Minimalna koncentracija opojnih droga, psihotropnih supstanci, drugih supstanci koje izazivaju intoksikaciju u biološkom objektu. Minimalna inhibitorna koncentracija antibiotika (MIC) Minimalna inhibitorna koncentracija

Analiza sposobnosti bakterija da se razmnožavaju i rastu na podlozi koja sadrži opadajuću koncentraciju ljekovite supstance omogućava određivanje minimalne inhibitorne koncentracije antibiotika (MIC), koja inhibira ulogu bakterija in vitro (Tablica 3 (vet7 )). Vrijednost ove doze određuje izbor ljekovite supstance sposobne da postigne slične koncentracije in vivo i predstavlja osnovu za poređenje relativne osjetljivosti organizma u odnosu na druge lijekove. Smatra se da da bi se osigurala efikasnost izlaganja, koncentracija lijeka u žarištu infekcije treba biti najmanje jednaka vrijednosti minimalne inhibitorne koncentracije antibiotika. S druge strane, koncentracija lijeka u plazmi obično mora biti veća da bi se osigurala adekvatna koncentracija u tkivu. Međutim, neopravdano povećanje doze antimikrobnih sredstava kako bi se postigla minimalna doza antibiotika koja inhibira rast određene vrste bakterija in vitro može dovesti do nakupljanja lijeka u tijelu primatelja u toksičnim dozama.

"Kritični MIC" za određenu ljekovitu supstancu je najviša razumno sigurna koncentracija lijeka koja se može postići klinički prihvatljivom dozom i načinom primjene lijeka (Tablica 3(vet7)). MIC ovisi o specifičnoj vrsti bakterijske kulture i specifičnoj vrsti lijeka. Istovremeno, kritični MIC je specifičan za određenog primaoca i određenu drogu. Dakle, kritični MIC će biti isti za bilo koji organizam (Tabela 3(vet7)). Kritična koncentracija za određeni organizam može se razlikovati ovisno o vrsti životinje (zbog razlika u osjetljivosti ili obrascima distribucije lijeka) i određenom laboratoriju. Laboratoriju koja pruža metode kulture i podatke o osjetljivosti na antibiotike treba kontaktirati za kritične vrijednosti koje će se koristiti u njihovim studijama.

Na osnovu in vitro podataka o razblaženju, bakterija se klasifikuje kao osetljiva (S) na određenu lekovitu supstancu ako je MIC značajno ispod kritične vrednosti ovog indikatora. Rast patogenih mikroorganizama sa prosječnom (MS) ili intermedijarnom (IS) vrijednošću osjetljivosti inhibira se pri koncentracijama lijeka koje se približavaju kritičnoj vrijednosti MIC. Takve bakterije mogu izazvati negativne reakcije organizma pacijenta ili nemaju nikakvog utjecaja na njega. MIC za rezistentne (R) bakterije premašuje kritičnu vrijednost minimalne doze. Malo je vjerovatno da će se postići efektivna vrijednost koncentracije takvog lijeka u tijelu pacijenta koji utječe na određeni mikroorganizam. U takvim slučajevima, rizik od akumulacije lijeka u toksičnim dozama također može biti veći od potencijalne koristi terapije. Kritičnu vrijednost minimalne doze antibiotika nove generacije koji inhibiraju rast bakterija je u nekim slučajevima teže odrediti zbog prelaska na profesionalno fleksibilno označavanje raspona doza.

Ljekovite supstance moraju biti odabrane tako da kada se koriste u skladu sa režimom koji sprečava nakupljanje supstance u toksičnim dozama, bude moguće postići maksimalnu koncentraciju lekovite supstance u plazmi koja značajno prelazi MIC. Mnoge bakterije će biti osjetljive na djelovanje određenog lijeka u koncentracijama znatno ispod kritične minimalne doze. Razlika između kritične vrijednosti i intrinzične MIC vrijednosti može se koristiti za poređenje relativne efikasnosti različitih antimikrobnih sredstava. Na primjer, za amikacin, kritična vrijednost je 32 µg/mL, tako da je E. coli sa MIC vrijednošću od 2 µg/mL relativno osjetljivija na amikacin od E. coli sa MIC vrijednošću od 16 µg/mL. Obje vrste treba smatrati osjetljivim (iako se za drugu vrstu može smatrati da ima prosječnu osjetljivost), međutim, čini se da je rast bakterija prve vrste u većoj mjeri inhibiran. Ako ista vrsta E. coli sa MIC vrijednošću od 2 µg/mL za amoksicilin ima vrijednost MIC od 16 µg/mL (sa kritičnom vrijednošću od 32 µg/mL), čini se da će rast ovog mikroorganizma lakše se inhibiraju primjenom amikacina umjesto amoksicilina jer je MIC vrijednost amikacina dalje od njegove kritične MIC vrijednosti nego MIC vrijednost amoksicilina.

Iako se razlike između vrijednosti MIC-a za određenu bakterijsku vrstu i određeni lijek (16 ili 32) mogu činiti prilično velike (posebno u kontekstu granične vrijednosti lijeka u plazmi), ova razlika odgovara samo jednom rješenju u epruveti . Ovo je primjer opasnosti od precjenjivanja podataka o osjetljivosti. Ako je MIC vrijednost određenog organizma dovoljno blizu kritičnoj vrijednosti, onda zbog mogućih razlika u interpretaciji ovom mikroorganizmu može biti dodijeljen stepen osjetljivosti "S" ili "MS" u jednoj laboratoriji, a "R" u drugoj. Ovakva moguća odstupanja u procjeni jedan su od razloga zašto treba izbjegavati upotrebu lijekova za koje određeni organizam ima "MS" osjetljivost (ili ako je vrijednost MIC blizu kritične), osim ako koncentracija lijeka na mjestu infekcija može daleko premašiti MIC vrijednost utvrđenu in vitro analizom. Dobar primjer bi bila upotreba lijekova koje izlučuju bubrezi za liječenje infekcije urinarnog trakta ili upotreba lijekova koji se izlučuju putem žuči za liječenje infekcije bilijarnog trakta. Akumulacija određenih lijekova u leukocitima (fluorokinoloni, makrolidi) također može rezultirati koncentracijama lijeka u tkivima koje su znatno iznad MIC (ili kritičnog MIC) uprkos nižoj koncentraciji u plazmi.

MIC bakterija se može promijeniti tijekom narednih infekcija istom bakterijskom vrstom, a može se promijeniti i tokom samog procesa infekcije. Povećanje vrijednosti MIC-a može jednostavno odražavati drugačiji pristup evaluaciji rezultata analize (naročito ako se razlike otkriju samo pri razrjeđivanju in vitro), ali se također može smatrati posljedicom razvoja rezistencije na određenu ljekovitu supstancu. U takvim slučajevima, tok antimikrobne terapije može se promeniti upotrebom dodatnog leka ili prelaskom na novi, efikasniji lek. Kod polimikrobnih infekcija, MIC vrijednost određenog lijeka će vjerovatno biti različita za svaku inficirajuću bakteriju. Smatra se da je lakše spriječiti rast bakterija s niskom MIC vrijednosti za određenu ljekovitu supstancu nego rast mikroorganizma s višom MIC vrijednosti za istu ljekovitu supstancu.

Tabela 2 Dodatka Proceduri za provođenje medicinskog pregleda zbog intoksikacije (alkoholne, narkotičke ili druge otrove), odobrene naredbom Ministarstva zdravlja Ruske Federacije (nacrt), "Nivoi graničnih vrijednosti za sadržaj opojnih droga, psihotropnih supstanci, drugih hemikalija i njihovih metabolita, utvrđenih metodama potvrdne analize.

Bilješka: nivo praga- ovo je minimalna koncentracija tvari (njenog metabolita) u biološkom objektu, određena metodama preliminarne ili potvrdne analize, nakon čijeg otkrivanja se rezultat studije smatra pozitivnim.

Zapravo, slična tabela pod nazivom " Nivoi praga za potvrdne testove u analizi urina"daje se u Centralnoj hemijsko-toksikološkoj laboratoriji na Odsjeku za analitičku i forenzičku toksikologiju Državne obrazovne ustanove visokog stručnog obrazovanja Prvog moskovskog državnog medicinskog univerziteta po imenu I.M. Sechenova (TsKhTL GOU VPO Prvi moskovski državni medicinski univerzitet po imenu I.M. Sechenov) Ministarstva zdravlja Ruske Federacije od 30. avgusta 2011. br. 179-25/12I, gdje su, međutim, između ostalog, koncentracije fenobarbitala (1 000 ng/ml), drugih tvari iz grupe barbiturata (100 ng/ml) i kotinin (100 ng/ml) su indicirani). Prema ovom TsKhTL GOU VPO Prvi Moskovski državni medicinski univerzitet. I. M. Sechenov, u skladu sa stavom 2 naredbe Ministarstva zdravlja i socijalnog razvoja Ruske Federacije od 27. januara 2006. br. 40 „O organizaciji hemijskih i toksikoloških studija u analitičkoj dijagnostici prisustva u ljudskom organizmu alkohola, opojnih droga, psihotropnih i drugih toksičnih supstanci“, izradio je i odobrio uslove za sprovođenje hemijsko-toksikoloških studija u analitičkoj dijagnostici prisustva opojnih droga, psihotropnih i drugih toksičnih supstanci u ljudskom organizmu.

Konkretno, prema stavu 12. Informativnog pisma, prilikom obavljanja medicinskog pregleda vozača vozila, testiranja učenika, izvođenja hemijskih i toksikoloških studija kada se građani prijave iu drugim slučajevima utvrđenim zakonom, pregled oralne tečnosti (sline) je neprihvatljiv. , jer ne omogućava pouzdano utvrđivanje činjenice prisutnosti opojnih droga, psihotropnih i drugih toksičnih supstanci u ljudskom tijelu. Kontrolisane supstance se mogu otkriti u oralnoj tečnosti (sline) u vremenskom intervalu koji ne prelazi nekoliko sati od trenutka konzumiranja.

Zahtjevi za tehničku opremu koja se koristi za otkrivanje opojnih droga, psihotropnih i drugih toksičnih supstanci (njihovih metabolita) u uzorcima urina tokom preliminarnih hemijskih i toksikoloških ispitivanja (Prilog br. 1 Uputstva: Pravila za provođenje hemijskih i toksikoloških ispitivanja na prisustvo tijela studenata u opšteobrazovnim organizacijama i stručnim obrazovnim organizacijama, kao i obrazovnim organizacijama visokog obrazovanja u cilju ranog otkrivanja nedozvoljene konzumacije opojnih droga i psihotropnih supstanci opojnih droga, psihotropnih i drugih toksičnih supstanci (njihovih metabolita) / Programer: Udruženje specijalista i organizacija laboratorijske službe "Federacija laboratorijske medicine" koju uređuju glavni slobodni specijalista za analitičku i forenzičku toksikologiju Ministarstva zdravlja Rusije, doktor hemije, profesor B.N. Izotov i glavni slobodni specijalista za kliničku o laboratorijskoj dijagnostici Ministarstva zdravlja Rusije, doktor medicinskih nauka, profesor A. G. Kochetov // Moskva, 2015.)

Zahtjevi za tehnička sredstva koja se koriste za otkrivanje opojnih droga, psihotropnih i drugih toksičnih supstanci (njihovih metabolita) u uzorcima urina pri provođenju potvrdnih hemijsko-toksikoloških studija (Prilog br. 2 gore navedenom izvoru)

Istovremeno, prilikom odbrane u slučajevima administrativnih prekršaja iz članova 12.8 i 12.27, dio 3 Zakona o upravnim prekršajima Ruske Federacije, kao iu slučajevima koji uključuju krivičnu odgovornost prilikom vožnje u pijanom stanju (članovi 264. i 264.1. Krivični zakon Ruske Federacije), ne treba zaboraviti da ta upravna odgovornost nastaje u slučaju prisustva opojnih droga ili psihotropnih supstanci u ljudskom tijelu, bez obzira na njihovu koncentraciju u ljudskom tijelu, u krvi i urinu.

S obzirom na navedeno, identifikacija u okviru ispitivanja droga, hemijskih i toksikoloških studija, forenzičko-hemijskih studija narkotika droge, psihotropne i otrovne supstance, te supstance koje izazivaju intoksikaciju, čak i na nivou, da tako kažem, „granične detekcije upotrebljene metode“ je osnov za privođenje vozača vozila administrativnoj ili krivičnoj odgovornosti po zakonu. relevantni članovi Zakona o upravnim prekršajima Ruske Federacije i / ili Krivičnog zakona RF.

Za informaciju - " "

Kriterijumi za antimikrobnu aktivnost lijeka su minimalna inhibitorna koncentracija(MIC) i minimalna baktericidna koncentracija(MBK). MIC je najniža koncentracija antibiotika koja potpuno inhibira in vitro vidljivo rast bakterija. Izražava se u mg/l ili µg/ml. MBC je najniža koncentracija antibiotika koji uzrokuje baktericidni učinak. Da bi se to utvrdilo, potrebno je izvršiti zasijavanje iz epruveta u kojima vizualno nema rasta, na gustom nutritivnom agaru koji ne sadrži antibiotik. Ovaj indikator je od velikog kliničkog značaja. Na osnovu metode serijskih razblaženja kreirane su mikrometode koje podrazumevaju upotrebu manje zapremine hranljive podloge. Trenutno se proizvode brojni komercijalni setovi za ovu vrstu istraživanja, koji se sastoje od osušenih, stabiliziranih razrjeđenja antibiotika u hranljivoj podlozi, koji se razblažuju suspenzijom test mikroba. Ovi kompleti se mogu čuvati u normalnim uslovima, eliminišući potrebu za pripremanjem razblaženja medija i antibiotika u laboratoriji. Još jedna prednost mikrodilucionih testova je to što su uključeni u automatizovani sistem.

Na osnovu dobijenih podataka (prečnik zone inhibicije rasta ili MIC vrednost), mikroorganizmi se dele na osetljive, srednje rezistentne i rezistentne. Za razlikovanje ovih kategorija koriste se takozvane granične koncentracije antibiotika, koje nisu konstantne vrijednosti. Oni se revidiraju kako se mijenja osjetljivost populacije mikroorganizama. Na izradi i reviziji kriterijuma tumačenja angažovani su vodeći stručnjaci (hemoterapeuti, mikrobiolozi) koji su članovi posebnih komisija. Jedan od njih je Nacionalni komitet za kliničke laboratorijske standarde ( N ational C ommitteefor C linijski L laboratorija S tandardi - NCCLS), organizovan u SAD. Trenutno se NCCLS standardi koriste kao međunarodni standardi za evaluaciju rezultata određivanja osjetljivosti bakterija u multicentričnim mikrobiološkim i kliničkim studijama.

Određivanje osjetljivosti bakterija na antibiotike. Kriterijum za osjetljivost mikroorganizama na antibiotike je minimalna inhibitorna koncentracija (MIC) antibiotika, koja usporava rast patogena u standardnim eksperimentalnim uvjetima.

Za određivanje rezistencije na lijekove koristi se dnevna čista kultura patogena izolirana iz tijela pacijenta i standardna hranjiva podloga (AGV ili Muller-Hinton agar) za njenu inokulaciju.

Određivanje osjetljivosti mikroorganizama na antibiotike vrši se metodom disk difuzije ili metodom serijskih razrjeđenja antibiotika u tekućim ili čvrstim medijima.

Metoda disk difuzije. Određivanje osjetljivosti na antibiotike metodom papirnih diskova zasniva se na difuziji antibiotika u hranljivi medij. Koncentracija antibiotika u diskovima je odabrana tako da prečnici zona inhibicije rasta standardnih test mikroorganizama odgovaraju međunarodnim standardima. Ova koncentracija odgovara prosječnoj terapijskoj dozi za standardne sojeve mikroorganizama.

Pripremljena suspenzija mikroorganizama se inokulira na površinu posebnog medijuma (AGV ili Mueller-Hinton agar) u Petrijevim posudama. Zatim se sterilnom pincetom na zasijanu površinu postavljaju standardni papirnati diskovi impregnirani rastvorima raznih antibiotika na jednakoj udaljenosti jedan od drugog, od rubova i središta posude (možete koristiti i posebne uređaje i dozatore). Čašice za sjemenje se drže u termostatu na temperaturi optimalnoj za rast ispitivanih bakterija. Ako su bakterije osjetljive na ovaj antibiotik, tada se oko diska formira zona inhibicije rasta. Prečnik zone inhibicije rasta odgovara stepenu osetljivosti ispitivanog mikroorganizma na ovaj antibiotik. Konačni rezultat se vrednuje prema posebnim tabelama, koje ukazuju na prečnike zona inhibicije rasta standardnih kultura, osetljivih, rezistentnih i srednje rezistentnih.

Disk metoda ne daje pouzdane podatke za određivanje osjetljivosti mikroorganizama na polipeptidne antibiotike koji slabo difundiraju u agar (na primjer, polimiksin, ristomicin). Također, ova metoda ne dozvoljava određivanje minimalne inhibitorne koncentracije antibiotika.

Metoda serijskog razrjeđivanja. Ova metoda određuje minimalnu koncentraciju antibiotika koja inhibira rast proučavane bakterijske kulture (IPC, MIC). Da biste to učinili, prvo pripremite osnovni rastvor koji sadrži određenu koncentraciju antibiotika (µg/ml ili IU/ml) u posebnom rastvaraču ili puferskom rastvoru. Nadalje, sva naredna razrjeđenja u bujonu (u zapremini od 1 ml) pripremaju se iz glavne otopine, nakon čega se u svako razrjeđenje dodaje 0,1 ml ispitivane bakterijske suspenzije koja sadrži 10 6 -10 7 bakterijskih ćelija po 1 ml. Dodajte 1 ml bujona (bez antibiotika) i 0,1 ml bakterijske suspenzije (kontrola kulture) u posljednju epruvetu. Usjevi se inkubiraju na 37 0 C do narednog dana, nakon čega se konstatuju rezultati ogleda o zamućenosti hranljive podloge u poređenju sa kontrolom. Posljednja epruveta sa prozirnim hranljivim podlogom ukazuje na usporavanje rasta ispitivane bakterijske kulture, pod uticajem minimalne inhibitorne (inhibitorne) koncentracije (MIC, MIC) antibiotika koji se u njoj nalazi. Za procjenu minimalne baktericidne koncentracije (MBC), sjetva se vrši na gustu hranjivu podlogu bez antibiotika iz epruveta bez rasta. MBC se uzima kao minimalna koncentracija antibiotika koja uzrokuje smrt mikroorganizma, koju karakterizira izostanak rasta na Petrijevim posudama s hranljivom podlogom.

Metoda serijskih razblaženja antibiotika u agar podlozi. U tom slučaju moguće je u jednom eksperimentu ispitati osjetljivost nekoliko kultura mikroorganizama na različite koncentracije određenog antibiotika. Različita razrjeđenja antibiotika pripremaju se u sterilnom agar mediju. Za to mu se dodaje potrebna količina početne otopine antibiotika, temeljito se promiješa i sipa u sterilne Petrijeve posude. Nakon što se agar stvrdne, dno čaše se sa spoljne strane deli na sektore markerom. Svaka proučavana kultura se zasijava potezom pomoću bakteriološke petlje na određenom sektoru u posudama s različitim koncentracijama antibiotika. Inokulacija test kultura na ploče sa različitim koncentracijama antibiotika može se obaviti pomoću aplikatora koji omogućava da se 12-15 kultura istovremeno inokulira po ploči. Zatim se čaše stavljaju u termostat na temperaturu koja je optimalna za rast i razvoj proučavanih bakterija. Rezultati se uzimaju u obzir prisustvom ili odsustvom rasta bakterija u poređenju sa rastom na podlozi u kontrolnoj posudi. Bakterije se smatraju osjetljivim na antibiotik u koncentraciji pri kojoj je njihov rast potpuno potisnut.

Metoda E-testiranja. Ova metoda kombinira prednosti metode serijskog razrjeđivanja i metode diska. Umjesto diskova koriste se trake ("ravnala") filter papira impregniranog antibiotikom, a na dnu trake koncentracija antibiotika bit će minimalna, a na "vrhu" - maksimalna. Trake se postavljaju na površinu hranljivog agara inokulisane kulturom koja se proučava. Ako su bakterije osjetljive na djelovanje ovog lijeka, oko područja trake koja sadrži njegove inhibitorne koncentracije pojavljuje se elipsoidna zona inhibicije rasta. Numerička vrijednost koncentracije antibiotika u osnovi ove zone ukazuje na MIC tog antibiotika za tu kulturu.

To osjetljivo uključuju sojeve mikroorganizama čiji je rast inhibiran pri koncentracijama lijeka koji se nalaze u pacijentovom krvnom serumu kada se koriste konvencionalne doze antibiotika.

To umjereno stabilan uključuju sojeve čija inhibicija rasta zahtijeva koncentracije koje se stvaraju u krvnom serumu kada se daju maksimalne doze lijeka.

održivo su mikroorganizmi čiji rast nije potisnut lijekom u koncentracijama koje se stvaraju u tijelu pri korištenju maksimalno dopuštenih doza.

Test pitanja.

Definirajte pojam "antibiotici". Glavne grupe antibiotika, ovisno o načinu pripreme: prirodni, polusintetički, sintetički. Imenujte naučnika koji je razvio teoriju hemoterapije. Koja svojstva su presudna pri odabiru hemoterapeutskog lijeka? Šta je kemoterapeutski indeks, napišite njegovu formulu, kakav bi trebao biti? Navedite prve antispirohetalne lijekove; prvi antibakterijski lijek i ime naučnika koji ga je primio. Kako se zovu ruski naučnici koji su prvi otkrili antibakterijska svojstva zelene plijesni. Imenujte naučnika koji je proučavao antibakterijska svojstva gljive Penicillium i pokušao da izoluje penicilin. Naučnici koji su prvi primili preparate penicilina. Proizvođači antibiotika – navedite primjere. Klasifikacija antibiotika prema porijeklu, hemijskom sastavu, spektru djelovanja. Mehanizam djelovanja antibiotika: mete (tačke primjene antibiotika različitih grupa). Vrste djelovanja - baktericidno i bakteriostatsko; kako ih odrediti u in vitro eksperimentu? Antivirusni antibiotici, mehanizmi njihovog djelovanja. U kojim jedinicama se mjeri aktivnost antibiotika? Uslovi skladištenja antibiotika.

Navedite i opišite moguće nuspojave terapije antibioticima. Definirajte pojam rezistencije na lijekove kod mikroba. Vrste rezistencije na lijekove. Prirodni i stečeni (primarni i sekundarni). Genetski mehanizmi rezistencije na lijekove: hromozomski i plazmidni. Fenotipski mehanizmi rezistencije na lijekove - imenovati i opisati. Racionalna upotreba antibiotika - navedite metode. Navedite lijekove - inhibitore enzima koji uništavaju antibiotike. Opisati metode za određivanje osjetljivosti mikroba na antibiotike.

Relevantnost

U oftalmološkoj praksi izbor antibakterijskog lijeka, kao iu drugim slučajevima antimikrobne terapije, prvenstveno ovisi o patogenu i njegovoj osjetljivosti na antibiotike. Antibakterijski lijek koji se koristi mora biti baktericidan i imati nisku minimalnu inhibitornu koncentraciju (MIC). Ovo je posebno važno u savremenim uslovima sa stalno rastućom otpornošću mikroorganizama na antibiotike. Imenovanje lijeka u dozama koje ne mogu imati štetan učinak na mikroorganizam može doprinijeti daljnjem razvoju rezistencije mikroflore.

MIC je najniža koncentracija antibakterijskog lijeka koji uzrokuje supresiju rasta mikroflore vidljive golim okom. Upravo IPC omogućava najpreciznije opisivanje stepena osjetljivosti mikroorganizma na antibiotik. Što je niži MIC lijeka, to je veća osjetljivost mikroflore na njega. Samo poznavanje IPC-a nam omogućava da riješimo pitanje: da li antibiotik, kada se primjenjuje lokalno, dospijeva u zone lokalizacije patogena u koncentraciji dovoljnoj da suzbije ovaj mikroorganizam? Također treba napomenuti da su antibakterijski lijekovi koji se najčešće koriste u oftalmološkoj praksi (fluorokinoloni i aminoglikozidi) lijekovi zavisni od doze, tj. stopa odumiranja mikroorganizama raste direktno proporcionalno njihovoj koncentraciji. U naučnoj literaturi postoje dokazi o sporijem postizanju MIC ofloksacina u vlazi prednje očne komore u odnosu na levofloksacin. Također je dokazano da je nakon jedne instilacije levofloksacina njegova koncentracija višestruko veća od MIC za sve mikroorganizme koji uzrokuju infekcije oka. Međutim, novi antibakterijski lijekovi se stalno uvode u kliničku praksu, a u dostupnoj literaturi praktički nema podataka o IPC, tj. o antimikrobnoj efikasnosti čitavog spektra savremenih antibiotika koji se koriste u oftalmologiji, što je i bio povod našeg istraživanja.

Target

Odredite MIC savremenih antibiotika za najčešću mikrofloru.

Materijal i metode

Za određivanje MIC antibiotika koristili smo Hi Comb MIC test (potvrda o registraciji Ministarstva zdravlja Ruske Federacije 2003/1664 od 23. decembra 2003.). Test se sastoji od traka na koje su pričvršćeni diskovi impregnirani ne jednom već nizom opadajućih koncentracija istog antibiotika. Prilikom izvođenja studije prvo smo uzimali sadržaj konjuktivalne šupljine za inokulaciju na jednostavni agar. Zatim je izolirana čista kultura mikroorganizma i posijana na odgovarajuću čvrstu hranjivu podlogu u Petrijevoj posudi u obliku travnjaka. Zatim su Petrijeve zdjelice inkubirane u termostatu na temperaturi od 37º tokom 24 sata. Istovremeno, oko test traka je formirana zona zadržavanja mikroflore u obliku elipse, što je omogućilo određivanje MIC antibakterijskog lijeka. MIC je određen na digitalnoj skali na test traci u području minimalnog prečnika eliptične zone inhibicije rasta mikroflore. Utvrdili smo MIC-ove najčešćih antibakterijskih lijekova u kliničkoj praksi - ciprofloksacina (Cipromed, Sentiss), ofloksacina (Floxal, Baush & Lomb), levofloksacina (Signicef, Sentiss), moksifloksacina (Vigamox, Alcon), gatifloksacina (Zimar), All i tobramicin (Tobrex, Alcon).

rezultate

Pregledano je 105 pacijenata u dobi od 2 mjeseca i više. do 7 godina sa raznim upalnim oboljenjima prednjeg oka: akutnim i kroničnim konjuktivitisom, blefarokonjunktivitisom, stenozom nasolakrimalnog kanala komplikovanom kroničnim dakriocistitisom i bakterijskim keratitisom. Epidermalni (43,9%) i Staphylococcus aureus (22,9%), streptokoki (15,1%), kao i gram-negativna mikroflora (18,1%) pronađeni su u usevima ispuštenim iz konjuktivalne šupljine djece.

Kod svih testiranih antibakterijskih lijekova MIC za epidermalni stafilokok bio je najveći. Najniži MIC za epidermalni stafilokok pronađen je u lijekovima levofloksacin i moksifloksacin - 0,544 i 0,551 µg, respektivno. Maksimalni MIC zabilježili smo kod tobramicina (8,623 μg), tj. ovaj lijek je bio najmanje efikasan protiv Staphylococcus epidermidis. Unatoč činjenici da se gatifloksacin relativno nedavno koristi u kliničkoj praksi, njegov MIC je bio prilično visok - 1,555 mcg. MIC ciprofloksacina i ofloksacina bio je mali - 1,023 i 1,191 µg, respektivno.

MIC svih antibakterijskih lijekova za Staphylococcus aureus bio je niži nego za epidermalni. Istovremeno, pokazalo se da levofloksacin (0,020 μg) ima najniži MIC, tj. za liječenje infekcija uzrokovanih Staphylococcus aureusom, ovaj lijek se pokazao najefikasnijim. MIC moksifloksacina (0,202 µg) i ofloksacina (0,240 µg) je također bio nizak, ali 10 puta veći od MIC-a levofloksacina. Najveći MIC zabilježili smo kod lijeka tobramicin (5,115 µg).

Iz konjuktivne šupljine djece izolovani su sljedeći streptokoki: Streptococcus pneumoniae, Streptococcus viridans i Streptococcus haemolyticus. Najniži MIC za sve streptokoke izolovane od djece pronađen je u moksifloksacinu - samo 0,006 μg. MIC levofloksacina je takođe bio mali, ali je značajno premašio MIC moksifloksacina - 0,135 µg. Najveći MIC je zabilježen za ciprofloksacin (1,246 µg), a najveći za tobramicin (6,460 µg).

Grupa gram-negativnih mikroorganizama izolovanih od djece uključivala je Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter brevis, Klebsiella pneumoniae i Serratia marcencens. Najniži MIC za gram-negativnu mikrofloru pronađen je u ciprofloksacinu - 0,034 μg. Niski MIC rezultati, tj. visoka efikasnost je također zabilježena za levofloksacin - 0,051 mcg. MIC ofloksacina i gatifloksacina bio je značajno veći i skoro isti - 0,096 i 0,102 µg. Najviši MIC ponovo je zabilježen za tobramicin (7,050 µg).

Zaključak

Tako se pokazalo da je levofloksacin najefikasniji antibakterijski lijek u odnosu na najčešće izoliranu mikrofloru kod djece. MIC ovog lijeka za streptokoke i gram-negativne mikroorganizme također se pokazao niskim, što nam omogućava da preporučimo lijek na bazi 0,5% levofloksacina Signicef ​​za liječenje svih upalnih bolesti oka bakterijske prirode.

Za liječenje upalnih bolesti oka uzrokovanih streptokokom, poželjan je moksifloksacin, jer je njegov MIC za streptokoke bio najmanji. Pokazalo se da je MIC ciprofloksacina za svu gram-negativnu mikrofloru najniži, što potvrđuje općepriznatu visoku efikasnost ovog lijeka. Najveći MIC za sve izolovane mikroorganizme pronađen je u tobramicinu.

Kriterijumi za antimikrobnu aktivnost lijeka su minimalna inhibitorna koncentracija(IPC) i minimalna baktericidna koncentracija(MBK). MIC je najniža koncentracija antibiotika koji in vitro potpuno potiskuje vidljivo rast bakterija. Izražava se u mg/l ili µg/ml. MBC je najniža koncentracija antibiotika koji uzrokuje baktericidni učinak. Da bi se to utvrdilo, potrebno je inokulirati iz epruveta (vizualno nema rasta) na gustom nutritivnom agaru koji ne sadrži antibiotik. Ovaj indikator je od velikog kliničkog značaja. Na osnovu metode serijskih razblaženja kreirane su mikrometode koje podrazumevaju upotrebu manje zapremine hranljive podloge. Trenutno su dostupni brojni komercijalni setovi za ovu vrstu istraživanja, koji se sastoje od osušenih, stabiliziranih razrjeđenja antibiotika, koji se razblažuju suspenzijom test mikroba. Ovi kompleti se mogu čuvati u normalnim uslovima, eliminišući potrebu za pripremanjem razblaženja medija i antibiotika u laboratoriji. Još jedna prednost mikrodilucionih testova je to što su uključeni u automatizovani sistem.

Na osnovu dobijenih podataka (prečnik zone retardacije rasta ili vrednost IPC), mikroorganizmi se dele na osetljive, srednje rezistentne i rezistentne. Za razlikovanje ovih kategorija koriste se takozvane granične koncentracije antibiotika, koje nisu konstantne vrijednosti. Oni se revidiraju kako se mijenja osjetljivost populacije mikroorganizama. Na izradi i reviziji kriterijuma tumačenja angažovani su vodeći stručnjaci (hemoterapeuti, mikrobiolozi) koji su članovi posebnih komisija. Jedan od njih je Nacionalni komitet za kliničke laboratorijske standarde ( N ational C komitet za C linijski L laboratorija S tandardi - NCCLS), organizovan u SAD. Trenutno se NCCLS standardi koriste kao međunarodni standardi za evaluaciju rezultata određivanja osjetljivosti bakterija u multicentričnim mikrobiološkim i kliničkim studijama.

Određivanje osjetljivosti bakterija na antibiotike

Kriterijum za osjetljivost mikroorganizama na antibiotike je minimalna inhibitorna koncentracija (MIC) ili minimalna inhibitorna koncentracija (MIC) antibiotika koja usporava rast patogena u standardnim eksperimentalnim uvjetima.

Za određivanje rezistencije na lijekove koristi se dnevna čista kultura patogena izolirana iz tijela pacijenta i standardna hranjiva podloga (AGV ili Muller-Hinton agar) za njenu inokulaciju.

Određivanje osjetljivosti mikroorganizama na antibiotike vrši se metodom disk difuzije ili metodom serijskih razrjeđenja antibiotika u tekućim ili čvrstim medijima.

Metoda disk difuzije

Određivanje osjetljivosti na antibiotike metodom papirnih diskova zasniva se na difuziji antibiotika u hranljivi medij. Koncentracija antibiotika u diskovima je odabrana tako da prečnici zona inhibicije rasta standardnih test mikroorganizama odgovaraju međunarodnim standardima. Ova koncentracija odgovara prosječnoj terapijskoj dozi za standardne sojeve mikroorganizama.

Pripremljena suspenzija mikroorganizama se inokulira na površinu posebnog medijuma (AGV ili Mueller-Hinton agar) u Petrijevim posudama. Zatim se sterilnom pincetom na zasijanu površinu postavljaju standardni papirnati diskovi impregnirani rastvorima raznih antibiotika na jednakoj udaljenosti jedan od drugog, od rubova i središta posude (možete koristiti i posebne uređaje i dozatore). Čašice za sjemenje se drže u termostatu na temperaturi optimalnoj za rast ispitivanih bakterija. Ako su bakterije osjetljive na ovaj antibiotik, tada se oko diska formira zona inhibicije rasta. Prečnik zone inhibicije rasta odgovara stepenu osetljivosti ispitivanog mikroorganizma na ovaj antibiotik. Konačni rezultat se vrednuje prema posebnim tabelama, koje ukazuju na prečnike zona inhibicije rasta standardnih kultura, osetljivih, rezistentnih i srednje rezistentnih.

Disk metoda ne daje pouzdane podatke za određivanje osjetljivosti mikroorganizama na polipeptidne antibiotike koji slabo difundiraju u agar (na primjer, polimiksin, ristomicin). Također, ova metoda ne dozvoljava određivanje minimalne inhibitorne koncentracije antibiotika.