bliver dog løbende introduceret i klinisk praksis, og i den tilgængelige litteratur er der praktisk talt ingen information om IPC, dvs. om den antimikrobielle effekt af hele rækken af ​​moderne antibiotika, der anvendes i oftalmologi, hvilket var årsagen til vores undersøgelse.

Mål

Bestem MIC for moderne antibiotika for den mest almindelige mikroflora.

materialer og metoder

For at bestemme MIC for antibiotika brugte vi Hi Comb MIC Test (registreringscertifikat fra Sundhedsministeriet i Den Russiske Føderation 2003/1664 dateret 23. december 2003). Testen består af strimler, hvorpå der er fastgjort skiver imprægneret med ikke én, men en række af faldende koncentrationer af det samme antibiotikum. Da vi udførte undersøgelsen, tog vi først indholdet af konjunktivhulen til podning på en simpel agar. Derefter blev en ren kultur af mikroorganismen isoleret og sået på det passende faste næringsmedium i en petriskål i form af en græsplæne. Derefter blev petriskåle inkuberet i en termostat ved en temperatur på 37º i 24 timer. Samtidig blev der dannet en ellipseformet mikroflora-retentionszone omkring teststrimlerne, hvilket gjorde det muligt at bestemme det antibakterielle lægemiddels MIC. MIC blev bestemt på en digital skala på en teststrimmel i området af minimumsdiameteren af ​​den elliptiske zone med væksthæmning af mikroflora. Vi bestemte MIC for de mest almindelige antibakterielle lægemidler i klinisk praksis - ciprofloxacin (Cipromed, Sentiss), ofloxacin (Floxal, Baush & Lomb), levofloxacin (Signicef, Sentiss), moxifloxacin (Vigamox, Alcon), gatifloxacin (Zimar, Allergan) og tobramycin (Tobrex, Alcon).

resultater

I alt 105 patienter på 2 måneder og derover blev undersøgt. op til 7 år med forskellige inflammatoriske sygdomme i det forreste øje: akut og kronisk conjunctivitis, blepharoconjunctivitis, nasolacrimal duct stenose kompliceret af kronisk dacryocystitis og bakteriel keratitis. Epidermal (43,9 %) og Staphylococcus aureus (22,9 %), streptokokker (15,1 %) samt gramnegativ mikroflora (18,1 %) blev fundet i afgrøder udledt fra børns konjunktivhule.

I alle testede antibakterielle lægemidler var MIC for epidermale stafylokokker den højeste. Den laveste MIC for epidermale stafylokokker blev fundet i lægemidlerne levofloxacin og moxifloxacin - henholdsvis 0,544 og 0,551 µg. Den maksimale MIC blev registreret af os i tobramycin (8,623 μg), dvs. dette lægemiddel var det mindst effektive mod Staphylococcus epidermidis. På trods af det faktum, at gatifloxacin er relativt nyligt brugt i klinisk praksis, var dets MIC ret højt - 1,555 mcg. MIC for ciprofloxacin og ofloxacin var lille - henholdsvis 1,023 og 1,191 µg.

MIC for alle antibakterielle lægemidler til Staphylococcus aureus var lavere end for epidermal. Samtidig viste levofloxacin (0,020 μg) sig at have den laveste MIC, dvs. til behandling af infektioner forårsaget af Staphylococcus aureus har dette lægemiddel vist sig at være det mest effektive. MIC for moxifloxacin (0,202 µg) og ofloxacin (0,240 µg) var også lavt, men 10 gange højere end MIC for levofloxacin. Den højeste MIC blev registreret af os i lægemidlet tobramycin (5,115 µg).

Følgende streptokokker blev isoleret fra børns konjunktivale hulrum: Streptococcus pneumoniae, Streptococcus viridans og Streptococcus haemolyticus. Den laveste MIC for alle streptokokker isoleret fra børn blev fundet i moxifloxacin - kun 0,006 μg. MIC for levofloxacin var også lille, men oversteg signifikant MIC for moxifloxacin - 0,135 µg. Den højeste MIC blev registreret for ciprofloxacin (1,246 µg) og den højeste for tobramycin (6,460 µg).

Gruppen af ​​gram-negative mikroorganismer isoleret fra børn inkluderede Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter brevis, Klebsiella pneumoniae og Serratia marcencens. Den laveste MIC for gram-negativ mikroflora blev fundet i ciprofloxacin - 0,034 µg. Lav MIC-score, dvs. høj effektivitet blev også noteret for levofloxacin - 0,051 mcg. MIC for ofloxacin og gatifloxacin var signifikant højere og næsten det samme - 0,096 og 0,102 µg. Den højeste MIC blev igen registreret for tobramycin (7.050 µg) (se figur).

Konklusion

Levofloxacin viste sig således at være det mest effektive antibakterielle lægemiddel i forhold til den hyppigst isolerede mikroflora hos børn. MIC af dette lægemiddel til streptokokker og gram-negative mikroorganismer viste sig også at være lavt, hvilket giver os mulighed for at anbefale et lægemiddel baseret på 0,5% levofloxacin Signicef ​​til behandling af alle inflammatoriske øjensygdomme af bakteriel natur.

Til behandling af inflammatoriske øjensygdomme forårsaget af streptokokker foretrækkes moxifloxacin, da dets MIC for streptokokker var den mindste. MIC for ciprofloxacin for al gramnegativ mikroflora viste sig at være den laveste, hvilket bekræfter den generelt anerkendte høje effektivitet af dette lægemiddel. Den højeste MIC for alle isolerede mikroorganismer blev fundet i tobramycin.

Kriterierne for lægemidlets antimikrobielle aktivitet er minimal hæmmende koncentration(IPC) og minimum bakteriedræbende koncentration(MBK). MIC er den laveste koncentration af antibiotika, som in vitro fuldstændig undertrykker synlig bakteriel vækst. Det udtrykkes i mg/l eller µg/ml. MBC er den laveste koncentration af et antibiotikum, der forårsager en bakteriedræbende virkning. For at bestemme det er det nødvendigt at inokulere fra reagensglas (visuelt er der ingen vækst) på en tæt næringsagar, der ikke indeholder et antibiotikum. Denne indikator er af stor klinisk betydning. Baseret på metoden med serielle fortyndinger er der skabt mikrometoder, der involverer brugen af ​​et mindre volumen næringsmedium. Adskillige kommercielle kits bliver i øjeblikket produceret til denne form for forskning, bestående af tørrede, stabiliserede fortyndinger af antibiotika, som fortyndes med en suspension af testmikroben. Disse sæt kan opbevares under normale forhold, hvilket eliminerer behovet for at forberede fortyndinger af medier og antibiotika i laboratoriet. En anden fordel ved mikrofortyndingstest er, at de indgår i et automatiseret system.

Baseret på de opnåede data (diameteren af ​​væksthæmningszonen eller værdien af ​​IPC) opdeles mikroorganismer i følsomme, moderat resistente og resistente. For at skelne mellem disse kategorier anvendes de såkaldte grænsekoncentrationer af antibiotika, som ikke er konstante værdier. De revideres i takt med, at mikroorganismepopulationens følsomhed ændres. Førende specialister (kemoterapeuter, mikrobiologer), som er medlemmer af særlige udvalg, er engageret i udvikling og revision af fortolkningskriterier. En af disse er National Committee for Clinical Laboratory Standards ( N ational C udvalg for C linisk L aboratorium S tandards - NCCLS), organiseret i USA. I øjeblikket bruges NCCLS-standarderne som internationale standarder til evaluering af resultaterne af bestemmelse af bakteriers følsomhed i multicenter mikrobiologiske og kliniske undersøgelser.

Bestemmelse af bakteriel modtagelighed for antibiotika

Kriteriet for mikroorganismers følsomhed over for antibiotika er den minimale hæmmende koncentration (MIC) eller den minimale hæmmende koncentration (MIC) af et antibiotikum, der forsinker væksten af ​​patogenet under standard eksperimentelle betingelser.

For at bestemme lægemiddelresistens anvendes en daglig ren kultur af patogenet isoleret fra patientens krop og et standard næringsmedium (AGV eller Muller-Hinton agar) til dets inokulering.

Bestemmelsen af ​​mikroorganismers følsomhed over for antibiotika udføres ved diskdiffusionsmetoden eller ved fremgangsmåden med serielle fortyndinger af antibiotikummet i flydende eller faste medier.

Diskdiffusionsmetode

Bestemmelse af følsomhed over for antibiotika ved metoden med papirskiver er baseret på diffusionen af ​​antibiotikumet ind i næringsmediet. Koncentrationen af ​​antibiotika i skiverne er valgt således, at diametrene af væksthæmningszonerne for standardtestmikroorganismer svarer til internationale standarder. Denne koncentration svarer til den gennemsnitlige terapeutiske dosis for standardstammer af mikroorganismer.

Den forberedte suspension af mikroorganismer inokuleres på overfladen af ​​et specielt medium (AGV eller Mueller-Hinton agar) i petriskåle. Derefter, med en steril pincet, placeres standardpapirskiver imprægneret med opløsninger af forskellige antibiotika på den frøede overflade i lige stor afstand fra hinanden, fra kanterne og midten af ​​skålen (du kan også bruge specielle enheder og dispensere). Frøede kopper opbevares i en termostat ved en temperatur, der er optimal for væksten af ​​de undersøgte bakterier. Hvis bakterier er følsomme over for dette antibiotikum, dannes der en væksthæmningszone omkring disken. Diameteren af ​​væksthæmningszonen svarer til graden af ​​følsomhed af den undersøgte mikroorganisme over for dette antibiotikum. Det endelige resultat vurderes i henhold til specielle tabeller, som angiver diametrene af zonerne for væksthæmning af standardkulturer, følsomme, resistente og moderat resistente.

Diskmetoden giver ikke pålidelige data til bestemmelse af mikroorganismers følsomhed over for polypeptidantibiotika, der diffunderer dårligt ind i agar (for eksempel polymyxin, ristomycin). Denne metode tillader heller ikke at bestemme den minimale hæmmende koncentration af antibiotikummet.